#高分电影#如果你的2020年和我一样糟糕，年末实在没有什么值得总结只能勉强交出一份“我还活着”的答卷，那么当你看完《心灵奇旅》这部动画片时，也许会在世界某个角落和我一起击掌——是的，一事无成也没关系，至少这个故事给了我们慰藉。
皮克斯用第23部动画长片证明它在创新路上已走得更深更远。我一边享受视听、主题、情节各方面带来的震撼，一边又为之焦虑不已。看来它不打算做一个爆款IP，甚至不打算面向动画片的主要受众——孩子，而只是变成一小部分成年人的围炉夜话——来，我们来聊聊人生。
噢人生？有什么好聊的。尤其当30岁以上的成年人走进电影院时，大部分人不过想在平凡生活的罅隙里透出一丝张望，喘口气，大笑一场，然后若无其事地走出电影院，继续回到现实。
可《心灵奇旅》多么过分。它不仅没有把你从现实拉出去——作为一部动画片，它放弃了制造童话般的奇幻仙境——反而把你又塞回那个熟悉的世界，喧嚣的城市、热闹的街道、拥挤的人群……你依然听着市声、被闪烁着灯光、在车水马龙人来人往中感受自己的渺小。
是的，这个主角和你一样平凡。乔伊，一个黑人音乐教师，抱有音乐家的梦想，却囿于学校音乐教室担任一份并不重要的工作，和根本不爱音乐的孩子们在一起度过一日又一日，才勉强得到一个被恩赐的“铁饭碗”。
他的母亲可能和你的母亲一样。嫌弃你年过三十都没有稳定的工作，依然要靠她这半生辛劳才能换得你相对的稳定。而你漂泊那么久好不容易获得一份有社保的工作后还要和她提什么梦想，她只能把眼前所做的一切奉献展示给你，让你望而却步。
是的，多么熟悉。就像我，或者你，我们的每一天。《心灵奇旅》放弃创造更美更好的童话，哪有什么冒险王、探索队长、勇士奇兵，我们看到银幕上的乔伊就像乔伊在另一个世界看到他自己——乏味，无聊，没有明天。如果他也有生命的“丰碑”，那座雕像并不因为死亡的赞助变成一个伟人。他依然是洗衣机旁坐着发呆等衣服洗好的一个人，只是变成了雕塑，毫无惊喜。
这种平淡的回望令人害怕。它确实抛出一个我们在以娱乐为目的看电影时并不想面对的问题：我为什么活着？
我甚至觉得创作者残酷。毕竟乔伊身为平凡人活着时还有一份执念，要做一名爵士音乐家，至少在梦想的舞台上发光，哪怕只有一刻。而大多数的人们……我们……如果连乔伊那样最低限度的梦想（或曰“人生目标”）都没有，那我们庸庸碌碌的每一天，又是为了什么？
这个问题残酷到让你不得不面对它、思考它、考虑它的答案的紧迫性，因为生命忽然有一天走到尽头，人生最大的偶然来临。那个无比熟悉的问题令人震颤：
“假如现在你就会死去，你是否遗憾？”
乔伊在通往“生之彼岸”的大道上拼命往回奔。我万万没想到在皮克斯动画片里会看到这样恐怖一幕，它预示死亡的必然，预示生命的有限，预示我们每个人都知道的常识，我却毛骨悚然如坐针毡。
我甚至迫切地想要做点什么，赶紧思考出我的答案，回到我可以追溯生命的某一端，重新开始，找到生命的火花，无悔地再过一次……
恰在这时，皮克斯给出它暖心的一面。“生之彼岸”有多令人恐惧，“生之来处”就有多让人充满希望。在这里你是崭新的，自由的，开放的，充满任一种可能。在这里你可以畅想如何活着，无知无畏地开始一趟旅程。
不过不要放松警惕。思考生命的意义没有因为“心灵学院”的温馨环境变得无关轻重。
重要人物22终于登场，她已经活了几千年，心灵苍老到不报任何希望地“活着”，且仅以这样庸碌无为地“活着”为乐趣。
这可能是我在动画片里至今看到最“邪恶”的人物。尽管她长着一副软萌面孔，她的内心却黑暗至极。她比任何一个正邪二元对立动画片里的“坏人”都要令人心惊，因为她不是某一个别人，可能恰恰就是我们内心里的另一面，另一个自己。
代号22，她代表了无望、自卑、封闭、畏惧、偏执、仇恨、……任何负面情绪在她身上都有理由，她并不打算去活一趟。在“心灵学院”她已成了一个冥顽不灵的老滑头，人类几千年历史中的各种伟大灵魂都打动不了她，她具备一种黑暗至极的能量——没有希望。
在动画片中，没有希望已被说得太过委婉。没有那个“通行证”，没有生命的火花。生死概念被描绘为一个具象世界，没有灵魂即没有火花，不过在银幕上没有闪烁一下。可是在我的抽象意识里，她的没有火花已代表无涯的黑暗。
打造这生死两端的具象空间并非多么有创意，毕竟前有《寻梦环游记》，皮克斯已经用卓越的技术向我们展现了一个壮阔的幽冥世界。然而在《心灵奇旅》中我得到创新的震撼来得突如其然，因为在这里，生命似乎多了不少维度，除却生与死，在生死之间依然有某种混沌，需要生命的个体自己去跨越。
皮克斯用第23部动画长片证明它在创新路上已走得更深更远。我一边享受视听、主题、情节各方面带来的震撼，一边又为之焦虑不已。看来它不打算做一个爆款IP，甚至不打算面向动画片的主要受众——孩子，而只是变成一小部分成年人的围炉夜话——来，我们来聊聊人生。
