临床大队列蛋白质组学整体解决方案助力精准诊疗
原创 金开瑞生物 金开瑞生物 4天前
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简介
在精准医学和大数据时代、人工智能的大背景下，高通量大队列样本组学（Omics）研究在生命科学研究以及在临床病理研究、临床诊疗领域得到广泛应用。蛋白质作为生命活动和功能的直接执行者，在研究生理、病理机制以及临床诊断、预后评估、治疗靶点以及药物靶点研究中扮演着重要角色。蛋白质组学大队列样本在临床诊疗、疾病机制研究中的应用受到科学家的广泛关注。
然而，制约大队列样本蛋白质组学技术的两大因素极大地限制了其应用，一是针对大样本质谱检测的机时问题以及由此带来的批次效应（质谱长时间运行导致其性能下降，样品间的仪器误差增大），二是对复杂的大样本数据的深度挖掘。金开瑞针对这两个问题专门开发了包含蛋白质组学技术服务、大数据深度挖掘和标志物深度验证三大模块的临床大队列样本蛋白质组学整体解决方案，为科研工作者提供专业、全方位的技术服务。
方案流程
1. 蛋白质组学技术
2. 大数据深度挖掘
3. 疾病标志物验证
通过高通量、大规模蛋白质组学技术及生物信息学、统计学等手段，可以筛选到部分候选蛋白标志物，其表达量往往在疾病/正常样本中具有明显的差异。但是，仅仅通过蛋白质组学手段不足以确定，还需要进行进一步验证和确证[1]（下图）。金开瑞拥有成熟的抗体制备平台、Wester Blot实验平台、免疫组织化学平台和ELISA制备平台，为您提供完整的标志物各阶段验证实验。
标志物筛选的四个步骤
技术优势
1. microflow-LC技术[2-5]
微流控液相色谱-质谱（microflow-LC MS/MS）系统由于其大流速、粗管路的特点，具有耐脏、高稳定性、短梯度等优势，在处理大队列样本过程，可大大降低质谱数据采集过程的偏差，提升队列数据的整体质量。具体表现为如下优势：
大幅缩短检测周期。处理100例样本，传统LC-MS/MS系统大约需12天左右，采用micro-SWATH仅需5天即可完成。
有效降低批次效应。得益于微流控系统的高稳定性和短梯度等特点，microflow系统在处理大队列样本时表现出卓越的一致性，几乎无批次偏倚。
定量结果表现出良好的一致性（20例人血浆样本）
极大提升定量准确性。microflow针对大样本定量检测表现出极佳的准确性，样品间的相关系数普遍在0.9以上。
microflow-SWATH结果表现出良好的相关性（20例血浆样本）
2. 数据分析整体解决方案
在精准医学和大数据时代、人工智能的大背景下，大队列样本的数据分析成为科学家关注的重点，也是难点。通过调阅相关CNS文献报道，结合蛋白质组学数据本身特点，我们开发了一套专门针对临床疾病（尤其是肿瘤）的大队列数据分析方案，充分挖掘大数据中隐藏的信息，为临床诊断、治疗及疾病机制研究提供可靠的证据。
数据预处理保证数据质量。三大维度预处理，保证高可靠、高质量数据[6]。
三大维度数据质量控制，确保数据的高质量
分子分型助力精准诊疗。蛋白质层面的分子分型可以帮助临床医生更准确地识别不同类型的肿瘤，确定精准的治疗方案，更加适合指导肿瘤患者用药、治疗，预后评估，并通过功能分析以及生存分析发现在通路富集和总体生存率层面蛋白分子水平分型是否存在显著差异，进一步证实根据蛋白质进行分类的科学性。是肿瘤分子分型的又一大热点[7]。
共识聚类的凭据共识矩阵和轮廓距离确定最佳分类数
多组学整合分析揭示病理机制。尽管目前的研究结果显示转录组和蛋白质组表达趋势相关性较差，但mRNA和蛋白作为基因表达的共同产物，在某种程度上必然存在因果关系或相关关系。我们通过分子分型结果，对两组学数据进行进一步细化、关联，从而得到常规关联分析所不能获得的信息，并结合差异表达分析，深入挖掘关键功能模块，探索疾病病理机制。除此之外，我们也开发了CNV/SNP对蛋白质表达/功能影响的相关算法，旨在研究基因层面突变对蛋白功能的影响[8]。
蛋白质组和转录组表达水平相关性分析
CNV和蛋白质/mRNA表达水平相关性分析
预后标志物筛选实现精准诊断。使用合理的描述性统计学和相关性分析等手段，经过严格的筛选标准，最终通过Cox回归模型分析影响患者生存预后的因素，结合变化倍数，可挖掘出针对肿瘤不同分子型的特异性表达蛋白，并通过KM生存曲线分析判断是否为预后不良病例的特异性蛋白标志物[8]。
标志物筛选的基本流程
候选药物靶点提名实现精准用药。基于蛋白质组学及蛋白质组学分型结果，结合是否为已知临床药物靶点，可以针对肿瘤或特定分子型筛选具有药物靶点潜能的显著差异蛋白，从而达到精准用药[9]。
3. 标志物验证和确证
蛋白质标志物的鉴定往往需要经过四个阶段：a) 发现阶段，通过大队列样本蛋白质组学的Discovery 策略，结合数据的深度挖掘，最终选定上百种候选标志物蛋白进行进一步验证；b) 差异表达验证，经过此阶段，一般最终筛选到几十种蛋白符合预期；c) 概念阶段验证，进而实现临床疾病诊断、治疗的医学转化。金开瑞可提供多种蛋白质定性、定量验证手段。
基于质谱PRM验证。通过高分辨质谱对靶蛋白-肽段的特异识别检测，可实现蛋白的精确定量，具有通量高、定量准确的优势，一次可同时验证上百种蛋白标志物；
PRM验证的基本原理
基于Western blot验证。制备候选靶点蛋白的单多克隆抗体，基于抗原抗体的特异性反应实现对样本中目标蛋白的定性/半定量检测。验证过程中可选择多例表型差异的样品进行平行检测，通过识别信号的强弱及灰度分析值进一步判断靶点蛋白作为候选靶标的准确性。
Western blot验证的基本原理
基于IHC验证。制备候选靶点蛋白的单多克隆抗体，基于抗原抗体的特异性反应实现对样本中目标蛋白的定性/半定量检测。区别于WB，IHC更侧重靶点蛋白的亚细胞定位，对特异性进一步做了补充，着色深浅跟目标蛋白的含量呈正相关。
immunochemistry验证的基本原理
基于Sandwich ELISA验证。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，受检标本加入后，与固相载体表面的抗原或抗体起反应，再加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据呈色的深浅进行定性或定量分析。对于大分子的靶标蛋白检测，通常是基于夹心ELISA原理进行定量检测产品的开发，这一步主要是扩大测样通量，以满足诊断级别的样本检测例数，同时对靶标蛋白进行绝对定量。
Sandwich ELISA验证的基本原理
限时优惠
活动期间，做一个蛋白质组送一个WB验证。
活动日期截止：2021年5月30日
更多优惠活动请咨询当地销售
参考文献
1. Del Campo, M., et al., Facilitating the Validation of Novel Protein Biomarkers for Dementia: An Optimal Workflow for the Development of Sandwich Immunoassays. Front Neurol, 2015. 6: p. 202.
