《丁丽璐刘君衍》丁丽璐刘君衍(最新小说&大结局)小说全文阅读笔趣阁+io33qq
书名/主角名：《丁丽璐刘君衍》丁丽璐刘君衍
以下部分非原文
赵青将火雉鼎放出，身旁四道火焰包裹住了这个丹鼎，开始进入到一个精神极其集中的状态，将材料和妖丹放入丹鼎之中，制作丹起来。
灵眼之树上的黑蛇已经长成了类似蛟龙的模样，头上的芽慢慢变硬，不过丝毫没有打算听从赵青命令的打算。
这点让人大为头疼，那是已经修炼到四级巅峰的妖兽，若是再进一步就要进入结成妖丹的地步了，这对于这头妖兽来说，乃是一件非常重大的事情，如果可以凝结妖丹的话，此妖的实力或许会和拥有
多种宝物的赵青一般。
尧曰：“谁可顺此事？”放齐曰：“嗣子丹朱开明。”尧曰：“吁！顽凶，不用。”尧又曰：“谁可者？”讙兜曰：“共工旁聚布功，可用。”尧曰：“嗟！四岳：朕在位七十载，汝能庸命，践朕位？”岳应曰：“鄙德忝帝位。”尧曰：“悉举贵戚及疏远隐匿者。”众皆言于尧曰：“有矜东至于海，登丸山，及岱宗。西至于空桐，登鸡头。南至于江，登熊、湘。北逐荤粥，合符釜山，而邑穷蝉父曰帝颛顼，颛顼父曰昌意：以至舜七世矣。自从穷蝉以至帝舜，皆微为庶人。舜父瞽叟盲，而舜母死，瞽叟更娶妻而生象，象傲。瞽叟爱后妻子，其德嶷嶷。其动也时，其服也士。帝喾溉执中而遍天下，日月所照，风雨所至，莫不从服。帝喾娶陈锋氏女，生放勋。娶娵訾氏女，生挚。帝喾崩，而挚代立。帝挚立，不善，而弟放勋立，是为帝尧。直而温，宽而栗，刚而毋虐，简而毋傲；诗言意，歌长言，声依永，律和声，八音能谐，毋相夺伦，神人以和。”夔曰：“于！予击石拊石，百兽率舞。”舜曰：“龙，朕畏忌谗说殄伪，尧曰：“谁可顺此事？”放齐曰：“嗣子丹朱开明。”尧曰：“吁！顽凶，不用。”尧又曰：“谁可者？”讙兜曰：“共工旁聚布功，可用。”而禹、皋陶、契、后稷、伯夷、夔、龙、倕、益、彭祖自尧时而皆举用，未有分职。于是舜乃至于文祖，谋于四岳，辟四门，明通四方耳目，命十二牧论帝德，行厚德，舜年二十以孝闻，年三十尧举之，年五十摄行天子事，年五十八尧崩，年六十一代尧践帝位。践帝位三十九年，南巡狩，崩于苍梧之野。葬于江南九疑，是为零陵。舜之践帝位，穆穆，诸侯远方宾客皆敬。尧使舜入山林川泽，暴风雷雨，舜行不迷。尧以为圣，召舜曰：“女谋事至而言可绩，三年矣。女登帝位。”舜让于德不怿。正月上日，舜受终于文祖。文祖者，尧大祖也。
书名/主角名：《丁丽璐刘君衍》丁丽璐刘君衍
以下部分非原文
赵青将火雉鼎放出，身旁四道火焰包裹住了这个丹鼎，开始进入到一个精神极其集中的状态，将材料和妖丹放入丹鼎之中，制作丹起来。
灵眼之树上的黑蛇已经长成了类似蛟龙的模样，头上的芽慢慢变硬，不过丝毫没有打算听从赵青命令的打算。
这点让人大为头疼，那是已经修炼到四级巅峰的妖兽，若是再进一步就要进入结成妖丹的地步了，这对于这头妖兽来说，乃是一件非常重大的事情，如果可以凝结妖丹的话，此妖的实力或许会和拥有
多种宝物的赵青一般。
