[星星]细胞实验 | 细胞功能学实验汇总[星星]

细胞增殖

细胞增殖与细胞凋亡、细胞周期等是肿瘤研究的重要表型,是分子生物学和药理学研究解决的问题之一。通过在细胞中过表达或干扰某个基因研究基因对细胞增殖能力的影响,进一步研究基因的功能,或对细胞进行药物处理,研究药物对增殖的影响。

细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖,是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:CCK8/ CellTiter-Glo™等方法。

[纸飞机]CCK-8实验

Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。

目的:考察目的基因对细胞的增殖能力产生的影响或药物对细胞增殖能力的影响

材料:目的细胞、稳转株(空载、目的基因)

步骤:细胞收集——细胞铺板——(药物处理)——细胞培养0、6、24、48、72小时后加入CCK-8处理,酶标仪检测

结果:如图1.

优势:

操作简单,避免细胞计数过程中人为因素的影响;细胞用量少,检测灵敏度高,稳定;可反复用酶标仪读板,检测时间灵活,不影响细胞进行后续实验;CCK-8产生的Formazan是水溶性的,无需换液,尤其适用于悬浮细胞,与MTT法相比更方便,更安全。

[纸飞机]CTG实验

目的:考察目的基因对细胞的增殖能力产生的影响或药物对细胞增殖能力的影响

材料:目的细胞

步骤:细胞收集——细胞铺板——(药物处理)——细胞培养0、24、48、72、96小时后加入CellTiter-Glo™溶液用微孔板震荡器5分钟,于室温放置10分钟-酶标仪检测荧光值

结果:如图2.

优势:

同普通的MTT、CCK8法相比,CellTiter-Glo™发光活细胞检测系统的检测试剂具有最高灵敏度和较长的信号持续时间,此系统已经广泛地应用在生命科学研究领域中,如一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等;

CellTiter-Glo™试剂和细胞培养中的常用培养基兼容,如RPMI1640、MEM、DMEM和 Ham's F12,也不受酚红和有机溶剂的影响,误差小,准确率高。  

[纸飞机]细胞凋亡

细胞凋亡是肿瘤和发育研究的重点,同时也是药理学研究的热点。细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自主结束其生命的过程。它是一个主动的,高度有序的,基因控制的,一系列酶参与的过程。细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段:接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶的活化(Caspase)→进入连续反应过程。  

目的:通过慢病毒感染获得过表达某基因的细胞株,利用Annexin-PE和7-AAD双染法对正常细胞、对照组细胞、基因过表达组细胞的凋亡情况进行检测,研究基因对细胞凋亡的影响。  

材料:质粒与细胞株  

步骤:细胞准备——收集细胞——Annexin-PE和 7-AAD进行双染色——流式上机检测  

结果:如图3.

[纸飞机]细胞侵袭和迁移

在肿瘤发展过程中,细胞进入循环系统的能力是重要的研究对象。相关的信号通路主要可以分为控制细胞黏附和控制细胞骨架。细胞的迁移与侵袭主要与细胞骨架和黏附相关。肿瘤细胞侵袭和迁移能力的改变通常采用Transwell进行检测。细胞划痕也是测定肿瘤细胞运动特性的方法,由于无法区别正常增殖和迁移细胞,应用有局限性。  

[纸飞机]Transwell实验

Transwell小室底层的一张有通透性的膜(一般为聚碳酸酯膜),将其放置于孔板中,小室内称上室,培养板内称下室。由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞。应用Transwell可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。  

[纸飞机]肿瘤迁移实验

研究肿瘤细胞的迁移能力或特定情况下肿瘤细胞的迁移能力。常用8.0、12.0µm膜,上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。  

[纸飞机]肿瘤侵袭实验

研究肿瘤细胞的侵袭能力或特定情况下肿瘤细胞的侵袭能力。在聚碳酸酯膜上涂上一层基质胶,模仿细胞外基质,上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,细胞要把基质消化后才可以从上室迁移到下室,计数进入下室的细胞量测定细胞的侵袭能力。   

目的:研究目的基因过表达/干扰对细胞侵袭、转移能力的影响

材料:正常细胞、对照慢病毒、过表达基因慢病毒

步骤:细胞复苏——Transwell铺板——细胞培养及染色——拍照

结果:如图4.