噢人生？有什么好聊的。尤其当30岁以上的成年人走进电影院时，大部分人不过想在平凡生活的罅隙里透出一丝张望，喘口气，大笑一场，然后若无其事地走出电影院，继续回到现实。
可《心灵奇旅》多么过分。它不仅没有把你从现实拉出去——作为一部动画片，它放弃了制造童话般的奇幻仙境——反而把你又塞回那个熟悉的世界，喧嚣的城市、热闹的街道、拥挤的人群……你依然听着市声、被闪烁着灯光、在车水马龙人来人往中感受自己的渺小。
是的，这个主角和你一样平凡。乔伊，一个黑人音乐教师，抱有音乐家的梦想，却囿于学校音乐教室担任一份并不重要的工作，和根本不爱音乐的孩子们在一起度过一日又一日，才勉强得到一个被恩赐的“铁饭碗”。
他的母亲可能和你的母亲一样。嫌弃你年过三十都没有稳定的工作，依然要靠她这半生辛劳才能换得你相对的稳定。而你漂泊那么久好不容易获得一份有社保的工作后还要和她提什么梦想，她只能把眼前所做的一切奉献展示给你，让你望而却步。
是的，多么熟悉。就像我，或者你，我们的每一天。《心灵奇旅》放弃创造更美更好的童话，哪有什么冒险王、探索队长、勇士奇兵，我们看到银幕上的乔伊就像乔伊在另一个世界看到他自己——乏味，无聊，没有明天。如果他也有生命的“丰碑”，那座雕像并不因为死亡的赞助变成一个伟人。他依然是洗衣机旁坐着发呆等衣服洗好的一个人，只是变成了雕塑，毫无惊喜。
这种平淡的回望令人害怕。它确实抛出一个我们在以娱乐为目的看电影时并不想面对的问题：我为什么活着？
我甚至觉得创作者残酷。毕竟乔伊身为平凡人活着时还有一份执念，要做一名爵士音乐家，至少在梦想的舞台上发光，哪怕只有一刻。而大多数的人们……我们……如果连乔伊那样最低限度的梦想（或曰“人生目标”）都没有，那我们庸庸碌碌的每一天，又是为了什么？
这个问题残酷到让你不得不面对它、思考它、考虑它的答案的紧迫性，因为生命忽然有一天走到尽头，人生最大的偶然来临。那个无比熟悉的问题令人震颤：
“假如现在你就会死去，你是否遗憾？”
乔伊在通往“生之彼岸”的大道上拼命往回奔。我万万没想到在皮克斯动画片里会看到这样恐怖一幕，它预示死亡的必然，预示生命的有限，预示我们每个人都知道的常识，我却毛骨悚然如坐针毡。
我甚至迫切地想要做点什么，赶紧思考出我的答案，回到我可以追溯生命的某一端，重新开始，找到生命的火花，无悔地再过一次……
恰在这时，皮克斯给出它暖心的一面。“生之彼岸”有多令人恐惧，“生之来处”就有多让人充满希望。在这里你是崭新的，自由的，开放的，充满任一种可能。在这里你可以畅想如何活着，无知无畏地开始一趟旅程。
不过不要放松警惕。思考生命的意义没有因为“心灵学院”的温馨环境变得无关轻重。
重要人物22终于登场，她已经活了几千年，心灵苍老到不报任何希望地“活着”，且仅以这样庸碌无为地“活着”为乐趣。
这可能是我在动画片里至今看到最“邪恶”的人物。尽管她长着一副软萌面孔，她的内心却黑暗至极。她比任何一个正邪二元对立动画片里的“坏人”都要令人心惊，因为她不是某一个别人，可能恰恰就是我们内心里的另一面，另一个自己。
代号22，她代表了无望、自卑、封闭、畏惧、偏执、仇恨、……任何负面情绪在她身上都有理由，她并不打算去活一趟。在“心灵学院”她已成了一个冥顽不灵的老滑头，人类几千年历史中的各种伟大灵魂都打动不了她，她具备一种黑暗至极的能量——没有希望。
在动画片中，没有希望已被说得太过委婉。没有那个“通行证”，没有生命的火花。生死概念被描绘为一个具象世界，没有灵魂即没有火花，不过在银幕上没有闪烁一下。可是在我的抽象意识里，她的没有火花已代表无涯的黑暗。
打造这生死两端的具象空间并非多么有创意，毕竟前有《寻梦环游记》，皮克斯已经用卓越的技术向我们展现了一个壮阔的幽冥世界。然而在《心灵奇旅》中我得到创新的震撼来得突如其然，因为在这里，生命似乎多了不少维度，除却生与死，在生死之间依然有某种混沌，需要生命的个体自己去跨越。
临床大队列蛋白质组学整体解决方案助力精准诊疗
原创 金开瑞生物 金开瑞生物 4天前
图片
简介
在精准医学和大数据时代、人工智能的大背景下，高通量大队列样本组学（Omics）研究在生命科学研究以及在临床病理研究、临床诊疗领域得到广泛应用。蛋白质作为生命活动和功能的直接执行者，在研究生理、病理机制以及临床诊断、预后评估、治疗靶点以及药物靶点研究中扮演着重要角色。蛋白质组学大队列样本在临床诊疗、疾病机制研究中的应用受到科学家的广泛关注。