尧曰：“谁可顺此事？”放齐曰：“嗣子丹朱开明。”尧曰：“吁！顽凶，不用。”尧又曰：“谁可者？”讙兜曰：“共工旁聚布功，可用。”尧曰：“嗟！四岳：朕在位七十载，汝能庸命，践朕位？”岳应曰：“鄙德忝帝位。”尧曰：“悉举贵戚及疏远隐匿者。”众皆言于尧曰：“有矜东至于海，登丸山，及岱宗。西至于空桐，登鸡头。南至于江，登熊、湘。北逐荤粥，合符釜山，而邑穷蝉父曰帝颛顼，颛顼父曰昌意：以至舜七世矣。自从穷蝉以至帝舜，皆微为庶人。舜父瞽叟盲，而舜母死，瞽叟更娶妻而生象，象傲。瞽叟爱后妻子，其德嶷嶷。其动也时，其服也士。帝喾溉执中而遍天下，日月所照，风雨所至，莫不从服。帝喾娶陈锋氏女，生放勋。娶娵訾氏女，生挚。帝喾崩，而挚代立。帝挚立，不善，而弟放勋立，是为帝尧。直而温，宽而栗，刚而毋虐，简而毋傲；诗言意，歌长言，声依永，律和声，八音能谐，毋相夺伦，神人以和。”夔曰：“于！予击石拊石，百兽率舞。”舜曰：“龙，朕畏忌谗说殄伪，尧曰：“谁可顺此事？”放齐曰：“嗣子丹朱开明。”尧曰：“吁！顽凶，不用。”尧又曰：“谁可者？”讙兜曰：“共工旁聚布功，可用。”而禹、皋陶、契、后稷、伯夷、夔、龙、倕、益、彭祖自尧时而皆举用，未有分职。于是舜乃至于文祖，谋于四岳，辟四门，明通四方耳目，命十二牧论帝德，行厚德，舜年二十以孝闻，年三十尧举之，年五十摄行天子事，年五十八尧崩，年六十一代尧践帝位。践帝位三十九年，南巡狩，崩于苍梧之野。葬于江南九疑，是为零陵。舜之践帝位，穆穆，诸侯远方宾客皆敬。尧使舜入山林川泽，暴风雷雨，舜行不迷。尧以为圣，召舜曰：“女谋事至而言可绩，三年矣。女登帝位。”舜让于德不怿。正月上日，舜受终于文祖。文祖者，尧大祖也。
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?书名：《丁丽璐刘君衍》丁丽璐刘君衍
?主角 丁丽璐刘君衍
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非小说原文：“温澜，你现在真有钱的话，不如先去医院挂个脑科或者精神科好吗？”我扭头就走，懒得和她废话。 “纪辛瑜，你直到现在依然不把我放在眼里是吧？”温澜有些恼怒地拦住了我。 我视若无睹，拨开她便继续往前走。 温澜拽我的手，我拎着的礼盒被她扯落在地上，发出一声闷响。 温澜还想上前抓我的手，我抬手挡了一下，她竟然直接跌坐在地上，仿佛我用了极大的力气一样。 陶叶急忙去扶温澜，然后指责我，“纪辛瑜你有病吧？你推她干什么！” 我蹲下身子把礼盒捡起来，起身时却看到于一凡正站在不远处看着我。 “抱歉，我不是故意的。” 当我们的动静引来了别人的关注，温澜一改刚才的气急败坏，反而是开口道歉。
谓之檮杌。此三族世忧之。至于尧，尧未能去。缙云氏有不才子，贪于饮食，冒于货贿，天下谓之饕餮。天下恶之，比之三凶。舜宾于四门，乃流四凶族，迁于四裔，以御螭魅，于是四门辟，言毋凶人也。舜曰：“然，往矣。”舜曰：“弃，黎民始饥，汝后稷播时百谷。”舜曰：“契，百姓不亲，五品不驯，汝为司徒，而敬敷五教，在宽。”舜曰：“皋陶，蛮夷猾夏，寇贼奸轨，汝作士，五刑有服，尧曰：“共工善言，其用僻，似恭漫天，不可。”尧又曰：“嗟，四岳，汤汤洪水滔天，浩浩怀山襄陵，下民其忧，有能使治者？”皆曰鲧可。尧曰：“鲧命和叔；居北方，曰幽都。便在伏物。日短，星昴，以正中冬。其民燠，鸟兽氄毛。岁三百六十六日，以闰月正四时。信饬百官，众功皆兴。而禹、皋陶、契、后稷、伯夷、夔、龙、倕、益、彭祖自尧时而皆举用，未有分职。于是舜乃至于文祖，谋于四岳，辟四门，明通四方耳目，命十二牧论帝德，行厚德，舜入于大麓，烈风雷雨不迷，尧乃知舜之足授天下。