[纸飞机]划痕实验

肿瘤细胞在体外仍具有迁移的能力。细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。其借鉴体外细胞致伤愈合实验模型,在体外培养的单层细胞上,划痕致伤,然后比较不同实验组中肿瘤细胞迁移的能力。  

目的:使用筛选的稳定株(转对照病毒、过表达基因病毒),通过对空细胞、对照稳转、目的基因稳转三组细胞进行划痕宽度进行统计学分析,研究基因对细胞迁移能力的影响。

材料:病毒和细胞株,目的细胞来源于客户,稳定株瀚鸿构建  

步骤:细胞铺板——划线——细胞培养及拍照——统计分析  

结果:如图5.

[纸飞机]细胞周期检测

细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段。细胞周期反应了细胞增殖速度,单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法,但它不能代表细胞群体的周期,故现多采用其他方法测群体周期。  

目的:通过慢病毒感染获得基因过表达的细胞株,利用PI染色法结合流式细胞术检测各组细胞周期的变化。从而研究目的基因对细胞周期的影响。  

材料:目的细胞、病毒  

步骤:细胞准备——样品收集——上机检测——数据分析  

结果: 如图6.

[纸飞机]克隆形成实验

目的:通过目的基因过表达/干扰细胞组、空细胞组与阴性对照组(空病毒)克隆形成数量的统计学分析,研究基因对细胞群体依赖性和增殖能力的影响。  

材料:病毒和细胞株  

步骤:铺板——细胞培养——观察克隆,染色,计算克隆形成率  

结果:如图7.

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我们MDL科研平台。具备:
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其中细胞平台拥有独立的无菌细胞培养室、流式细胞仪、超高速冷冻离心机等设备。主要开展细胞培养、细胞爬片、细胞转染、稳转细胞株构建、双荧光素酶报告基因、慢病毒包装、流式细胞术鉴定、流式周期、流式凋亡、细胞系STR鉴定等服务。

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Radiasurf 7155[Synfina-Oleofin] 失水山梨醇油酸酯
Radiasurf 7201[Oleofina S A ] 硬脂酸丙二醇酯
Radiasurf 7206[Oleofina S A ] 油酸丙二醇酯
Radiasurf 7269[Oleofina] 二硬脂酸乙二醇酯
Radiasurf 7270[Oleofina] 硬脂酸乙二醇酯
Radiasurf 7400[Oleofina] 油酸聚乙二醇(2)酯
Radiasurf 7402[Oleofina S A ] 油酸聚乙二醇(4)酯
Radiasurf 7403[Oleofina] 油酸聚乙二醇(8)酯
Radiasurf 7404[Oleofina S A ] 油酸聚乙二醇(12)酯
Radiasurf 7410 7411[Oleofina] 硬脂酸聚乙二醇(2)酯
Radiasurf 7412[Oleofina S A ] 硬脂酸聚乙二醇(4)酯
Radiasurf 7413[Oleofina] 硬脂酸聚乙二醇(8)酯
Radiasurf 7414[Oleofina] 硬脂酸聚乙二醇(12)酯
Radiasurf 7417[Oleofina] 硬脂酸聚乙二醇(6)酯聚乙二醇(32)混合酯
Radiasurf 7420 7421[Oleofina] 月桂酸聚乙二醇(2)酯
Radiasurf 7422[Oleofina] 月桂酸聚乙二醇(4)酯
Radiasurf 7423[Oleofina] 月桂酸聚乙二醇(8)酯
Radiasurf 7443[Oleofina] 二油酸聚乙二醇(8)酯
Radiasurf 7453[Oleofina] 二硬脂酸聚乙二醇(8)酯
Radiasurf 7454[Oleofina S A ] 二硬脂酸聚乙二醇(12)酯
Raylig[ITT Rayonier] 木质素磺酸钠
Raymix[ITT Rayonier](desugared) 木质素磺酸钠
Reax
15B 45A 45L 80C 81A 82 83A 85A 88B SR-1 SR-7[Westvaco](modified) 木质
素磺酸钠
Renex 30[ICI United States] 十三烷基聚氧乙烯(12)醚
Renex 31[ICI United States] 十三烷基聚氧乙烯(15)醚
Renex 36[ICI United States] 十三烷基聚氧乙烯(6)醚
Renex 647[Atlas Chem Ind NV] 聚氧乙烯(4)醚
Renex 648[ICI United States] 聚氧乙烯(5)醚
Renex 649[Atlas Chem Industries NV] 聚氧乙烯(20)醚
Renex 650[ICI United States] 聚氧乙烯(30)醚
Renex 678[ICI United States] 聚氧乙烯(15)醚
Renex 679[Atlas Chem Industries NV] 聚氧乙烯(13)醚
Renex 682[ICI United States] 聚氧乙烯(12)醚
Renex 688[ICI United States] 聚氧乙烯(8)醚
Renex 690[ICI United States] 聚氧乙烯(10)醚
Renex 697[ICI United States] 聚氧乙烯(6)醚
Renex 698[ICI United States](9-9 5EO) 聚氧乙烯(9)醚
Renex 750[ICI Specialty Chem ] 辛基酚聚氧乙烯(10)醚
Retarder CA[Hart Chem Ltd ] 烷基二甲基苄基氯化铵
Rewolan LP[Rewo GmbH] 羊毛脂酸异丙酯
Rewomid 203 S DL203[Dutton

