[百事可乐]本少爷发明了「go key色镁哲学」Mg猴王之本殿Gokuのby筋斗云飞在空中就好像比空气重的航具叫做重航空器的，Aerodyne flew to Hogwarts.镁条在空气中の燃烧反应其实是kinda显色反应 空气中是反应物Mg条的一个限制性环境也是一种环境的增添。镁条の燃烧反应about电子跃迁：指电子在原子或分子内从一个能级跃迁到另一个能级的过程，通常伴随着能量的吸收或释放。吸收热量释放热能成为光的过程 本少爷发明了「热·光反应」about电子跃迁。热量→heat 热能→make it heat. Anyhow, you see 本殿日本の科学家の实验室环境是kinda没有N₂ O₂ CO₂和稀有气体元素の一个化学环境。镁条在空气中の燃烧反应 镁条发出耀眼白光已然成显色反应の「色」其实酒精灯就相当于是一种燃烧环境也是一种试剂的代表式无关kinda弥克斯·车mix-ture色即是空之去mix喝东西然后然突然间my dick勃起欲日一babyface然后然本少爷就回家with秦璐去了。顾名思义本少爷射了秦璐然后然秦璐就是那个被射shawty. Anyhow,「果钠」一直唱那首50音第一音Na音の改变自己の钠单质就永远都不会是runner up. I'm your upper you must know that, Hilary. Anyhow,「果钠头文字哲学の李尔王」：「G」→英文字母的第7个字母。「N」→英文字母的第14个字母。King Lear：「K」→英文字母表的第11个字母。「L」→英文字母中的第12个字母。→本殿是Gokuの一个等待7飞会比较本样十三番队队长浮竹十四郎的一个so long to Peking本少爷要回英国了。然后然本殿要第一时间和Hilary大玩vacation-evolution啊 oh no, yasashii.然后然李尔王(King Lear)是愚笨的或只是一个贪婪女色的牺牲者？拿破仑(Napoleon)是一个伟大的将军或掠夺土地的暴君?和奥赛罗（Othello）和李尔王（Lear）一样，威尔斯既是高贵的同时也是软弱的，既宏博又凄惨既是强大的雷神又像是一个被宠坏的小孩，既是神圣的巨人同时又是一只以英国命名の一kawaii puppy.「PY位移哲学のPony」→小马无骑异有飞 独角兽过来的「异变指数」index of variability也叫变异指数，若Jungleのlog无关㏒，若利用土壤养分和光谱数据划分的管理分区内，各土壤养分的均一度得到了提高，光谱指数和产量的变异系数普遍降低。若本少爷の飞英国时间涉及到斐林试剂图のdeadlineの速度主义の4º＝1我希望是这几天の23号无翌日拖延日的kinda准确定值常数值哦。然后然字母W：英文字母表中的第23个字母。然后然W西：表示方向的缩写，代表西方。英国那边和美国の在玩有骑铊事 不准黑人当总统即使那个乐队叫LinkinParkの在唱Breaking the habit那个乐队主唱也不会是亚伯拉罕·林肯的拥护者乔治·W·布什，即使奥巴马和乔治·W·布什一样有才华 只是政府官员不用再听LinkinPark那种有关亚伯拉罕·林肯过去海德公园然后然直接听希拉里就okay.然后然Super Tuesdayの大厅里面贴满了海报，拿奥巴马和乔治·W·布什做比较，这对奥巴马来说是不利的，奥巴马皮肤黑也不会代表拉美因为他并不是南美洲的。扯到希拉里，她以乔治·W·布什政府的失败为例然后然顺理成章当上了美国总统 有关于希拉里的「经验」之言论说辞正当理由哦。然后然本少爷通过向名为KeyParameter的类的构造函数传递一个key参数创建一个名为kp的对象cp→chemically pure. Ano,桂纶镁，其实本少爷之前就一直很想追你啊 当然本少爷不是你的小士 我是许仕林·本田裕二太鼓达人游戏玩家。然后然在日本の任天堂电子游戏软硬件开发公司の掌上游戏机Nintendo Switch加入RAPP欧洲之前，KP曾是英国Philips UK欧洲区域客户游戏情报总监。他的目的不会是→应用心率变异性的频域指标探讨肌电生物反馈中的心脏自主神经系统功能活动的量化改变。日本红白机时代是Switchの前身哦，没有改变游戏机的实质吼。其实就好像本少爷のright nowのplayboy本质没有变啊 本少爷还是那个喜欢和美女玩亲亲のSunho啊。[夏鸣星][兔兔]@EmWatson @桂纶镁 @任天堂香港有限公司 https://t.cn/A6c9zuKd