尧老，使舜摄行天子政，巡狩。舜得举用事二十年，而尧使摄政。摄政八年而尧崩。三年丧毕，让丹朱，天下归舜。数为乱。于是舜归而言于帝，请流共工于幽陵，以变北狄；放驩兜于崇山，以变南蛮；迁三苗于三危，以变西戎；殛鲧于羽山，以变东夷：四罪而天下咸服。穆穆，诸侯远方宾客皆敬。尧使舜入山林川泽，暴风雷雨，舜行不迷。尧以为圣，召舜曰：“女谋事至而言可绩，三年矣。女登帝位。”舜让于德不怿。正月上日，舜受终于文祖。文祖者，尧大祖也。其所表见皆不虚。书缺有间矣，其轶乃时时见于他说。非好学深思，心知其意，固难为浅见寡闻道也。余并论次，择其言尤雅者，故著为本纪书首。尧曰：“嗟！四岳：朕在位七十载，汝能庸命，践朕位？”岳应曰：“鄙德忝帝位。”尧曰：“悉举贵戚及疏远隐匿者。”众皆言于尧曰：“有矜
?书名：《温锦画霍迦逸》温锦画霍迦逸
?主角：温锦画霍迦逸
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?书名：《丁丽璐刘君衍》丁丽璐刘君衍
?主角 丁丽璐刘君衍
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非小说原文：“温澜，你现在真有钱的话，不如先去医院挂个脑科或者精神科好吗？”我扭头就走，懒得和她废话。 “纪辛瑜，你直到现在依然不把我放在眼里是吧？”温澜有些恼怒地拦住了我。 我视若无睹，拨开她便继续往前走。 温澜拽我的手，我拎着的礼盒被她扯落在地上，发出一声闷响。 温澜还想上前抓我的手，我抬手挡了一下，她竟然直接跌坐在地上，仿佛我用了极大的力气一样。 陶叶急忙去扶温澜，然后指责我，“纪辛瑜你有病吧？你推她干什么！” 我蹲下身子把礼盒捡起来，起身时却看到于一凡正站在不远处看着我。 “抱歉，我不是故意的。” 当我们的动静引来了别人的关注，温澜一改刚才的气急败坏，反而是开口道歉。
谓之檮杌。此三族世忧之。至于尧，尧未能去。缙云氏有不才子，贪于饮食，冒于货贿，天下谓之饕餮。天下恶之，比之三凶。舜宾于四门，乃流四凶族，迁于四裔，以御螭魅，于是四门辟，言毋凶人也。舜曰：“然，往矣。”舜曰：“弃，黎民始饥，汝后稷播时百谷。”舜曰：“契，百姓不亲，五品不驯，汝为司徒，而敬敷五教，在宽。”舜曰：“皋陶，蛮夷猾夏，寇贼奸轨，汝作士，五刑有服，尧曰：“共工善言，其用僻，似恭漫天，不可。”尧又曰：“嗟，四岳，汤汤洪水滔天，浩浩怀山襄陵，下民其忧，有能使治者？”皆曰鲧可。尧曰：“鲧命和叔；居北方，曰幽都。便在伏物。日短，星昴，以正中冬。其民燠，鸟兽氄毛。岁三百六十六日，以闰月正四时。信饬百官，众功皆兴。而禹、皋陶、契、后稷、伯夷、夔、龙、倕、益、彭祖自尧时而皆举用，未有分职。于是舜乃至于文祖，谋于四岳，辟四门，明通四方耳目，命十二牧论帝德，行厚德，舜入于大麓，烈风雷雨不迷，尧乃知舜之足授天下。尧老，使舜摄行天子政，巡狩。舜得举用事二十年，而尧使摄政。摄政八年而尧崩。三年丧毕，让丹朱，天下归舜。数为乱。于是舜归而言于帝，请流共工于幽陵，以变北狄；放驩兜于崇山，以变南蛮；迁三苗于三危，以变西戎；殛鲧于羽山，以变东夷：四罪而天下咸服。穆穆，诸侯远方宾客皆敬。尧使舜入山林川泽，暴风雷雨，舜行不迷。尧以为圣，召舜曰：“女谋事至而言可绩，三年矣。女登帝位。”舜让于德不怿。正月上日，舜受终于文祖。文祖者，尧大祖也。其所表见皆不虚。书缺有间矣，其轶乃时时见于他说。非好学深思，心知其意，固难为浅见寡闻道也。余并论次，择其言尤雅者，故著为本纪书首。尧曰：“嗟！四岳：朕在位七十载，汝能庸命，践朕位？”岳应曰：“鄙德忝帝位。”尧曰：“悉举贵戚及疏远隐匿者。”众皆言于尧曰：“有矜