Reinisch] 月桂酰二乙醇胺
Rewomid C212[Dutton

Reinisch] 椰油酰单乙醇胺
Rewomid DLM SE[Rewo Chemische Werke] 肉豆蔻酰二乙醇胺
Rewomid DO280SE[Dutton

Reinisch] 油酰二乙醇胺
Rewomid F[Rewo Chemische Weike GmbH] 亚油酰二乙醇胺
Rewomid IPE 280[Dutton

Reinisch] 油酰单异丙醇胺
Rewomid IPL 203[Dutton

Reinisch] 月桂酰单异丙醇胺
Rewomid IPP 240[Dutton

Reinisch] 椰油酰单异丙醇胺
Rewomid L203[Dutton

Reinisch] 月桂酰单乙醇胺
Rewominox L408[Rewo GmbH] 月桂基二甲基氧化胺
Rewominox S 300[Rewo GmbH] 硬脂基二甲基氧化胺
Rewominoxid B 204[Dutton

Reinisch] 椰油酰胺基丙基氧化胺
Rewopal C-6[Dutton

Reinisch] 椰油酰胺聚氧乙烯(6)醚
Rewopal HV4[Rewo Chemische Werke GmbH] 聚氧乙烯(4)醚
Rewopal HV5[Dutton

Reinisch] 聚氧乙烯(5)醚
Rewopal HV6[Rewo Chemische Werke GmbH] 聚氧乙烯(6)醚
Rewopal HV8[Dutton

Reinisch] 聚氧乙烯(8)醚
Rewopal HV9[Dutton

Reinisch] 聚氧乙烯(9)醚
Rewopal HV10[Dutton

Reinisch] 聚氧乙烯(10)醚
Rewopal PEG 6000 DS[Rewo Chemische Werke GmbH] 二硬脂酸聚乙二醇(150)

Rewopal PG 280[Rewo Chemische Werke] 二硬脂酸乙二醇酯
Rewopol B2003[Rewo]N-(1 2-二羧基乙基)-N-硬脂基磺基琥珀酰胺酸四钠
Rewopol MLS30 MLS35[Rewo Chemische Werke] 月桂基硫酸单乙醇胺
Rewopol NEHS 40[Rewo Chemische] 辛基硫酸钠
Rewopol NLS 15 L[Rewo] 月桂基硫酸钠
Rewopol SBC 212 SBC 212 G[ Rewo Chemische Werke GmbH]磺基琥珀酸椰
油酰胺基乙酯二钠
Rewopol SBF18[Rewo] 硬脂基磺基琥珀酰胺酸二钠
Rewopol SBFA30[Dutton