2. Broccardo, C.J., et al., Multiplexed analysis of steroid hormones in human serum using novel microflow tile technology and LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2013. 934: p. 16-21.
3. Sun, R., et al., Accelerated Protein Biomarker Discovery from FFPE Tissue Samples Using Single-Shot, Short Gradient Microflow SWATH MS. J Proteome Res, 2020. 19(7): p. 2732-2741.
4. Needham, S.R., Microspray and microflow liquid chromatography: the way forward for LC-MS bioanalysis. Bioanalysis, 2017. 9(24): p. 1935-1937.
5. Distler, U., et al., Enhancing Sensitivity of Microflow-Based Bottom-Up Proteomics through Postcolumn Solvent Addition. Anal Chem, 2019. 91(12): p. 7510-7515.
6. Gillette, M.A., et al., Proteogenomic Characterization Reveals Therapeutic Vulnerabilities in Lung Adenocarcinoma. Cell, 2020. 182(1): p. 200-225 e35.
7. Xu, J.Y., et al., Integrative Proteomic Characterization of Human Lung Adenocarcinoma. Cell, 2020. 182(1): p. 245-261 e17.
8. Gao, Q., et al., Integrated Proteogenomic Characterization of HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cell, 2019. 179(5): p. 1240.
9. Ge, S., et al., Author Correction: A proteomic landscape of diffuse-type gastric cancer. Nat Commun, 2018. 9(1): p. 1850.
原创 金开瑞生物 金开瑞生物 4天前
图片
简介
在精准医学和大数据时代、人工智能的大背景下，高通量大队列样本组学（Omics）研究在生命科学研究以及在临床病理研究、临床诊疗领域得到广泛应用。蛋白质作为生命活动和功能的直接执行者，在研究生理、病理机制以及临床诊断、预后评估、治疗靶点以及药物靶点研究中扮演着重要角色。蛋白质组学大队列样本在临床诊疗、疾病机制研究中的应用受到科学家的广泛关注。
然而，制约大队列样本蛋白质组学技术的两大因素极大地限制了其应用，一是针对大样本质谱检测的机时问题以及由此带来的批次效应（质谱长时间运行导致其性能下降，样品间的仪器误差增大），二是对复杂的大样本数据的深度挖掘。金开瑞针对这两个问题专门开发了包含蛋白质组学技术服务、大数据深度挖掘和标志物深度验证三大模块的临床大队列样本蛋白质组学整体解决方案，为科研工作者提供专业、全方位的技术服务。
方案流程
1. 蛋白质组学技术
2. 大数据深度挖掘
3. 疾病标志物验证
通过高通量、大规模蛋白质组学技术及生物信息学、统计学等手段，可以筛选到部分候选蛋白标志物，其表达量往往在疾病/正常样本中具有明显的差异。但是，仅仅通过蛋白质组学手段不足以确定，还需要进行进一步验证和确证[1]（下图）。金开瑞拥有成熟的抗体制备平台、Wester Blot实验平台、免疫组织化学平台和ELISA制备平台，为您提供完整的标志物各阶段验证实验。
标志物筛选的四个步骤
技术优势
1. microflow-LC技术[2-5]
微流控液相色谱-质谱（microflow-LC MS/MS）系统由于其大流速、粗管路的特点，具有耐脏、高稳定性、短梯度等优势，在处理大队列样本过程，可大大降低质谱数据采集过程的偏差，提升队列数据的整体质量。具体表现为如下优势：
大幅缩短检测周期。处理100例样本，传统LC-MS/MS系统大约需12天左右，采用micro-SWATH仅需5天即可完成。
有效降低批次效应。得益于微流控系统的高稳定性和短梯度等特点，microflow系统在处理大队列样本时表现出卓越的一致性，几乎无批次偏倚。
定量结果表现出良好的一致性（20例人血浆样本）
极大提升定量准确性。microflow针对大样本定量检测表现出极佳的准确性，样品间的相关系数普遍在0.9以上。
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2. 数据分析整体解决方案
在精准医学和大数据时代、人工智能的大背景下，大队列样本的数据分析成为科学家关注的重点，也是难点。通过调阅相关CNS文献报道，结合蛋白质组学数据本身特点，我们开发了一套专门针对临床疾病（尤其是肿瘤）的大队列数据分析方案，充分挖掘大数据中隐藏的信息，为临床诊断、治疗及疾病机制研究提供可靠的证据。
数据预处理保证数据质量。三大维度预处理，保证高可靠、高质量数据[6]。
三大维度数据质量控制，确保数据的高质量
分子分型助力精准诊疗。蛋白质层面的分子分型可以帮助临床医生更准确地识别不同类型的肿瘤，确定精准的治疗方案，更加适合指导肿瘤患者用药、治疗，预后评估，并通过功能分析以及生存分析发现在通路富集和总体生存率层面蛋白分子水平分型是否存在显著差异，进一步证实根据蛋白质进行分类的科学性。是肿瘤分子分型的又一大热点[7]。