TUNEL法检测细胞凋亡原理和经验
细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法。
由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化（细胞凋亡）的最常用方法。（以下是TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒（绿色荧光））
TUNEL检测：使用10 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟
关键步骤：
1.充分脱蜡和水化
脱蜡可以先 60ºC 20 min，再用使用二甲苯两次 5-10 min；而水化用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，这些以便后面的结合反应充分、均匀；
2. 把握好细胞通透的时间。
一般根据切片的厚薄，选择蛋白酶k的孵育时间，常用 10-30 min，几 μm 切片用短时间；几十 μm 切片用长时间，通过摸索达到既不脱片，有能够使后面的酶和抗体进入胞内。
3. 适当延长 TUNEL 反应液的时间。
一般是37ºC 1 h，也可以根据凋亡损伤程度，选择更长的时间，可长至 2 h，但要结合最终的背景着色。
4. DAB 显色条件的选择。
一般 DAB 反应10 min 左右，结合镜下控制背景颜色，最长不超过 30 min。
5. PBS 的充分清洗。
在 TUNEL 反应后和酶标反应后的清洗应十分严格，可增加次数达 5 次，因为这些清洗直接决定最后切片的非特异性着色。
6. 此外，内源性 POD 的封闭也十分关键。
对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织，适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度，可以达到很好的封闭效果，且不影响最终的特异性染色。
细胞通透的时间选择
1.蛋白酶 k 的目的是通透细胞膜和核膜，从而使反应试剂充分进入细胞核进行反应，提高阳性率。但浓度过高或孵育时间太长容易脱片，只要不脱片，影响不大，其作用类似与 TritonX100 等细胞通透剂。
2. 蛋白酶K一般工作液浓度为 20 μg/ml,但浓缩液可配制1-10 mg/ml，可用 PBS 配制，也可用蛋白酶K缓冲液（100 mM Tris HCl pH8.0+50 mM EDTA）；然后分装成小份，用完一支再用下一支，-20ºC保存 1 个月应该没问题的（重复拿的那支），而一直冷冻的至少可以用半年以上。
3. 蛋白酶K反应时间一般为10-30 min，具体时间长短与切片厚薄有关，4 μm左右的片子可以用 10 min，但30 μm左右的可用30 min，最终通过摸索最佳时间。过长易脱片、过短起不到通透效果。
关键试剂操作条件：DAB 显色反应大约需要10 min，要控制好反应时间，勿使背景颜色过深。具体的可能还是得根据切片组织来源和切片厚度、试剂盒种类不同来摸索一下；蛋白酶K工作液处理时间、温度须在范围内摸索，温度过高，时间过长，易破坏核酸结构，出现假阳性；DNase 1 一般室温，10 min 即可。
如何减弱非特异性染色
若是肝脏或肾脏，因富含内源性过氧化物酶，需要增加过氧化氢浓度和延长孵育时间。其他还可以加强灭活、缩短 DAB 孵育时间、PBS 充分清洗，注意镜下把握好着色。
Tips：
1.湿盒用带盖方盘，里面固定几根玻璃吸管用于放玻片，使用时稍加水即可。
2.英文说明书中对组织细胞通透这一步中，加了“对难处理的组织的处理”，意思是用常规方法处理（如蛋白酶 K)后，应该阳性而做不出阳性时，可用微波修复。
3.复染的目的是为了衬托组织形态结构，以利于结果分析，石蜡切片常用苏木素，核染成兰色，冷冻切片常用甲基绿，核染成绿色。
