刚开始玩1999是因为抖音刷到了兔毛手袋的个人介绍以及分析 当时就狠狠地爱上了小比的立绘 后来发现小比的人设也狠狠戳我xp 下载完1999之后狠心要抽兔毛 开了两个小号每个号都抽了40发 来的六星比我现在玩的号都多结果就是没有小比我sad得要命 再后来我直接一咬牙花30rbuy了一个有小比和叉哥的号 原号主应该推实验三人组吧 反正我超爱！！！再后来慢慢培养小比 把一个奶妈打成兽c 看着小比的生日我陷入了沉思：原来我们生日只差一天射手座疯批我狠狠爱
#健康登顶计划# #brainnews[超话]#
科研干货| RV逆向跨单突触标记系统使用指南
来源：布林凯斯 ，作者携萌宠驾到的
狂犬病毒(rabies virus，以下简称为RV)，RV归类于弹状病毒科狂犬病毒属。病毒外壳呈弹状，有包膜包裹，核衣壳螺旋对称，内含负义单链RNA，编码5种病毒蛋白。其中G蛋白与RV的感染与传播息息相关，在失去G蛋白的情况下，RV无法形成感染性病毒颗粒，也无法感染与传播。野生型RV具有逆向跨突触传播的特性，可以用于灵长类及啮齿类动物神经解剖学的研究[1]。利用RV做示踪工具病毒有独特优势，除特异性跨突触传播外，RV感染中枢系统后，主要标记神经元，几乎不标记胶质细胞；对没有突触连接的神经纤维不感染，毒性低，被感染的神经元几乎不发生明显病变及裂解[2]。
Wickersham等[3/4] 基于RV疫苗株Sad B-19感染性克隆构建的重组狂犬病毒，敲除G蛋白基因并携带GFP、mCherry等荧光蛋白基因，结合EnvA/TVA 系统可实现细胞特异性起始感染。因为EnvA识别的受体蛋白TVA只分布在禽类细胞表面，利用重组囊膜蛋白包装RV，产生的病毒粒子不能直接感染哺乳动物，若利用AAV、慢病毒、逆转录病毒等将 TVA 表达在哺乳动物的细胞膜上，则这种RV可特异性识别并感染表达了TVA的神经元。由于这种RV的G蛋白(RV-G)基因缺失，进入神经元后，可复制并表达外源基因，但不能包装产生成熟的病毒粒子来感染上一级神经元。如果同时在这类神经元中外源性补充RV-G，即可在该类神经元中产生成熟的假病毒粒子，可以用来跨突触感染上一级神经元。进入上一级神经元后，RV-G缺失的病毒可以复制并表达外源基因，但不能继续跨突触感染。此过程使RV可控地逆向跨单级突触标记特异类型神经元的输入网络得以实现。
随着反向遗传学手段的成熟，目前构建出的复制缺陷型RV具有较低的毒性和较高的安全性，在神经环路研究中应用广泛，通常会结合电生理学、光遗传学、化学遗传学等方法，剖析神经环路的功能性组合，探讨神经环路在生理及病理等情况下的工作原理。
虽然RV逆向跨单突触系统在神经环路研究中的应用逐渐得到推广，实验技术上也日趋成熟，但是对于很多新手来说需要注意的地方有很多，下面，小布就以我们公司RV逆向跨单突触系统在中枢标记的注射测试结果为实例，分享一些使用tips。
实例一
AAV辅助病毒：rAAV-EF1α-DIO-EGFP-T2A-TVA，rAAV-EF1α-DIO-N2cG
RV病毒：CVS-EnvA-ΔG-tdTomato
实例二
AAV辅助病毒：RMT-mCherry-1/5-N2c
RV病毒：CVS-EnvA-ΔG-EGFP
小布实用Tips
1一般情况下，辅助病毒1:2（TVA:G）或者1:2:1（TVA:G:Cre）混合，注射剂量200-250nl，小核团如NAc注射100nl左右；