共识聚类的凭据共识矩阵和轮廓距离确定最佳分类数
多组学整合分析揭示病理机制。尽管目前的研究结果显示转录组和蛋白质组表达趋势相关性较差，但mRNA和蛋白作为基因表达的共同产物，在某种程度上必然存在因果关系或相关关系。我们通过分子分型结果，对两组学数据进行进一步细化、关联，从而得到常规关联分析所不能获得的信息，并结合差异表达分析，深入挖掘关键功能模块，探索疾病病理机制。除此之外，我们也开发了CNV/SNP对蛋白质表达/功能影响的相关算法，旨在研究基因层面突变对蛋白功能的影响[8]。
蛋白质组和转录组表达水平相关性分析
CNV和蛋白质/mRNA表达水平相关性分析
预后标志物筛选实现精准诊断。使用合理的描述性统计学和相关性分析等手段，经过严格的筛选标准，最终通过Cox回归模型分析影响患者生存预后的因素，结合变化倍数，可挖掘出针对肿瘤不同分子型的特异性表达蛋白，并通过KM生存曲线分析判断是否为预后不良病例的特异性蛋白标志物[8]。
标志物筛选的基本流程
候选药物靶点提名实现精准用药。基于蛋白质组学及蛋白质组学分型结果，结合是否为已知临床药物靶点，可以针对肿瘤或特定分子型筛选具有药物靶点潜能的显著差异蛋白，从而达到精准用药[9]。
3. 标志物验证和确证
蛋白质标志物的鉴定往往需要经过四个阶段：a) 发现阶段，通过大队列样本蛋白质组学的Discovery 策略，结合数据的深度挖掘，最终选定上百种候选标志物蛋白进行进一步验证；b) 差异表达验证，经过此阶段，一般最终筛选到几十种蛋白符合预期；c) 概念阶段验证，进而实现临床疾病诊断、治疗的医学转化。金开瑞可提供多种蛋白质定性、定量验证手段。
基于质谱PRM验证。通过高分辨质谱对靶蛋白-肽段的特异识别检测，可实现蛋白的精确定量，具有通量高、定量准确的优势，一次可同时验证上百种蛋白标志物；
PRM验证的基本原理
基于Western blot验证。制备候选靶点蛋白的单多克隆抗体，基于抗原抗体的特异性反应实现对样本中目标蛋白的定性/半定量检测。验证过程中可选择多例表型差异的样品进行平行检测，通过识别信号的强弱及灰度分析值进一步判断靶点蛋白作为候选靶标的准确性。
Western blot验证的基本原理
基于IHC验证。制备候选靶点蛋白的单多克隆抗体，基于抗原抗体的特异性反应实现对样本中目标蛋白的定性/半定量检测。区别于WB，IHC更侧重靶点蛋白的亚细胞定位，对特异性进一步做了补充，着色深浅跟目标蛋白的含量呈正相关。
immunochemistry验证的基本原理
基于Sandwich ELISA验证。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，受检标本加入后，与固相载体表面的抗原或抗体起反应，再加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据呈色的深浅进行定性或定量分析。对于大分子的靶标蛋白检测，通常是基于夹心ELISA原理进行定量检测产品的开发，这一步主要是扩大测样通量，以满足诊断级别的样本检测例数，同时对靶标蛋白进行绝对定量。
Sandwich ELISA验证的基本原理
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参考文献
1. Del Campo, M., et al., Facilitating the Validation of Novel Protein Biomarkers for Dementia: An Optimal Workflow for the Development of Sandwich Immunoassays. Front Neurol, 2015. 6: p. 202.
2. Broccardo, C.J., et al., Multiplexed analysis of steroid hormones in human serum using novel microflow tile technology and LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2013. 934: p. 16-21.
3. Sun, R., et al., Accelerated Protein Biomarker Discovery from FFPE Tissue Samples Using Single-Shot, Short Gradient Microflow SWATH MS. J Proteome Res, 2020. 19(7): p. 2732-2741.
4. Needham, S.R., Microspray and microflow liquid chromatography: the way forward for LC-MS bioanalysis. Bioanalysis, 2017. 9(24): p. 1935-1937.
5. Distler, U., et al., Enhancing Sensitivity of Microflow-Based Bottom-Up Proteomics through Postcolumn Solvent Addition. Anal Chem, 2019. 91(12): p. 7510-7515.
6. Gillette, M.A., et al., Proteogenomic Characterization Reveals Therapeutic Vulnerabilities in Lung Adenocarcinoma. Cell, 2020. 182(1): p. 200-225 e35.
7. Xu, J.Y., et al., Integrative Proteomic Characterization of Human Lung Adenocarcinoma. Cell, 2020. 182(1): p. 245-261 e17.