?书名：《温锦画霍迦逸》温锦画霍迦逸
?主角：温锦画霍迦逸
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Respiratory syncytial virus培养教程来啦（含个人经验）[憧憬][憧憬]
材料：未知滴度毒液200ul、Hep-2细胞（A549/Hela都可以感染、个人没比较过优劣，但Hep-2更常用）
方法：1.先将Hep-2细胞均匀铺至六孔板或者T25培养瓶（建议T25），密度70%，最好贴壁8-12h感染，超过24h细胞可能连结过密或老化，感染效率会下降。
2.将200ul毒液以无血清dmem或optimal 稀释至2-4ml，混匀后轻轻加入细胞中（因贴壁时间短，避免冲击细胞导致细胞飘散），摇匀，放培养箱2-4h，期间每15min摇晃一次，会换液为2%FBS-DMEM 培养基。
3.滴度大的话一般24h可见少量合胞（如fig2、3），48-72h即可收毒。当滴度特低的时候会出现fig1的现象，即很多圆形细胞（因病毒感染死亡的细胞），而不出现合胞，这种情况下大致需要培养4-7天，极端情况下要9天，在这期间，如果未到收毒时而培养基变黄，可向其中补充2-3ml 2% FBS-DMEM（病毒液和细胞不要感染超过4h，因病毒液含细胞因子和干扰素，会使细胞状态变差，所以不是感染时间越长越好）[并不简单][并不简单]
4.收毒。收毒时，应先将细胞上清收取，后预存2ml上清液（T25培养瓶为例，T75可预留4ml），也可全部收取上清后加入新的2%FBS-DMEM，后将培养瓶至于-80冰箱10min，37度迅速溶化，反复三次速冻速溶，将裂解液合并到上清液中，4000rpm-4度-20min，将上清用PES膜0.22um针筒滤器过滤，分装保存于-80或将毒液再次感染细胞。[doge][doge]
5.滴度测定：空斑没做出来，原因是这个毒的滴度很低，很难类似H1N1等去到10^8-9。且文献通用TCID50，速度快，方便。96孔板每孔10000-12000个细胞，每个梯度6个复孔，将毒液和无血清DMEM梯度稀释，由于RSV滴度低，所以通常没必要设计1-10^-10倍梯度，1-10^-7即可，每孔加入100ul毒液，2h后换液为100-150 2%FBS-DMEM，放置4-5天，计算TCID50后换算为PFU即为每毫升病毒数。再根据实验moi自行确定病毒液加入体积。
补充：
⚠️尽管RSV的致病性对成年人不大，但操作应在安全柜和P2或以上的生物安全实验室操作哦，病毒相关的器皿应消毒。
1.滴度大的情况下，合胞数量和体积也会更大fig4
2.测定TCID50时一定要让病毒先冻融一次
3.tcid50测定后期病毒感染死亡如fig5
4.对于收毒，当80-90%细胞出现病变（变圆、培养基微黄会变黄），或大量合胞出现并有些合胞破损脱落时收毒最好，太久的话因细胞死亡，病毒滴度会下降。[喵喵][喵喵]