Reinisch] 磺基琥珀酸月桂基聚氧乙烯(1 4)
醚酯二钠
Rewopol SBL203[Dutton

Reinisch] 磺基琥珀酸月桂酰胺基乙酯二钠
Rewoquat B50[Rewo GmbH] 烷基二甲基苄基氯化铵
Rewoquat W-7500 W-7500 H[Rewo;Rewo GmbH] 1-牛油酰胺基乙基-1-甲基
-2-牛油基咪唑啉甲酯硫酸鎓
Reworyl ACS60[Rewo Chemische Werke GmbH] 异丙基苯磺酸铵
Reworyl NCS40[Rewo Chem Werke GmbH] 异丙基苯磺酸钠
Reworyl NTS40[Rewo Chemische] 甲苯磺酸钠
Reworyl NXS40[Rewo] 二甲苯磺酸铵
Rewoteric AM-B13[Rewo GmbH] 椰油酰胺基丙基甜菜碱
Rewoteric AM-DML[Rewo Chemische Werke] 月桂基甜菜碱
Rewoteric AM-KSF[Rewo Chemische Werke] 椰油酰胺基乙基-N-羟乙基氨基
丙酸钠
Rewoteric AM-R40[Rewo GmbH] 蓖麻油酰胺基丙基甜菜碱
Rexol 25 1[Hart Chem Ltd ] 乙二醇醚
Rexol 25 20[Hart Chern Ltd ] 聚氧乙烯(20)醚
Rexol 25 30 25 307[Hart Chem Ltd ] 聚氧乙烯(30)醚
Rexol 25 50 25 507[Hart Chem Ltd ] 聚氧乙烯(50)醚
Rexol 25 100-70%[Hart Chem Ltd ] 聚氧乙烯(100)醚
Rexol 45 1[Hart Chem Ltd ] 辛基酚乙二醇醚
Rexol 45 3[Hart Chem Ltd ] 辛基酚聚氧乙烯(3)醚
Rexol 45 5[Hart Chem Ltd ] 辛基酚聚氧乙烯(5)醚
Rexol 45 7[Hart Chem Ltd ] 辛基酚聚氧乙烯(7)醚
Rexol 45 10[Hart Chem Ltd ] 辛基酚聚氧乙烯(10)醚
Rexol 45 12[Hart Chem Ltd ] 辛基酚聚氧乙烯(12)醚
Rexol 45 307[Hart Chem Ltd ] 辛基酚聚氧乙烯(30)醚
Rexol 45 407[Hart Chem Ltd ] 辛基酚聚氧乙烯(40)醚
Rheodol AO-10 SP-O10[Kao] 失水山梨醇油酸酯
Rheodol AO-15[Kao] 失水山梨醇倍半油酸酯
Richamate 1655 MBF[Richardson] 椰油酰胺基丙基二甲基胺丙酸盐
Richamate 3780[Richardson] 硬脂酰胺基丙基二甲基胺乳酸盐
Richamate ISML[Richardson] 异硬脂酰胺基丙基吗啉乳酸盐
Richamide 5085[Richardson](2:1) 油酰二乙醇胺
Richamiide 6310[Richardson] 月桂酰二乙醇胺
Richamide 6404 M-3[Richardson] 椰油酰二乙醇胺
Richamide MX[Richardson] 椰油酰单乙醇胺
Richonate CS-6021H[Richardson] 十二烷基苯磺酸钙
Richonate SXS[Richardson] 二甲苯磺酸钠
Richonate YLA[Richardson] 十二烷基苯磺酸异丙基胺
Richonol AM[Richardson] 月桂基硫酸铵
Richonol Mg[Richardson] 月桂基硫酸镁