8. Gao, Q., et al., Integrated Proteogenomic Characterization of HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cell, 2019. 179(5): p. 1240.
9. Ge, S., et al., Author Correction: A proteomic landscape of diffuse-type gastric cancer. Nat Commun, 2018. 9(1): p. 1850.
【健康养生】熬夜后5个迹象，说明身体到极限了！再不注意，猝死就在眼前
我们做过一个征集图片接龙！请说出你无数次熬夜的原因，文章发布后，夜猫子们纷纷留言自己沉迷于熬夜的原因。
小编总结了下，大概有这些——
玩手机，还有玩手机
想到美好的未来，激动得睡不着
熬夜对身体不好，干脆通宵，嗯，没毛病
还有人说，熬夜一时爽，一直熬夜一直爽
......
不过，熬夜爽是爽，但熬多了真的会出问题的。
27岁二胎妈妈熬夜玩手机，
第二天猝死床上
之前，浙江有一位27岁的二胎妈妈，因为通宵熬夜玩手机，第二天早上被发现猝死了。
她婆婆发现的时候，是去叫她吃早饭，叫了几声却发现她一动也不动。走近一看，她手里拿着手机，身体却早已没有了温度，手机屏幕还停留在淘宝上。
后来法医鉴定了她的死因：熬夜玩手机引起的过度疲劳，最后导致突然性心源性猝死。
原来，这位二胎妈妈平时要照顾两个孩子，比较忙碌和辛苦，到了晚上才有时间玩手机，因此常常一玩就是到深夜，长期睡眠不足，身体早已到极限了。
然而，这样的事并不是个例——
2018年10月12日，中南财经政法大学35岁的赵艳云老师，在课堂上突然心脏骤停，经抢救无效，不幸去世。据校方介绍，赵老师平时是位运动达人，却经常熬夜科研。
去年世界杯，湖南28岁的杨先生就因为熬夜玩手机猝死。医生表示：“杨先生近期作息都不正常，世界杯当晚喝酒、熬夜等是主要诱因，直接导致了他的死亡。”
2018年3月7日，36岁的女演员李艾佳因突发疾病猝死家中。而在此之前，她为了自己新拍的电影在没日没夜的工作。
……
每每看到这样的新闻，夜猫子们总是先感叹生命的脆弱，然后信誓旦旦地立下flag：要早睡、不熬夜！可没多久，又陷入了熬夜、通宵的死循环。
熬夜，会让你的身体慢慢垮掉
如果你只是偶尔熬几晚，顶多变成熊猫眼，白天哈欠打个不停，补补觉又是条好汉。
但是，长期熬夜会造成生物钟紊乱，给身体带来很多问题——变胖、变丑、脱发、慢性病、增加癌症风险……
而且，熬夜还和猝死有关。
熬夜不会直接引起猝死，却是猝死一个很重要的诱因。
长期熬夜，会造成过度疲劳和睡眠不足，身体会优先把血液供给大脑等重要器官。
这样，供血不足的心脏就会处于缺氧状态，容易引起心电生理紊乱，从而诱发心脑血管疾病。
如果还继续熬夜，心脏最终会不堪负荷，容易引起心动过速导致室颤，造成心源性猝死。
熬夜后出现5个迹象，说明身体到达极限！
熬夜后，或多或少都会有一些不舒服，可不少人没怎么当回事，总觉得能扛得了，补个觉就好了。
事实上，一些“不舒服”是身体发出的警告信号，在提醒你，你的身体已经到达了极限！
1、眼睛发红
很多人以为，熬夜后眼睛发红很正常，休息过后自然就好了，但并没有这么简单。
图片
熬夜后眼睛发红，其实是眼睛原来就有毛病。
由于熬夜、用眼过度以及受到其他不良因素刺激，加重了病情，就形成我们常见的“红血丝”“眼红”，严重时，这些血管可破裂、出血。
所以，熬夜后眼睛发红，赶紧到医院诊治，别耽误了治疗。
2、注意力不集中、记忆力下降
夜熬多了，还可能会——
这是因为，熬夜、失眠会引起大脑皮质记忆功能的减退。
3、心跳加剧
没有任何诱因的情况下，忽然无缘无故心跳加速。
4、疼痛
突然剧烈胸痛或胸部憋闷，原因不明的胸背疼、肩颈胳膊疼，有疼痛转移的现象，胃部灼痛，反复短时间牙疼。
这很可能是心肌梗死的前兆。
5、其他
心慌、气短、恶心、呕吐、面色苍白、烦躁不安、休息后不能缓解的疲劳头晕。
特别提醒：出现后边3种情况，应立即寻求帮助，去医院就诊或者拨打120。
必须要熬夜，该咋办？
有人说，世界哪有什么岁月静好，不过是有人替你负重前行。
对从事某些职业的人来说，却不得不熬夜。
如果是必须要熬夜，那就尽量把伤害降到最低——
1、熬夜前，做些准备
可以在白天小睡一个小时，这样夜晚精力会相对充沛；
晚餐不要吃得太油腻，多吃清淡营养的蔬菜水果，加一点鱼虾类；
熬夜易导致维生素B缺乏，晚餐可多吃富含维生素B的食物，如动物肝脏、绿叶蔬菜以及粗粮杂粮
图片
2、熬夜时，聪明地吃
说起提神抗困，你是不是想到了咖啡？
虽然咖啡因会让人精神振奋，但研究发现，咖啡因对提升工作效率不见得有效，即使有用，也仅能维持短期效果。
熬夜时最好喝绿茶，它含有多种矿物质，对人体健康更有利。还可以喝些清爽的果蔬汁，既能补充水分，又能补充维生素。
此外，夜宵的分量最好小于全天进食分量的1/5，且不建议吃甜食，会让人感到累，体重也会增加。
3、熬夜后，记得补觉
适当地补觉，能够提高身体的舒适感，白天补觉时，最好调节室内光度，保持昏暗。
说了这么多大家应该知道该咋做了吧，小编也不啰嗦了，毕竟现在已经凌晨2点了，小编该睡了~
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小编总结了下，大概有这些——
玩手机，还有玩手机
想到美好的未来，激动得睡不着
熬夜对身体不好，干脆通宵，嗯，没毛病
还有人说，熬夜一时爽，一直熬夜一直爽
......