然而，制约大队列样本蛋白质组学技术的两大因素极大地限制了其应用，一是针对大样本质谱检测的机时问题以及由此带来的批次效应（质谱长时间运行导致其性能下降，样品间的仪器误差增大），二是对复杂的大样本数据的深度挖掘。金开瑞针对这两个问题专门开发了包含蛋白质组学技术服务、大数据深度挖掘和标志物深度验证三大模块的临床大队列样本蛋白质组学整体解决方案，为科研工作者提供专业、全方位的技术服务。
方案流程
1. 蛋白质组学技术
2. 大数据深度挖掘
3. 疾病标志物验证
通过高通量、大规模蛋白质组学技术及生物信息学、统计学等手段，可以筛选到部分候选蛋白标志物，其表达量往往在疾病/正常样本中具有明显的差异。但是，仅仅通过蛋白质组学手段不足以确定，还需要进行进一步验证和确证[1]（下图）。金开瑞拥有成熟的抗体制备平台、Wester Blot实验平台、免疫组织化学平台和ELISA制备平台，为您提供完整的标志物各阶段验证实验。
标志物筛选的四个步骤
技术优势
1. microflow-LC技术[2-5]
微流控液相色谱-质谱（microflow-LC MS/MS）系统由于其大流速、粗管路的特点，具有耐脏、高稳定性、短梯度等优势，在处理大队列样本过程，可大大降低质谱数据采集过程的偏差，提升队列数据的整体质量。具体表现为如下优势：
大幅缩短检测周期。处理100例样本，传统LC-MS/MS系统大约需12天左右，采用micro-SWATH仅需5天即可完成。
有效降低批次效应。得益于微流控系统的高稳定性和短梯度等特点，microflow系统在处理大队列样本时表现出卓越的一致性，几乎无批次偏倚。
定量结果表现出良好的一致性（20例人血浆样本）
极大提升定量准确性。microflow针对大样本定量检测表现出极佳的准确性，样品间的相关系数普遍在0.9以上。
microflow-SWATH结果表现出良好的相关性（20例血浆样本）
2. 数据分析整体解决方案
在精准医学和大数据时代、人工智能的大背景下，大队列样本的数据分析成为科学家关注的重点，也是难点。通过调阅相关CNS文献报道，结合蛋白质组学数据本身特点，我们开发了一套专门针对临床疾病（尤其是肿瘤）的大队列数据分析方案，充分挖掘大数据中隐藏的信息，为临床诊断、治疗及疾病机制研究提供可靠的证据。
数据预处理保证数据质量。三大维度预处理，保证高可靠、高质量数据[6]。
三大维度数据质量控制，确保数据的高质量
分子分型助力精准诊疗。蛋白质层面的分子分型可以帮助临床医生更准确地识别不同类型的肿瘤，确定精准的治疗方案，更加适合指导肿瘤患者用药、治疗，预后评估，并通过功能分析以及生存分析发现在通路富集和总体生存率层面蛋白分子水平分型是否存在显著差异，进一步证实根据蛋白质进行分类的科学性。是肿瘤分子分型的又一大热点[7]。
共识聚类的凭据共识矩阵和轮廓距离确定最佳分类数
多组学整合分析揭示病理机制。尽管目前的研究结果显示转录组和蛋白质组表达趋势相关性较差，但mRNA和蛋白作为基因表达的共同产物，在某种程度上必然存在因果关系或相关关系。我们通过分子分型结果，对两组学数据进行进一步细化、关联，从而得到常规关联分析所不能获得的信息，并结合差异表达分析，深入挖掘关键功能模块，探索疾病病理机制。除此之外，我们也开发了CNV/SNP对蛋白质表达/功能影响的相关算法，旨在研究基因层面突变对蛋白功能的影响[8]。
蛋白质组和转录组表达水平相关性分析
CNV和蛋白质/mRNA表达水平相关性分析
预后标志物筛选实现精准诊断。使用合理的描述性统计学和相关性分析等手段，经过严格的筛选标准，最终通过Cox回归模型分析影响患者生存预后的因素，结合变化倍数，可挖掘出针对肿瘤不同分子型的特异性表达蛋白，并通过KM生存曲线分析判断是否为预后不良病例的特异性蛋白标志物[8]。
标志物筛选的基本流程
候选药物靶点提名实现精准用药。基于蛋白质组学及蛋白质组学分型结果，结合是否为已知临床药物靶点，可以针对肿瘤或特定分子型筛选具有药物靶点潜能的显著差异蛋白，从而达到精准用药[9]。
3. 标志物验证和确证
蛋白质标志物的鉴定往往需要经过四个阶段：a) 发现阶段，通过大队列样本蛋白质组学的Discovery 策略，结合数据的深度挖掘，最终选定上百种候选标志物蛋白进行进一步验证；b) 差异表达验证，经过此阶段，一般最终筛选到几十种蛋白符合预期；c) 概念阶段验证，进而实现临床疾病诊断、治疗的医学转化。金开瑞可提供多种蛋白质定性、定量验证手段。
基于质谱PRM验证。通过高分辨质谱对靶蛋白-肽段的特异识别检测，可实现蛋白的精确定量，具有通量高、定量准确的优势，一次可同时验证上百种蛋白标志物；
PRM验证的基本原理
基于Western blot验证。制备候选靶点蛋白的单多克隆抗体，基于抗原抗体的特异性反应实现对样本中目标蛋白的定性/半定量检测。验证过程中可选择多例表型差异的样品进行平行检测，通过识别信号的强弱及灰度分析值进一步判断靶点蛋白作为候选靶标的准确性。