Richonol S-1300 S-1300C[Richardson] 月桂基聚氧乙烯(1 4)醚硫酸铵
Rilanit BS[Henkel KGaA] 硬脂酸丁酯
Rilanit DBS[Henkel KGaA] 癸二酸二丁酯
Rilanit G16[Henkel KGaA] 鲸蜡醇
Rilanit GTO[Henkel KGaA] 甘油三油酸酯
Rilanit GTS[Henkel KGaA] 甘油三硬脂酸酯
Rilanit HL[Henkel KGaA] 月桂酸己酯
Rilanit IBS[Henkel KGaA] 硬脂酸异丁酯
Rilanit IPM[Henkel KGaA] 肉豆蔻酸异丙酯
Rilanit IPP[Henkel KGaA] 棕榈酸异丙酯
Rilanit IPS[Henkel KGaA] 硬脂酸异丙酯
Rilanit OLO[Henkel KGaA] 油酸油醇酯
Rilanit STS-T[Henkel KGaA] 硬脂酸十八烷酯
Ritacetyl[RITA] 乙酰化羊毛脂
Ritahydrox[RITA] 羟基羊毛脂
Ritalafa[R I T A ] 羊毛脂酸
Ritalan[RITA] 羊毛脂油
Ritasol[RITA] 羊毛脂酸异丙酯
Ritawax[RITA] 羊毛脂醇
Ritawax ALA[Rita] 乙酰化羊毛脂醇
Rodea[Alcolac](2:1) 蓖麻油酰二乙醇胺
RS-55-40[Hefti Ltd ] 硬脂酸聚乙二醇(40)酯
RS-55-100[Hefti Ltd ] 硬脂酸聚乙二醇(100)酯
Rycel 100 105[Ryco] 羧甲基纤维素钠
Ryoto Sugar Ester S-1570 S-1670[Ryoto Co Ltd ] 蔗糖硬脂酸酯
Ryoto Sugar Ester S-570 S-770[Ryoto Co ] 蔗糖二硬脂酸酯
S-Maz 20 20R[Mazer] 失水山梨醇单月桂酸酯
S-Maz 40[Mazer] 失水山梨醇棕榈酸酯
S-Maz 60 60K[Mazer] 失水山梨醇硬脂酸酯
S-Maz 65[Mazer] 失水山梨醇三硬脂酸酯
S-Maz 67[Mazer] 失水山梨醇异硬脂酸酯
S-Maz 80[PPG-Mazer] 失水山梨醇油酸酯
S-Maz 83R[PPG-Mazer] 失水山梨醇倍半油酸酯
S-Maz 85[Mazer] 失水山梨醇三油酸酯
Sactipon 2A[Lever Industriel] 月桂基硫酸铵
Sactipon 2M[Lever Industriel] 月桂基硫酸单乙醇铵
Sactipon 2OA[Lever Industriel] 月桂基聚氧乙烯(1 4)醚硫酸铵
Sactipon 2OM[Lever Industriel] 月桂基聚氧乙烯(1 4)醚硫酸单乙醇铵
Sactipon 2OMG[Lever Industriel] 月桂基聚氧乙烯(1 4)醚硫酸镁
Sactol 2A[Lever Industriel] 月桂基硫酸铵
Sactol 2M[Lever Industriel] 月桂基硫酸单乙醇铵
Sactol 2OA[Lever Industriel] 月桂基聚氧乙烯(1 4)醚硫酸铵
Sactol 2OM[Lever Industriel] 月桂基聚氧乙烯(1 4)醚硫酸单乙醇铵
Sactol 2 OMG[Lever Industriel] 月桂基聚氧乙烯(1 4)醚硫酸镁
Sandoz Amine Oxide XA-L[Sandoz] 月桂基二甲基氧化铵
Sandoz Sulfate EP[Sandoz Color