4.PBS 用蒸馏水、Na2HPO4、KH2PO4配制，加蒸馏水稀释后即可用。
5.蛋白酶 K 消化蛋白后，需要用封闭液。
细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法。
由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化（细胞凋亡）的最常用方法。（以下是TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒（绿色荧光））
TUNEL检测：使用10 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟
关键步骤：
1.充分脱蜡和水化
脱蜡可以先 60ºC 20 min，再用使用二甲苯两次 5-10 min；而水化用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，这些以便后面的结合反应充分、均匀；
2. 把握好细胞通透的时间。
一般根据切片的厚薄，选择蛋白酶k的孵育时间，常用 10-30 min，几 μm 切片用短时间；几十 μm 切片用长时间，通过摸索达到既不脱片，有能够使后面的酶和抗体进入胞内。
3. 适当延长 TUNEL 反应液的时间。
一般是37ºC 1 h，也可以根据凋亡损伤程度，选择更长的时间，可长至 2 h，但要结合最终的背景着色。
4. DAB 显色条件的选择。
一般 DAB 反应10 min 左右，结合镜下控制背景颜色，最长不超过 30 min。
5. PBS 的充分清洗。
在 TUNEL 反应后和酶标反应后的清洗应十分严格，可增加次数达 5 次，因为这些清洗直接决定最后切片的非特异性着色。
6. 此外，内源性 POD 的封闭也十分关键。
对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织，适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度，可以达到很好的封闭效果，且不影响最终的特异性染色。
细胞通透的时间选择
1.蛋白酶 k 的目的是通透细胞膜和核膜，从而使反应试剂充分进入细胞核进行反应，提高阳性率。但浓度过高或孵育时间太长容易脱片，只要不脱片，影响不大，其作用类似与 TritonX100 等细胞通透剂。
2. 蛋白酶K一般工作液浓度为 20 μg/ml,但浓缩液可配制1-10 mg/ml，可用 PBS 配制，也可用蛋白酶K缓冲液（100 mM Tris HCl pH8.0+50 mM EDTA）；然后分装成小份，用完一支再用下一支，-20ºC保存 1 个月应该没问题的（重复拿的那支），而一直冷冻的至少可以用半年以上。
3. 蛋白酶K反应时间一般为10-30 min，具体时间长短与切片厚薄有关，4 μm左右的片子可以用 10 min，但30 μm左右的可用30 min，最终通过摸索最佳时间。过长易脱片、过短起不到通透效果。
关键试剂操作条件：DAB 显色反应大约需要10 min，要控制好反应时间，勿使背景颜色过深。具体的可能还是得根据切片组织来源和切片厚度、试剂盒种类不同来摸索一下；蛋白酶K工作液处理时间、温度须在范围内摸索，温度过高，时间过长，易破坏核酸结构，出现假阳性；DNase 1 一般室温，10 min 即可。
如何减弱非特异性染色
若是肝脏或肾脏，因富含内源性过氧化物酶，需要增加过氧化氢浓度和延长孵育时间。其他还可以加强灭活、缩短 DAB 孵育时间、PBS 充分清洗，注意镜下把握好着色。
Tips：
1.湿盒用带盖方盘，里面固定几根玻璃吸管用于放玻片，使用时稍加水即可。
2.英文说明书中对组织细胞通透这一步中，加了“对难处理的组织的处理”，意思是用常规方法处理（如蛋白酶 K)后，应该阳性而做不出阳性时，可用微波修复。
3.复染的目的是为了衬托组织形态结构，以利于结果分析，石蜡切片常用苏木素，核染成兰色，冷冻切片常用甲基绿，核染成绿色。
4.PBS 用蒸馏水、Na2HPO4、KH2PO4配制，加蒸馏水稀释后即可用。
5.蛋白酶 K 消化蛋白后，需要用封闭液。
表面活性剂介绍-C12脂肪醇聚氧乙烯(3)醚硫酸钠