Western blot验证的基本原理
基于IHC验证。制备候选靶点蛋白的单多克隆抗体，基于抗原抗体的特异性反应实现对样本中目标蛋白的定性/半定量检测。区别于WB，IHC更侧重靶点蛋白的亚细胞定位，对特异性进一步做了补充，着色深浅跟目标蛋白的含量呈正相关。
immunochemistry验证的基本原理
基于Sandwich ELISA验证。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，受检标本加入后，与固相载体表面的抗原或抗体起反应，再加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据呈色的深浅进行定性或定量分析。对于大分子的靶标蛋白检测，通常是基于夹心ELISA原理进行定量检测产品的开发，这一步主要是扩大测样通量，以满足诊断级别的样本检测例数，同时对靶标蛋白进行绝对定量。
Sandwich ELISA验证的基本原理
限时优惠
活动期间，做一个蛋白质组送一个WB验证。
活动日期截止：2021年5月30日
更多优惠活动请咨询当地销售
参考文献
1. Del Campo, M., et al., Facilitating the Validation of Novel Protein Biomarkers for Dementia: An Optimal Workflow for the Development of Sandwich Immunoassays. Front Neurol, 2015. 6: p. 202.
2. Broccardo, C.J., et al., Multiplexed analysis of steroid hormones in human serum using novel microflow tile technology and LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2013. 934: p. 16-21.
3. Sun, R., et al., Accelerated Protein Biomarker Discovery from FFPE Tissue Samples Using Single-Shot, Short Gradient Microflow SWATH MS. J Proteome Res, 2020. 19(7): p. 2732-2741.
4. Needham, S.R., Microspray and microflow liquid chromatography: the way forward for LC-MS bioanalysis. Bioanalysis, 2017. 9(24): p. 1935-1937.
5. Distler, U., et al., Enhancing Sensitivity of Microflow-Based Bottom-Up Proteomics through Postcolumn Solvent Addition. Anal Chem, 2019. 91(12): p. 7510-7515.
6. Gillette, M.A., et al., Proteogenomic Characterization Reveals Therapeutic Vulnerabilities in Lung Adenocarcinoma. Cell, 2020. 182(1): p. 200-225 e35.
7. Xu, J.Y., et al., Integrative Proteomic Characterization of Human Lung Adenocarcinoma. Cell, 2020. 182(1): p. 245-261 e17.
8. Gao, Q., et al., Integrated Proteogenomic Characterization of HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cell, 2019. 179(5): p. 1240.
9. Ge, S., et al., Author Correction: A proteomic landscape of diffuse-type gastric cancer. Nat Commun, 2018. 9(1): p. 1850.