Chem] 月桂基硫酸二乙醇铵
Sanmorin OT 70[Sayno Chem Ind Ltd ] 磺基琥珀酸二辛酯二钠
Santone 10-10-O[Durkee] 十聚甘油十油酸酯
Sarkosyl L NL-30[Ciba-Geigy] N-月桂酰基肌氨酸
Sarkosyl LC[Ciba-Geigy] 椰油酰基肌氨酸
Sarkosyl NL-30[Ciba-Geigy] 月桂酰基肌氨酸钠
Sarkosyl O[Ciba-Geigy]N-油酰基肌氨酸
Satulan[Croda;Croda Ltd ]氢化羊毛脂
Scher PEG 200 Dilaurate[Scher] 二月桂酸聚乙二醇(4)酯
Scher PEG 400 Dilaurate[Scher] 二月桂酸聚乙二醇(8)酯
Scher PEG 400 Monolaurate[Scher] 月桂酸聚乙二醇(8)酯
Scher PEG 400 Monooleate[Scher] 油酸聚乙二醇(8)酯
Scher PEG 400 Monostearate[Scher] 硬脂酸聚乙二醇(8)酯
Scher PEG-400 Distearate[Scher] 二硬脂酸聚乙二醇(8)酯
Scher PEG-600 Distearate[Scher] 二硬脂酸聚乙二醇(12)酯
Schercamox C-AA[Scher] 椰油酰胺基丙基氧化胺
Schercamox CMA[Scher] 椰油基二羟乙基氧化胺
Schercamox DMA DMM[Scher] 肉豆蔻酸二甲基氧化胺
Schercamox DML[Scher] 月桂基二甲基氧化胺
Schercamox DMS[Scher] 硬脂基二甲基氧化胺
Schercamox T-12[Scher] 牛油基二羟乙基氧化胺
Schercemol 185[Scher] 新戊酸异十八烷酯
Schercemol 318[Scher] 异硬脂酸异丙酯
Schercemol 1688[Scher] 辛酸十六 十八烷酯
Schercemol BE[Scher] 芥酸山萮醇酯
Schercemol CL[Scher] 乳酸十六烷酯
Schercemol CM[Scher] 肉豆蔻酸十六烷酯
Schercemol CP[Scher] 棕榈酸十六烷酯
Schercemol CS[Scher] 硬脂酸十六烷酯
Schercemol DEGMS[Scher] 硬脂酸聚乙二醇(2)酯
Schercemol DIA[Scher] 己二酸二异丙酯
Schercemol DO[Scher] 油酸癸酯
Schercemol EGMS[Scher] 硬脂酸乙二醇酯
Schercemol GMIS[Scher] 甘油异硬脂酸酯
Schercemol ICS[Scher] 硬脂酸异十六烷酯
Schercemol IPM[Scher] 肉豆蔻酸异丙酯
Schercemol IPO[Scher] 油酸异丙酯
Schercemol LL[Scher] 乳酸月桂酯
Schercemol MEM-3[Scher] 肉豆蔻基聚氧乙烯(3)醚肉豆蔻酸酯
Schercemol ML[Scher] 乳酸肉豆蔻酯
Schercemol MM[Scher] 肉豆蔻酸肉豆蔻酯
Schercemol MP[Scher] 丙酸肉豆蔻酯
Schercemol MS[Scher] 硬脂酸肉豆蔻酯
Schercemol OLO[Scher] 油酸油醇酯
Schercemol OP[Scher] 棕榈酸异辛酯
Schercemol PGDP[Scher] 二壬酸丙二醇酯
Schercemol PGML[Scher] 月桂酸丙二醇酯
Schercemol PGMS[Scher] 硬脂酸丙二醇酯
Schercodine B[Scher] 山萮酰胺基丙基二甲基叔胺
Schercodine C[Scher] 椰油酰胺基丙基二甲基叔胺
Schercodine I[Scher] 异硬脂酰胺基丙基二甲基叔胺
Schercodine M[Scher] 肉豆蔻酰胺基丙基二甲基叔胺
Schercodine O[Scher] 油酰胺基丙基二甲基叔胺
Schercodine P[Scher] 棕榈酰胺基丙基二甲基叔胺
Schercodine S[Scher] 硬脂酰胺基丙基二甲基叔胺
Schercomid AME AME-70[Scher] 乙酰单乙醇胺
Schercomid CCD CDA CDA-H SCE SCO-Extra[Scher] 椰油酰二乙醇胺


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