不过，熬夜爽是爽，但熬多了真的会出问题的。
27岁二胎妈妈熬夜玩手机，
第二天猝死床上
之前，浙江有一位27岁的二胎妈妈，因为通宵熬夜玩手机，第二天早上被发现猝死了。
她婆婆发现的时候，是去叫她吃早饭，叫了几声却发现她一动也不动。走近一看，她手里拿着手机，身体却早已没有了温度，手机屏幕还停留在淘宝上。
后来法医鉴定了她的死因：熬夜玩手机引起的过度疲劳，最后导致突然性心源性猝死。
原来，这位二胎妈妈平时要照顾两个孩子，比较忙碌和辛苦，到了晚上才有时间玩手机，因此常常一玩就是到深夜，长期睡眠不足，身体早已到极限了。
然而，这样的事并不是个例——
2018年10月12日，中南财经政法大学35岁的赵艳云老师，在课堂上突然心脏骤停，经抢救无效，不幸去世。据校方介绍，赵老师平时是位运动达人，却经常熬夜科研。
去年世界杯，湖南28岁的杨先生就因为熬夜玩手机猝死。医生表示：“杨先生近期作息都不正常，世界杯当晚喝酒、熬夜等是主要诱因，直接导致了他的死亡。”
2018年3月7日，36岁的女演员李艾佳因突发疾病猝死家中。而在此之前，她为了自己新拍的电影在没日没夜的工作。
……
每每看到这样的新闻，夜猫子们总是先感叹生命的脆弱，然后信誓旦旦地立下flag：要早睡、不熬夜！可没多久，又陷入了熬夜、通宵的死循环。
熬夜，会让你的身体慢慢垮掉
如果你只是偶尔熬几晚，顶多变成熊猫眼，白天哈欠打个不停，补补觉又是条好汉。
但是，长期熬夜会造成生物钟紊乱，给身体带来很多问题——变胖、变丑、脱发、慢性病、增加癌症风险……
而且，熬夜还和猝死有关。
熬夜不会直接引起猝死，却是猝死一个很重要的诱因。
长期熬夜，会造成过度疲劳和睡眠不足，身体会优先把血液供给大脑等重要器官。
这样，供血不足的心脏就会处于缺氧状态，容易引起心电生理紊乱，从而诱发心脑血管疾病。
如果还继续熬夜，心脏最终会不堪负荷，容易引起心动过速导致室颤，造成心源性猝死。
熬夜后出现5个迹象，说明身体到达极限！
熬夜后，或多或少都会有一些不舒服，可不少人没怎么当回事，总觉得能扛得了，补个觉就好了。
事实上，一些“不舒服”是身体发出的警告信号，在提醒你，你的身体已经到达了极限！
1、眼睛发红
很多人以为，熬夜后眼睛发红很正常，休息过后自然就好了，但并没有这么简单。
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熬夜后眼睛发红，其实是眼睛原来就有毛病。
由于熬夜、用眼过度以及受到其他不良因素刺激，加重了病情，就形成我们常见的“红血丝”“眼红”，严重时，这些血管可破裂、出血。
所以，熬夜后眼睛发红，赶紧到医院诊治，别耽误了治疗。
2、注意力不集中、记忆力下降
夜熬多了，还可能会——
这是因为，熬夜、失眠会引起大脑皮质记忆功能的减退。
3、心跳加剧
没有任何诱因的情况下，忽然无缘无故心跳加速。
4、疼痛
突然剧烈胸痛或胸部憋闷，原因不明的胸背疼、肩颈胳膊疼，有疼痛转移的现象，胃部灼痛，反复短时间牙疼。
这很可能是心肌梗死的前兆。
5、其他
心慌、气短、恶心、呕吐、面色苍白、烦躁不安、休息后不能缓解的疲劳头晕。
特别提醒：出现后边3种情况，应立即寻求帮助，去医院就诊或者拨打120。
必须要熬夜，该咋办？
有人说，世界哪有什么岁月静好，不过是有人替你负重前行。
对从事某些职业的人来说，却不得不熬夜。
如果是必须要熬夜，那就尽量把伤害降到最低——
1、熬夜前，做些准备
可以在白天小睡一个小时，这样夜晚精力会相对充沛；
晚餐不要吃得太油腻，多吃清淡营养的蔬菜水果，加一点鱼虾类；
熬夜易导致维生素B缺乏，晚餐可多吃富含维生素B的食物，如动物肝脏、绿叶蔬菜以及粗粮杂粮
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2、熬夜时，聪明地吃
说起提神抗困，你是不是想到了咖啡？
虽然咖啡因会让人精神振奋，但研究发现，咖啡因对提升工作效率不见得有效，即使有用，也仅能维持短期效果。
熬夜时最好喝绿茶，它含有多种矿物质，对人体健康更有利。还可以喝些清爽的果蔬汁，既能补充水分，又能补充维生素。
此外，夜宵的分量最好小于全天进食分量的1/5，且不建议吃甜食，会让人感到累，体重也会增加。
3、熬夜后，记得补觉
适当地补觉，能够提高身体的舒适感，白天补觉时，最好调节室内光度，保持昏暗。
说了这么多大家应该知道该咋做了吧，小编也不啰嗦了，毕竟现在已经凌晨2点了，小编该睡了~
针对维权控价打假的问题总结分析、解决方案、优势
根据本公司四年多的维权服务经验，针对所服务的2000多个品牌客户的情况总结出以下分析：
（一）低价问题（客户最常见的困扰问题）
低价对于品牌可能会有以下几个方面的影响；
1.已合作经销代理商利益，影响整个价格体系，扰乱市场，影响线上线下的销售，会引起部分经销商的不满；
合作客户具体有遇到过以下的一些情况：