原创 金开瑞生物 金开瑞生物 4天前
图片
简介
在精准医学和大数据时代、人工智能的大背景下，高通量大队列样本组学（Omics）研究在生命科学研究以及在临床病理研究、临床诊疗领域得到广泛应用。蛋白质作为生命活动和功能的直接执行者，在研究生理、病理机制以及临床诊断、预后评估、治疗靶点以及药物靶点研究中扮演着重要角色。蛋白质组学大队列样本在临床诊疗、疾病机制研究中的应用受到科学家的广泛关注。
然而，制约大队列样本蛋白质组学技术的两大因素极大地限制了其应用，一是针对大样本质谱检测的机时问题以及由此带来的批次效应（质谱长时间运行导致其性能下降，样品间的仪器误差增大），二是对复杂的大样本数据的深度挖掘。金开瑞针对这两个问题专门开发了包含蛋白质组学技术服务、大数据深度挖掘和标志物深度验证三大模块的临床大队列样本蛋白质组学整体解决方案，为科研工作者提供专业、全方位的技术服务。
方案流程
1. 蛋白质组学技术
2. 大数据深度挖掘
3. 疾病标志物验证
通过高通量、大规模蛋白质组学技术及生物信息学、统计学等手段，可以筛选到部分候选蛋白标志物，其表达量往往在疾病/正常样本中具有明显的差异。但是，仅仅通过蛋白质组学手段不足以确定，还需要进行进一步验证和确证[1]（下图）。金开瑞拥有成熟的抗体制备平台、Wester Blot实验平台、免疫组织化学平台和ELISA制备平台，为您提供完整的标志物各阶段验证实验。
标志物筛选的四个步骤
技术优势
1. microflow-LC技术[2-5]
微流控液相色谱-质谱（microflow-LC MS/MS）系统由于其大流速、粗管路的特点，具有耐脏、高稳定性、短梯度等优势，在处理大队列样本过程，可大大降低质谱数据采集过程的偏差，提升队列数据的整体质量。具体表现为如下优势：
大幅缩短检测周期。处理100例样本，传统LC-MS/MS系统大约需12天左右，采用micro-SWATH仅需5天即可完成。
有效降低批次效应。得益于微流控系统的高稳定性和短梯度等特点，microflow系统在处理大队列样本时表现出卓越的一致性，几乎无批次偏倚。
定量结果表现出良好的一致性（20例人血浆样本）
极大提升定量准确性。microflow针对大样本定量检测表现出极佳的准确性，样品间的相关系数普遍在0.9以上。
microflow-SWATH结果表现出良好的相关性（20例血浆样本）
2. 数据分析整体解决方案
在精准医学和大数据时代、人工智能的大背景下，大队列样本的数据分析成为科学家关注的重点，也是难点。通过调阅相关CNS文献报道，结合蛋白质组学数据本身特点，我们开发了一套专门针对临床疾病（尤其是肿瘤）的大队列数据分析方案，充分挖掘大数据中隐藏的信息，为临床诊断、治疗及疾病机制研究提供可靠的证据。
数据预处理保证数据质量。三大维度预处理，保证高可靠、高质量数据[6]。
三大维度数据质量控制，确保数据的高质量
分子分型助力精准诊疗。蛋白质层面的分子分型可以帮助临床医生更准确地识别不同类型的肿瘤，确定精准的治疗方案，更加适合指导肿瘤患者用药、治疗，预后评估，并通过功能分析以及生存分析发现在通路富集和总体生存率层面蛋白分子水平分型是否存在显著差异，进一步证实根据蛋白质进行分类的科学性。是肿瘤分子分型的又一大热点[7]。
共识聚类的凭据共识矩阵和轮廓距离确定最佳分类数
多组学整合分析揭示病理机制。尽管目前的研究结果显示转录组和蛋白质组表达趋势相关性较差，但mRNA和蛋白作为基因表达的共同产物，在某种程度上必然存在因果关系或相关关系。我们通过分子分型结果，对两组学数据进行进一步细化、关联，从而得到常规关联分析所不能获得的信息，并结合差异表达分析，深入挖掘关键功能模块，探索疾病病理机制。除此之外，我们也开发了CNV/SNP对蛋白质表达/功能影响的相关算法，旨在研究基因层面突变对蛋白功能的影响[8]。
蛋白质组和转录组表达水平相关性分析
CNV和蛋白质/mRNA表达水平相关性分析
预后标志物筛选实现精准诊断。使用合理的描述性统计学和相关性分析等手段，经过严格的筛选标准，最终通过Cox回归模型分析影响患者生存预后的因素，结合变化倍数，可挖掘出针对肿瘤不同分子型的特异性表达蛋白，并通过KM生存曲线分析判断是否为预后不良病例的特异性蛋白标志物[8]。
标志物筛选的基本流程
候选药物靶点提名实现精准用药。基于蛋白质组学及蛋白质组学分型结果，结合是否为已知临床药物靶点，可以针对肿瘤或特定分子型筛选具有药物靶点潜能的显著差异蛋白，从而达到精准用药[9]。
3. 标志物验证和确证
蛋白质标志物的鉴定往往需要经过四个阶段：a) 发现阶段，通过大队列样本蛋白质组学的Discovery 策略，结合数据的深度挖掘，最终选定上百种候选标志物蛋白进行进一步验证；b) 差异表达验证，经过此阶段，一般最终筛选到几十种蛋白符合预期；c) 概念阶段验证，进而实现临床疾病诊断、治疗的医学转化。金开瑞可提供多种蛋白质定性、定量验证手段。
基于质谱PRM验证。通过高分辨质谱对靶蛋白-肽段的特异识别检测，可实现蛋白的精确定量，具有通量高、定量准确的优势，一次可同时验证上百种蛋白标志物；
PRM验证的基本原理
基于Western blot验证。制备候选靶点蛋白的单多克隆抗体，基于抗原抗体的特异性反应实现对样本中目标蛋白的定性/半定量检测。验证过程中可选择多例表型差异的样品进行平行检测，通过识别信号的强弱及灰度分析值进一步判断靶点蛋白作为候选靶标的准确性。
Western blot验证的基本原理
基于IHC验证。制备候选靶点蛋白的单多克隆抗体，基于抗原抗体的特异性反应实现对样本中目标蛋白的定性/半定量检测。区别于WB，IHC更侧重靶点蛋白的亚细胞定位，对特异性进一步做了补充，着色深浅跟目标蛋白的含量呈正相关。
immunochemistry验证的基本原理
基于Sandwich ELISA验证。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，受检标本加入后，与固相载体表面的抗原或抗体起反应，再加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据呈色的深浅进行定性或定量分析。对于大分子的靶标蛋白检测，通常是基于夹心ELISA原理进行定量检测产品的开发，这一步主要是扩大测样通量，以满足诊断级别的样本检测例数，同时对靶标蛋白进行绝对定量。
Sandwich ELISA验证的基本原理
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参考文献
1. Del Campo, M., et al., Facilitating the Validation of Novel Protein Biomarkers for Dementia: An Optimal Workflow for the Development of Sandwich Immunoassays. Front Neurol, 2015. 6: p. 202.