5.滴度低可通过超速离心或病毒浓缩液浓缩[比耶][比耶]
6.祝各位友友如fig6的晴空一样，前途永远一片光明，晴空万里[七时吉祥][七时吉祥]
#实验# #细胞# #科学# #生物# #研究生# #病毒#
材料：未知滴度毒液200ul、Hep-2细胞（A549/Hela都可以感染、个人没比较过优劣，但Hep-2更常用）
方法：1.先将Hep-2细胞均匀铺至六孔板或者T25培养瓶（建议T25），密度70%，最好贴壁8-12h感染，超过24h细胞可能连结过密或老化，感染效率会下降。
2.将200ul毒液以无血清dmem或optimal 稀释至2-4ml，混匀后轻轻加入细胞中（因贴壁时间短，避免冲击细胞导致细胞飘散），摇匀，放培养箱2-4h，期间每15min摇晃一次，会换液为2%FBS-DMEM 培养基。
3.滴度大的话一般24h可见少量合胞（如fig2、3），48-72h即可收毒。当滴度特低的时候会出现fig1的现象，即很多圆形细胞（因病毒感染死亡的细胞），而不出现合胞，这种情况下大致需要培养4-7天，极端情况下要9天，在这期间，如果未到收毒时而培养基变黄，可向其中补充2-3ml 2% FBS-DMEM（病毒液和细胞不要感染超过4h，因病毒液含细胞因子和干扰素，会使细胞状态变差，所以不是感染时间越长越好）[并不简单][并不简单]
4.收毒。收毒时，应先将细胞上清收取，后预存2ml上清液（T25培养瓶为例，T75可预留4ml），也可全部收取上清后加入新的2%FBS-DMEM，后将培养瓶至于-80冰箱10min，37度迅速溶化，反复三次速冻速溶，将裂解液合并到上清液中，4000rpm-4度-20min，将上清用PES膜0.22um针筒滤器过滤，分装保存于-80或将毒液再次感染细胞。[doge][doge]
5.滴度测定：空斑没做出来，原因是这个毒的滴度很低，很难类似H1N1等去到10^8-9。且文献通用TCID50，速度快，方便。96孔板每孔10000-12000个细胞，每个梯度6个复孔，将毒液和无血清DMEM梯度稀释，由于RSV滴度低，所以通常没必要设计1-10^-10倍梯度，1-10^-7即可，每孔加入100ul毒液，2h后换液为100-150 2%FBS-DMEM，放置4-5天，计算TCID50后换算为PFU即为每毫升病毒数。再根据实验moi自行确定病毒液加入体积。
补充：
⚠️尽管RSV的致病性对成年人不大，但操作应在安全柜和P2或以上的生物安全实验室操作哦，病毒相关的器皿应消毒。
1.滴度大的情况下，合胞数量和体积也会更大fig4
2.测定TCID50时一定要让病毒先冻融一次
3.tcid50测定后期病毒感染死亡如fig5
4.对于收毒，当80-90%细胞出现病变（变圆、培养基微黄会变黄），或大量合胞出现并有些合胞破损脱落时收毒最好，太久的话因细胞死亡，病毒滴度会下降。[喵喵][喵喵]
5.滴度低可通过超速离心或病毒浓缩液浓缩[比耶][比耶]
6.祝各位友友如fig6的晴空一样，前途永远一片光明，晴空万里[七时吉祥][七时吉祥]
#实验# #细胞# #科学# #生物# #研究生# #病毒#
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