（1）线下经销商有遇到消费者在线上了解产品价格之后对他进行砍价的，也有在他那看过产品后在网上跟低价格的店铺成交的等一些情况，这样直接损害到经销商的利益；
（2）线上经销商花钱和精力做的推广吸引的部分流量却到一些低价的店铺成交，直接损害线上经销商的利益；
（3）有些链接甚至低于进货价，有可能就是假货挂网上卖的；
（4）因为线上市场的价格乱，经销商不愿意花精力和财力去拓广线上这个销售渠道，会让品牌方失去线上这样的一个销售推广渠道，也失去了在这个渠道上跟同行竞争的机会；
2.影响到新的经销商的加盟合作；
3.影响到消费者对本品牌在此行业的一个档次定位；（是属于高端、中端、还是低端等档次）
4.直接影响到自己官方旗舰店的生意；
（二）未授权链接和店铺（常见问题）
1.因为是未授权的店铺，可能就会有人把假货仿品放线上这一块去销售；
2.因为店铺对应的经销商不知道是谁，货是哪里拿的也没法知道，价格这一块也没法更好的去管控；
（三）线上存在假货(这一块问题对品牌造成的影响就不言而喻了）
（四）被同行侵权（被同行侵犯版权、商标权等，例如同行利用自己品牌做标题吸引流量等）
（五）虽是授权经销商，但是通知了还不愿配合规范价格的
目前大部分客户遇到的无非主要是这五个问题，介绍完目前的问题，解决方式方法我们也说说，目前的解决手段主要是以投诉方式处理，而投诉的理由上，由于受垄断法等限制，故目前都是以知识产权或者假货为切入点间接处理掉，最终结果是一样的，链接删除、店铺扣分，具体投诉方式和处理结果，比较常规的投诉手段如下：
1.知识产品投诉，凡是有盗用公司官网、旗舰店、线下宣传图册的图片，或者突出使用公司商标LOGO的，直接以侵犯知识产权的名义进行投诉，处理结果：店铺扣2分，产品链接删除，交易清零
2.未生产投诉，凡是此产品在公司官网、旗舰店没有出现的，直接以未生产进行投诉，处理结果：店铺扣2-12分，链接删除，交易清零
3.假货购买鉴定，主要针对自拍图和假货的，购买相应的产品，然后出具假货鉴定报告，以假货的名义进行投诉，处理结果：查到产品货源或店铺收到严重处罚扣12分以上，店铺关店7-14天，侵权链接全部删除，交易清零
而在操作中处理方式上当然不好直接处理避免卖家负面情绪，建议方式如下：
1、贵司出具公告声明两份：一份对经销商，这块由厂家根据情况自己来调节，例如对产品店铺进行备案。另一份针对淘宝卖家，通过阿里旺旺进行推送要求规定时间内与厂家取得联系，而后贵司与其签署协议及保证金等措施。
目的在于：a、让有意愿与我们合作的客户与我们取得联系，成为我们的优质线上分销商。b、对于不与我们联系且仍然在网上销售的给予提醒，我们们在做这一块的规划，先礼后兵的效果。
2、未与厂家去的联系的，由我这边进行投诉处理，也就是知识产权投诉或假货投诉店铺处罚或者查到货源（后面有详讲）。
投诉后再若仍未联系 我们将对其店铺处罚，链接删除店铺扣分，若投诉后有店铺联系厂家取得联系，贵司可对其提出条件，例如交纳保证金等条件明确约束后提交我们对应旺旺名称，我们会给予撤诉对其点店铺无任何影响；
3、理想情况下后期线上店铺可全部收纳成线上分销店铺，后期价格由我方监测。若出现低价者是贵司授权体系内的，我方提交给贵司沟通处理，若无沟通无效果，交由我们投诉处理掉。
若低价者未在授权体系中，我方直接处理掉或收纳分销中
4、预计成效
(1)、提升品牌影响力（重点打击淘宝假冒伪劣和非授权销售的产品，重塑品牌形象和市场）
(2)、提升商品单价（肃清市场，打造线上线下价格体系，维护品牌和经销商利益）
(3)、提升分销商忠诚度（配合品牌商收编/招募优质的分销商，搭建完善的分销体系，共发展）
(4)、提升渠道渗透率（协助品牌商做好日常渠道管理，协调好各渠道的利益分配）
(5)、直接挽回品牌形象提升品牌信任度。
作为国内唯一一个上市的维权公司，我们公司旨在为客户提供全方位的电商服务，电商业务部很多，但每个部门都非常完善，目前控价部门客服团队90+配备一名客服经理，5名客服主管，其中3支知识产权客服团队，2只购买鉴定客服团队，全国20+流动购买地址+全国目前13个运营中心，公司总人数600+以上是硬件，
那再说说软件：关键词搜索软件（多平台单产品型号信息检索：可检索淘宝、天猫PC及手机端信息；京东，苏宁，国美，易迅）实时监控软件（0点到23点，每个整点针对所设定产品型号及价格进行低价信息检索排查，检索完毕后，可直接发送到客户指定邮箱）
经过我们的操作能帮品牌方规范全网的一个价格，不能低于最低的一个零售价销售；对于未授权这样的问题，我们能经过投诉帮品牌方摸底这些店铺，把店铺对应的经销商弄清楚，对于未授权的店铺可以采取收编授权或者是直接清理不让他卖（关于对于未授权的店铺根据客户需求进行相对应的处理）；（注：这个方式可以彻底杜绝网上的假货问题）对于同行侵权问题，我们可以清理掉所有的这样的链接，对于经销商不愿意配合规范价格的可以投诉以示警告，让他明白您品牌方这边是完全有资格去规范他的。