2. Broccardo, C.J., et al., Multiplexed analysis of steroid hormones in human serum using novel microflow tile technology and LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2013. 934: p. 16-21.
3. Sun, R., et al., Accelerated Protein Biomarker Discovery from FFPE Tissue Samples Using Single-Shot, Short Gradient Microflow SWATH MS. J Proteome Res, 2020. 19(7): p. 2732-2741.
4. Needham, S.R., Microspray and microflow liquid chromatography: the way forward for LC-MS bioanalysis. Bioanalysis, 2017. 9(24): p. 1935-1937.
5. Distler, U., et al., Enhancing Sensitivity of Microflow-Based Bottom-Up Proteomics through Postcolumn Solvent Addition. Anal Chem, 2019. 91(12): p. 7510-7515.
6. Gillette, M.A., et al., Proteogenomic Characterization Reveals Therapeutic Vulnerabilities in Lung Adenocarcinoma. Cell, 2020. 182(1): p. 200-225 e35.
7. Xu, J.Y., et al., Integrative Proteomic Characterization of Human Lung Adenocarcinoma. Cell, 2020. 182(1): p. 245-261 e17.
8. Gao, Q., et al., Integrated Proteogenomic Characterization of HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cell, 2019. 179(5): p. 1240.
9. Ge, S., et al., Author Correction: A proteomic landscape of diffuse-type gastric cancer. Nat Commun, 2018. 9(1): p. 1850.
《股市真规则》笔记（11～12章）
第十一章 综合运用
●案例1：超威半导体公司
步骤1.分析竞争优势
首先,寻找党争优势的证据，通过分析公司自由现金流、毛利率、浄资产收益率和资产收益率来检验超威过去的盈利能力怎样(见表11-1，2)。
◆自由现金流波动大→负值→没有产生自由现金流。
◆毛利率、净利率降低，资产周转率、资产收益率下降，财物杠杆比率逐渐向上。
2.成长性。如图：
◆在当时需求旺盛时，6%的增长率一点都不高。
3.收益性。
挖掘一下超威是怎样赚钱(或亏损)的。表11-5是一张百分率利润表。百分率利润表是公司估值一个非常有用的工具,因为通过研究这些科目相对于销售收入的百分比,让我们可以更直观地看到公司的表现。
◆毛利降低，销售收入基本稳定，但研发支出增加，同时销售毛利率降低，管理费用增加，说明企业没有变得更有效率。所以不容乐观。
4.财物健康状况
超威2002年底，有19亿美元的负债和25亿美元的股东权益。★0.7的负债权益比率相对于市场不是很高,但是对于一家像超威那样盈利困难的企业来说就不是很好。超威的★流动比率大约是1.5,请记住,这个比率是流动资产除以流动负债。此外,不算糟糕但也不很令人欣慰的是,超威在行业中居于第二的位置和一个盈利能力参差不一的历史。
超威2004---2006年各种活动支付9.5亿美元，却只有2.5亿美元的净利润。
5.风险
想象是否有不可预测的环境，空头情形。
6.管理
管理人员及薪资待遇？
7.估值
①市销率。横向与同行比较，纵向与自己历年比较。
②市盈率。如图。若为亏损企业则不能用。根据最低最好估出一个安全边际。周期行行业要看处于那个周期中。
③现金流折现法。如图。当年产生的自由现金流为2亿美元。增长率给5%，折现率14%（因盈利能力差，负债风险大，竞争地位不牢固）。
★★算出价值如果股价有所折扣就更好！
●案例2：邦美公司
前五名公司占市场85%的销售收入。市场7%-----10%的增长率。公司年度3%----4%的提价，销售收入每年增长10%-----14%，
1.竞争优势
检验邦美公司的自由现金流、毛利率、净资产收益率和资产收益率的趋势,来寻求它拥有争优势的证据。如图：3张
★★★慎重的投资者梦寐以求的卓越的财务表现是:协调一致和持续增长的自由现金流(自由现金流相对于销售收入比率在5%以上,而且通常高于这个比率),以及非常一致的营业毛利率和销售净利率。这里没有模棱两可,任何公司能在10年的时间里把销售收入的10%以上转化成自由现金流,说明这个公司是相当不错的。
2.成长性。如图
非常稳定
3.盈利性。如图。
很好
4.财物健康状况
没有负债。流动比率为4（没有负债则这个数字很高）。现金水平持续保持在15%左右。现金太多还应搞清楚为什么不回购股票或再投资。
5.风险？
6.管理
7.估值
好公司很少是便宜的。
◆市盈率法：当前28倍，市场平均20倍，过去五年38倍，历史平均45倍。★与市场和历史比较。
◆现金流折现法：当时市场价28美元。①给未来5年每年15%的增长率。用比市场10.5%低的折现率9%。如图：
②由于有些保守，假定第六年后增长较快。如图：
这样估值为30美元。这样在24美元关注，相当于估值有20%的折扣。
第十二章 十分钟测试
对任何一只你认为值得投资的股票应用下面的测试,你可能只需要10分钟就能决定这只股票是否有理由占用你更多的时间。能剔除多半不良的投资机会。
●1、公司能否通过一个最小的质量考验?
