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Cre-LoxP系统质粒验证，快来看看吧[太开心]
Cre是一种在噬菌体中发现的重组酶，能够识别特异性位点（LoxP），使2个LoxP位点之间的DNA序列发生精确重组。LoxP位点是噬菌体中长度为34bp的回文结构序列，具有方向性，LoxP的方向影响DNA重组的结果。目前已发现多种LoxP位点，均可被Cre酶识别。Cre-LoxP系统经常被用于化学遗传激活和基因敲除领域。
DIO-mCherry质粒是基于Cre重组酶活性报告质粒。该质粒包含CAG启动子、正向LoxP、正向LoxP 2272、反向mCherry、反向LoxP、反向LoxP 2272、WPRE等结构。在Cre重组酶的作用下，反向mCherry序列会发生翻转，进而正常翻译mCherry红色荧光蛋白（见图1）。
在本案例中，我们将DIO-mCherry（质粒A）、pLVX-EGFP-CRE（质粒B）、pAAV-EGFP-CRE（质粒C）单独或组合转染至肝癌Huh7细胞中。转染48h后，在荧光显微镜下观察。其中4组和5组可以观察到红色荧光，表明CRE酶在细胞中发挥作用，将反向mCherry基因序列翻转，从而使其正常表达（见图2）。
#长沙[地点]#
Cre是一种在噬菌体中发现的重组酶，能够识别特异性位点（LoxP），使2个LoxP位点之间的DNA序列发生精确重组。LoxP位点是噬菌体中长度为34bp的回文结构序列，具有方向性，LoxP的方向影响DNA重组的结果。目前已发现多种LoxP位点，均可被Cre酶识别。Cre-LoxP系统经常被用于化学遗传激活和基因敲除领域。
DIO-mCherry质粒是基于Cre重组酶活性报告质粒。该质粒包含CAG启动子、正向LoxP、正向LoxP 2272、反向mCherry、反向LoxP、反向LoxP 2272、WPRE等结构。在Cre重组酶的作用下，反向mCherry序列会发生翻转，进而正常翻译mCherry红色荧光蛋白（见图1）。
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