我们的优势
第一、当然是公司规模的对比：
毕竟要找合作商，现在第三方市场那么乱，我相信谁都不会随便找，若找了一家不靠谱的公司，没多久对方公司经营遇到问题，损失的还是自己。那么我们公司从2012年成立的，对于维权这个行业我们已经操作4年多，合作已经正在合作的品牌超过2000家，公司规模600人，在维权市场内，不管是公司规模，还是售后体系，我们都是行业中做的最完善的，像惠普、东芝、海尔、联想这些大型品牌都是在我们这里进行维护，除了杭州总部外，目前我们还在天津、广州、深圳、佛山、宁波等11个运营中心，并且我们今年7月份新三板上市，成为公众公司（公众公司对于效果和口碑是小公司所不能比拟的）。除此之外我们还有沃弗软件事业部、盈电通事业部、互联网咨询事业部、和电商服务事业部，之所以说这些，主要是想让你知道，我们双方之间不单单是在维权服务上面建立合作，只要是你们品牌在电商转型遇到的绝大数需求，我们公司都有相应的服务去深入合作，这点事其他任何维权公司都没有办法做到的。
第二、当然是售后服务：
因为只有完善的售后服务，才能让后期的合作更有保障和安全感。在国内的维权服务，大大小小服务商有上百个，但是60%的市场份额都在我们这边，在整体的操作经验和处理流程上面是其他同行没有办法比拟的。在合作的对接流程、服务主动性、售后反馈方面我们也沉淀也4年时间，在后期服务细节上的把控，才是我们跟同行拉开差距的地方。也是这么多客户选择和我们合作的原因。
第三、当然是技术支持：
维权服务的优劣很大程度上依赖于一家公司的技术实力，因为操作过程当中的数据分析、检索、监控、反馈等等一系列硬件条件决定了后期的服务质量。为了解决技术上的问题，也是为了尽快树立行业标杆，去年初，我们收购了广州的沃弗软件公司名，这家公司可以说是在企业ERP系统、WMS系统和跨界电商系统等全程解决方案和信息化管理沉淀了十年，除了我们没有一家公司愿意为了解决技术上的问题专门收购一家技术型公司
第四、选择公司当然不能仅看眼前，近两年市场竞争这么大，变则通不变多半就会死的社会行情下，我司也会不断的升级产品和服务，为客户提供更好更全面更有效的帮助，以寻求更大的发展机会。
根据本公司四年多的维权服务经验，针对所服务的2000多个品牌客户的情况总结出以下分析：
（一）低价问题（客户最常见的困扰问题）
低价对于品牌可能会有以下几个方面的影响；
1.已合作经销代理商利益，影响整个价格体系，扰乱市场，影响线上线下的销售，会引起部分经销商的不满；
合作客户具体有遇到过以下的一些情况：
（1）线下经销商有遇到消费者在线上了解产品价格之后对他进行砍价的，也有在他那看过产品后在网上跟低价格的店铺成交的等一些情况，这样直接损害到经销商的利益；
（2）线上经销商花钱和精力做的推广吸引的部分流量却到一些低价的店铺成交，直接损害线上经销商的利益；
（3）有些链接甚至低于进货价，有可能就是假货挂网上卖的；
（4）因为线上市场的价格乱，经销商不愿意花精力和财力去拓广线上这个销售渠道，会让品牌方失去线上这样的一个销售推广渠道，也失去了在这个渠道上跟同行竞争的机会；
2.影响到新的经销商的加盟合作；
3.影响到消费者对本品牌在此行业的一个档次定位；（是属于高端、中端、还是低端等档次）
4.直接影响到自己官方旗舰店的生意；
（二）未授权链接和店铺（常见问题）
1.因为是未授权的店铺，可能就会有人把假货仿品放线上这一块去销售；
2.因为店铺对应的经销商不知道是谁，货是哪里拿的也没法知道，价格这一块也没法更好的去管控；
（三）线上存在假货(这一块问题对品牌造成的影响就不言而喻了）
（四）被同行侵权（被同行侵犯版权、商标权等，例如同行利用自己品牌做标题吸引流量等）
（五）虽是授权经销商，但是通知了还不愿配合规范价格的
目前大部分客户遇到的无非主要是这五个问题，介绍完目前的问题，解决方式方法我们也说说，目前的解决手段主要是以投诉方式处理，而投诉的理由上，由于受垄断法等限制，故目前都是以知识产权或者假货为切入点间接处理掉，最终结果是一样的，链接删除、店铺扣分，具体投诉方式和处理结果，比较常规的投诉手段如下：
1.知识产品投诉，凡是有盗用公司官网、旗舰店、线下宣传图册的图片，或者突出使用公司商标LOGO的，直接以侵犯知识产权的名义进行投诉，处理结果：店铺扣2分，产品链接删除，交易清零
2.未生产投诉，凡是此产品在公司官网、旗舰店没有出现的，直接以未生产进行投诉，处理结果：店铺扣2-12分，链接删除，交易清零
3.假货购买鉴定，主要针对自拍图和假货的，购买相应的产品，然后出具假货鉴定报告，以假货的名义进行投诉，处理结果：查到产品货源或店铺收到严重处罚扣12分以上，店铺关店7-14天，侵权链接全部删除，交易清零
而在操作中处理方式上当然不好直接处理避免卖家负面情绪，建议方式如下：