小市值公司和柜台交易的公司首先要排除在外。最近首次发行的股票也不值得你花时间。
因为只有在他们认为能卖一个好价钱的时候,公司才向公众发行股票,所以首次发行几乎没有便宜货。其次经营期短没有经验。
●2、公司一直不断地赚取营业利润吗?
一些一直处于亏损的公司突然宣布激动人心的好消息说他要赚钱。这种失败的案例比成
功的多得多。
●3、公司能从经营活动中持续不断地产生现金流吗?
经营活动中产生负现金流的公
司最终不得不通过发行债券货股票寻求另外的融资。之前被认为是增加了风险,最近人们更关注他稀释了股东权益。
●4、净资产收益率能保持10%以上，并且有合理的材务杠杆吗?
★净资产收益率10%为最低门槛。
★对于金融性公司,净资产收益率门槛应提高到12%,同时财务杠杆应在行业的标准之内（与同行比较）。
★财务杠杆高的企业,15%的净资产收益率是最低标准。
★例外的情况是周期性公司,在经历或政策因素下可能剧烈变化,但公司最好是赚钱的，且最好在困难情况也能取得相当好的净资产收益率。
●5、盈利增长是协调一致还是飘忽不定?
★最好的公司显示的是协调一致的增长率。有的公司盈利跳上跳下,不稳定，可能存在大问题。
●6、资产负债表清白吗?
需要额外的关注有大量债务的公司,因为它的资本结构常常很复杂。如果一家非银行公
司财务杠杆比率超过4，或者负债权益比率在1.0以上，应该问自己以下问题：
a.这家公司所处行业的业务稳定吗?(如消费品和食品行业)能承受更大的财务杠杆
b.负债相对于总资产一直是以一个百分比上升还是下降?
c.你理解负债吗?
●7、这家公司产生自由现金流吗?
尽量选择有自由现金流并且多的公司。★对于自由现金流除以销售收入的百分比,我们选
用5%作为一个大致的标准。如果自由现金流为负值的公司，或者用于未来更赚钱的投资或者有稳定的净资产收益率并且通过了其他测试,可先留下,只要你确信这家公司确实把现金精明的用于了再投资。
●8、还有多少“其他”？
★如有隐瞒或可疑且在历史上有一次性计提大笔费用记录,就应该放弃它。
●9、发行在外的股票数量再过去几年明显增长了吗?
如果这家公司发行新股或者购买了其它公司,或者派发期权给了员工和管理层。因为前者稀释你的所有权后者大多数收购是失败的。对于股票回购如果在低估时可值得关注,高估回购不可选。
●10、超越这10分钟
①将前面选出的公司进一步仔细阅读10年的资产负债表摘要、利润表和现金流量表。
②阅读近两年的年报。注意描述贷款、担保、债务契约以及其他类似内容的项目。
③阅读近两个季度的盈利报告。
④开始给股票估值。
★至少做一个大致的折现现金流估值。然后再详细分析估值。
第十一章 综合运用
●案例1：超威半导体公司
步骤1.分析竞争优势
首先,寻找党争优势的证据，通过分析公司自由现金流、毛利率、浄资产收益率和资产收益率来检验超威过去的盈利能力怎样(见表11-1，2)。
◆自由现金流波动大→负值→没有产生自由现金流。
◆毛利率、净利率降低，资产周转率、资产收益率下降，财物杠杆比率逐渐向上。
2.成长性。如图：
◆在当时需求旺盛时，6%的增长率一点都不高。
3.收益性。
挖掘一下超威是怎样赚钱(或亏损)的。表11-5是一张百分率利润表。百分率利润表是公司估值一个非常有用的工具,因为通过研究这些科目相对于销售收入的百分比,让我们可以更直观地看到公司的表现。
◆毛利降低，销售收入基本稳定，但研发支出增加，同时销售毛利率降低，管理费用增加，说明企业没有变得更有效率。所以不容乐观。
4.财物健康状况
超威2002年底，有19亿美元的负债和25亿美元的股东权益。★0.7的负债权益比率相对于市场不是很高,但是对于一家像超威那样盈利困难的企业来说就不是很好。超威的★流动比率大约是1.5,请记住,这个比率是流动资产除以流动负债。此外,不算糟糕但也不很令人欣慰的是,超威在行业中居于第二的位置和一个盈利能力参差不一的历史。
超威2004---2006年各种活动支付9.5亿美元，却只有2.5亿美元的净利润。
5.风险
想象是否有不可预测的环境，空头情形。
6.管理
管理人员及薪资待遇？
7.估值
①市销率。横向与同行比较，纵向与自己历年比较。
②市盈率。如图。若为亏损企业则不能用。根据最低最好估出一个安全边际。周期行行业要看处于那个周期中。
③现金流折现法。如图。当年产生的自由现金流为2亿美元。增长率给5%，折现率14%（因盈利能力差，负债风险大，竞争地位不牢固）。