【英文名】 C12 fatty alcohol polyoxyethylene(3)ether sodium sulfate
【结构式】 C12H25O(C2H4O)3SO3Na
【物化性质】淡黄色油状液体或糊状物。溶于水，泡沫丰富，有良好的乳化、净洗、润湿性能。对皮肤刺激性小。
【质量标准】GB/T 13529-2003
05.jpg
【用途】在洗涤剂中作起泡剂、乳化剂、润湿剂、分散剂。包装规格：用内衬塑料袋的纤维桶包装，净重50kg/桶、150kg/桶。
【制法】(1)C12脂肪醇聚氧乙烯(3)醚的合成 将10mol C12H25OH和相当于C12脂肪醇质量0.2%的KOH投入反应釜中，在搅拌下升温，同时抽真空脱除空气和水分，升温至100℃左右，脱水完毕后通氮气数次驱尽空气。停止抽真空，升温到150℃,逐渐通入环氧乙烷，保持0.1~0.2MPa的压力，反应温度控制到160～180℃,当环氧乙烧量通入3mol左右时，取样测浊点。若1%水溶液浊点到60～70℃,则停止通环氧乙烷，缩合反应完毕。冷却到70℃后用冰醋酸调pH值至6.0~7.0,然后加人双氧水进行漂白，继续反应1h。冷却出料，得成品。
(2)C12脂肪醇聚氧乙烯(3)醚硫酸的的合成 将C12脂肪醇聚氧乙烯(3)醚、氨基磺酸、尿素(摩尔比1：1：0.5)在搅拌下依次加反应釜，在120℃反应6h,用CH3COOH稳定pH并加入有机硅消泡。得C12脂肪醇聚氧乙烯(3)醚硫酸铵。再经NaOH溶液中和至pH为8～9,加乙醇析晶，过滤得产品。滤液循环使用数次后，蒸出乙醇，残液中和后抛弃。产生的NH3用磺酸吸收得氨基磺酸循环使用。反应式如下：
06.jpg
【产品安全性】生理毒性小，生物降解性好，防止接触黏膜和眼睛，万一触及，立即使用大量清水冲洗并送医诊治。储存于阴凉、干燥处，避免日晒、雨淋，有效储存期一年。按一般货物运输。
【参考生产企业】上海德翼化工有限公司，广东灵捷制造化工有限公司，浙江省绍兴奇美纺织有限公司，绍兴纺织助剂厂。
本文转载自《化工产品手册第六版——表面活性剂》编著 朱领地
【英文名】 C12 fatty alcohol polyoxyethylene(3)ether sodium sulfate
【结构式】 C12H25O(C2H4O)3SO3Na
【物化性质】淡黄色油状液体或糊状物。溶于水，泡沫丰富，有良好的乳化、净洗、润湿性能。对皮肤刺激性小。
【质量标准】GB/T 13529-2003
05.jpg
【用途】在洗涤剂中作起泡剂、乳化剂、润湿剂、分散剂。包装规格：用内衬塑料袋的纤维桶包装，净重50kg/桶、150kg/桶。
【制法】(1)C12脂肪醇聚氧乙烯(3)醚的合成 将10mol C12H25OH和相当于C12脂肪醇质量0.2%的KOH投入反应釜中，在搅拌下升温，同时抽真空脱除空气和水分，升温至100℃左右，脱水完毕后通氮气数次驱尽空气。停止抽真空，升温到150℃,逐渐通入环氧乙烷，保持0.1~0.2MPa的压力，反应温度控制到160～180℃,当环氧乙烧量通入3mol左右时，取样测浊点。若1%水溶液浊点到60～70℃,则停止通环氧乙烷，缩合反应完毕。冷却到70℃后用冰醋酸调pH值至6.0~7.0,然后加人双氧水进行漂白，继续反应1h。冷却出料，得成品。
(2)C12脂肪醇聚氧乙烯(3)醚硫酸的的合成 将C12脂肪醇聚氧乙烯(3)醚、氨基磺酸、尿素(摩尔比1：1：0.5)在搅拌下依次加反应釜，在120℃反应6h,用CH3COOH稳定pH并加入有机硅消泡。得C12脂肪醇聚氧乙烯(3)醚硫酸铵。再经NaOH溶液中和至pH为8～9,加乙醇析晶，过滤得产品。滤液循环使用数次后，蒸出乙醇，残液中和后抛弃。产生的NH3用磺酸吸收得氨基磺酸循环使用。反应式如下：
06.jpg
【产品安全性】生理毒性小，生物降解性好，防止接触黏膜和眼睛，万一触及，立即使用大量清水冲洗并送医诊治。储存于阴凉、干燥处，避免日晒、雨淋，有效储存期一年。按一般货物运输。
【参考生产企业】上海德翼化工有限公司，广东灵捷制造化工有限公司，浙江省绍兴奇美纺织有限公司，绍兴纺织助剂厂。
本文转载自《化工产品手册第六版——表面活性剂》编著 朱领地
✋热门推荐