1、贵司出具公告声明两份：一份对经销商，这块由厂家根据情况自己来调节，例如对产品店铺进行备案。另一份针对淘宝卖家，通过阿里旺旺进行推送要求规定时间内与厂家取得联系，而后贵司与其签署协议及保证金等措施。
目的在于：a、让有意愿与我们合作的客户与我们取得联系，成为我们的优质线上分销商。b、对于不与我们联系且仍然在网上销售的给予提醒，我们们在做这一块的规划，先礼后兵的效果。
2、未与厂家去的联系的，由我这边进行投诉处理，也就是知识产权投诉或假货投诉店铺处罚或者查到货源（后面有详讲）。
投诉后再若仍未联系 我们将对其店铺处罚，链接删除店铺扣分，若投诉后有店铺联系厂家取得联系，贵司可对其提出条件，例如交纳保证金等条件明确约束后提交我们对应旺旺名称，我们会给予撤诉对其点店铺无任何影响；
3、理想情况下后期线上店铺可全部收纳成线上分销店铺，后期价格由我方监测。若出现低价者是贵司授权体系内的，我方提交给贵司沟通处理，若无沟通无效果，交由我们投诉处理掉。
若低价者未在授权体系中，我方直接处理掉或收纳分销中
4、预计成效
(1)、提升品牌影响力（重点打击淘宝假冒伪劣和非授权销售的产品，重塑品牌形象和市场）
(2)、提升商品单价（肃清市场，打造线上线下价格体系，维护品牌和经销商利益）
(3)、提升分销商忠诚度（配合品牌商收编/招募优质的分销商，搭建完善的分销体系，共发展）
(4)、提升渠道渗透率（协助品牌商做好日常渠道管理，协调好各渠道的利益分配）
(5)、直接挽回品牌形象提升品牌信任度。
作为国内唯一一个上市的维权公司，我们公司旨在为客户提供全方位的电商服务，电商业务部很多，但每个部门都非常完善，目前控价部门客服团队90+配备一名客服经理，5名客服主管，其中3支知识产权客服团队，2只购买鉴定客服团队，全国20+流动购买地址+全国目前13个运营中心，公司总人数600+以上是硬件，
那再说说软件：关键词搜索软件（多平台单产品型号信息检索：可检索淘宝、天猫PC及手机端信息；京东，苏宁，国美，易迅）实时监控软件（0点到23点，每个整点针对所设定产品型号及价格进行低价信息检索排查，检索完毕后，可直接发送到客户指定邮箱）
经过我们的操作能帮品牌方规范全网的一个价格，不能低于最低的一个零售价销售；对于未授权这样的问题，我们能经过投诉帮品牌方摸底这些店铺，把店铺对应的经销商弄清楚，对于未授权的店铺可以采取收编授权或者是直接清理不让他卖（关于对于未授权的店铺根据客户需求进行相对应的处理）；（注：这个方式可以彻底杜绝网上的假货问题）对于同行侵权问题，我们可以清理掉所有的这样的链接，对于经销商不愿意配合规范价格的可以投诉以示警告，让他明白您品牌方这边是完全有资格去规范他的。
我们的优势
第一、当然是公司规模的对比：
毕竟要找合作商，现在第三方市场那么乱，我相信谁都不会随便找，若找了一家不靠谱的公司，没多久对方公司经营遇到问题，损失的还是自己。那么我们公司从2012年成立的，对于维权这个行业我们已经操作4年多，合作已经正在合作的品牌超过2000家，公司规模600人，在维权市场内，不管是公司规模，还是售后体系，我们都是行业中做的最完善的，像惠普、东芝、海尔、联想这些大型品牌都是在我们这里进行维护，除了杭州总部外，目前我们还在天津、广州、深圳、佛山、宁波等11个运营中心，并且我们今年7月份新三板上市，成为公众公司（公众公司对于效果和口碑是小公司所不能比拟的）。除此之外我们还有沃弗软件事业部、盈电通事业部、互联网咨询事业部、和电商服务事业部，之所以说这些，主要是想让你知道，我们双方之间不单单是在维权服务上面建立合作，只要是你们品牌在电商转型遇到的绝大数需求，我们公司都有相应的服务去深入合作，这点事其他任何维权公司都没有办法做到的。
第二、当然是售后服务：
因为只有完善的售后服务，才能让后期的合作更有保障和安全感。在国内的维权服务，大大小小服务商有上百个，但是60%的市场份额都在我们这边，在整体的操作经验和处理流程上面是其他同行没有办法比拟的。在合作的对接流程、服务主动性、售后反馈方面我们也沉淀也4年时间，在后期服务细节上的把控，才是我们跟同行拉开差距的地方。也是这么多客户选择和我们合作的原因。
第三、当然是技术支持：
维权服务的优劣很大程度上依赖于一家公司的技术实力，因为操作过程当中的数据分析、检索、监控、反馈等等一系列硬件条件决定了后期的服务质量。为了解决技术上的问题，也是为了尽快树立行业标杆，去年初，我们收购了广州的沃弗软件公司名，这家公司可以说是在企业ERP系统、WMS系统和跨界电商系统等全程解决方案和信息化管理沉淀了十年，除了我们没有一家公司愿意为了解决技术上的问题专门收购一家技术型公司
第四、选择公司当然不能仅看眼前，近两年市场竞争这么大，变则通不变多半就会死的社会行情下，我司也会不断的升级产品和服务，为客户提供更好更全面更有效的帮助，以寻求更大的发展机会。
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