★★算出价值如果股价有所折扣就更好！
●案例2：邦美公司
前五名公司占市场85%的销售收入。市场7%-----10%的增长率。公司年度3%----4%的提价，销售收入每年增长10%-----14%，
1.竞争优势
检验邦美公司的自由现金流、毛利率、净资产收益率和资产收益率的趋势,来寻求它拥有争优势的证据。如图：3张
★★★慎重的投资者梦寐以求的卓越的财务表现是:协调一致和持续增长的自由现金流(自由现金流相对于销售收入比率在5%以上,而且通常高于这个比率),以及非常一致的营业毛利率和销售净利率。这里没有模棱两可,任何公司能在10年的时间里把销售收入的10%以上转化成自由现金流,说明这个公司是相当不错的。
2.成长性。如图
非常稳定
3.盈利性。如图。
很好
4.财物健康状况
没有负债。流动比率为4（没有负债则这个数字很高）。现金水平持续保持在15%左右。现金太多还应搞清楚为什么不回购股票或再投资。
5.风险？
6.管理
7.估值
好公司很少是便宜的。
◆市盈率法：当前28倍，市场平均20倍，过去五年38倍，历史平均45倍。★与市场和历史比较。
◆现金流折现法：当时市场价28美元。①给未来5年每年15%的增长率。用比市场10.5%低的折现率9%。如图：
②由于有些保守，假定第六年后增长较快。如图：
这样估值为30美元。这样在24美元关注，相当于估值有20%的折扣。
第十二章 十分钟测试
对任何一只你认为值得投资的股票应用下面的测试,你可能只需要10分钟就能决定这只股票是否有理由占用你更多的时间。能剔除多半不良的投资机会。
●1、公司能否通过一个最小的质量考验?
小市值公司和柜台交易的公司首先要排除在外。最近首次发行的股票也不值得你花时间。
因为只有在他们认为能卖一个好价钱的时候,公司才向公众发行股票,所以首次发行几乎没有便宜货。其次经营期短没有经验。
●2、公司一直不断地赚取营业利润吗?
一些一直处于亏损的公司突然宣布激动人心的好消息说他要赚钱。这种失败的案例比成
功的多得多。
●3、公司能从经营活动中持续不断地产生现金流吗?
经营活动中产生负现金流的公
司最终不得不通过发行债券货股票寻求另外的融资。之前被认为是增加了风险,最近人们更关注他稀释了股东权益。
●4、净资产收益率能保持10%以上，并且有合理的材务杠杆吗?
★净资产收益率10%为最低门槛。
★对于金融性公司,净资产收益率门槛应提高到12%,同时财务杠杆应在行业的标准之内（与同行比较）。
★财务杠杆高的企业,15%的净资产收益率是最低标准。
★例外的情况是周期性公司,在经历或政策因素下可能剧烈变化,但公司最好是赚钱的，且最好在困难情况也能取得相当好的净资产收益率。
●5、盈利增长是协调一致还是飘忽不定?
★最好的公司显示的是协调一致的增长率。有的公司盈利跳上跳下,不稳定，可能存在大问题。
●6、资产负债表清白吗?
需要额外的关注有大量债务的公司,因为它的资本结构常常很复杂。如果一家非银行公
司财务杠杆比率超过4，或者负债权益比率在1.0以上，应该问自己以下问题：
a.这家公司所处行业的业务稳定吗?(如消费品和食品行业)能承受更大的财务杠杆
b.负债相对于总资产一直是以一个百分比上升还是下降?
c.你理解负债吗?
●7、这家公司产生自由现金流吗?
尽量选择有自由现金流并且多的公司。★对于自由现金流除以销售收入的百分比,我们选
用5%作为一个大致的标准。如果自由现金流为负值的公司，或者用于未来更赚钱的投资或者有稳定的净资产收益率并且通过了其他测试,可先留下,只要你确信这家公司确实把现金精明的用于了再投资。
●8、还有多少“其他”？
★如有隐瞒或可疑且在历史上有一次性计提大笔费用记录,就应该放弃它。
●9、发行在外的股票数量再过去几年明显增长了吗?
如果这家公司发行新股或者购买了其它公司,或者派发期权给了员工和管理层。因为前者稀释你的所有权后者大多数收购是失败的。对于股票回购如果在低估时可值得关注,高估回购不可选。
●10、超越这10分钟
①将前面选出的公司进一步仔细阅读10年的资产负债表摘要、利润表和现金流量表。
②阅读近两年的年报。注意描述贷款、担保、债务契约以及其他类似内容的项目。
③阅读近两个季度的盈利报告。
④开始给股票估值。
★至少做一个大致的折现现金流估值。然后再详细分析估值。
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