2AAV辅助病毒表达14天后，注射RV病毒，注射剂量100-200nl，RV表达7天后灌流取材；
3已有文献报道TVA占比高剂量大会导致注射位点炎症反应严重，细胞形态不清晰，跨突触效率受影响，根据测试结果和客户反馈，总结得出TVA滴度最好不大于2x10^12 vg/mL；
4使用Cre转基因鼠诱导AAV辅助病毒表达时，根据注射位点Cre阳性神经元数量调整AAV注射剂量，辅助病毒表达量和Cre阳性细胞数量有关；
5无论是哪一种注射方案，预实验很重要。
科研干货| RV逆向跨单突触标记系统使用指南
来源：布林凯斯 ，作者携萌宠驾到的
狂犬病毒(rabies virus，以下简称为RV)，RV归类于弹状病毒科狂犬病毒属。病毒外壳呈弹状，有包膜包裹，核衣壳螺旋对称，内含负义单链RNA，编码5种病毒蛋白。其中G蛋白与RV的感染与传播息息相关，在失去G蛋白的情况下，RV无法形成感染性病毒颗粒，也无法感染与传播。野生型RV具有逆向跨突触传播的特性，可以用于灵长类及啮齿类动物神经解剖学的研究[1]。利用RV做示踪工具病毒有独特优势，除特异性跨突触传播外，RV感染中枢系统后，主要标记神经元，几乎不标记胶质细胞；对没有突触连接的神经纤维不感染，毒性低，被感染的神经元几乎不发生明显病变及裂解[2]。
Wickersham等[3/4] 基于RV疫苗株Sad B-19感染性克隆构建的重组狂犬病毒，敲除G蛋白基因并携带GFP、mCherry等荧光蛋白基因，结合EnvA/TVA 系统可实现细胞特异性起始感染。因为EnvA识别的受体蛋白TVA只分布在禽类细胞表面，利用重组囊膜蛋白包装RV，产生的病毒粒子不能直接感染哺乳动物，若利用AAV、慢病毒、逆转录病毒等将 TVA 表达在哺乳动物的细胞膜上，则这种RV可特异性识别并感染表达了TVA的神经元。由于这种RV的G蛋白(RV-G)基因缺失，进入神经元后，可复制并表达外源基因，但不能包装产生成熟的病毒粒子来感染上一级神经元。如果同时在这类神经元中外源性补充RV-G，即可在该类神经元中产生成熟的假病毒粒子，可以用来跨突触感染上一级神经元。进入上一级神经元后，RV-G缺失的病毒可以复制并表达外源基因，但不能继续跨突触感染。此过程使RV可控地逆向跨单级突触标记特异类型神经元的输入网络得以实现。
随着反向遗传学手段的成熟，目前构建出的复制缺陷型RV具有较低的毒性和较高的安全性，在神经环路研究中应用广泛，通常会结合电生理学、光遗传学、化学遗传学等方法，剖析神经环路的功能性组合，探讨神经环路在生理及病理等情况下的工作原理。
虽然RV逆向跨单突触系统在神经环路研究中的应用逐渐得到推广，实验技术上也日趋成熟，但是对于很多新手来说需要注意的地方有很多，下面，小布就以我们公司RV逆向跨单突触系统在中枢标记的注射测试结果为实例，分享一些使用tips。
实例一
AAV辅助病毒：rAAV-EF1α-DIO-EGFP-T2A-TVA，rAAV-EF1α-DIO-N2cG
RV病毒：CVS-EnvA-ΔG-tdTomato
实例二
AAV辅助病毒：RMT-mCherry-1/5-N2c
RV病毒：CVS-EnvA-ΔG-EGFP
小布实用Tips
1一般情况下，辅助病毒1:2（TVA:G）或者1:2:1（TVA:G:Cre）混合，注射剂量200-250nl，小核团如NAc注射100nl左右；
2AAV辅助病毒表达14天后，注射RV病毒，注射剂量100-200nl，RV表达7天后灌流取材；
3已有文献报道TVA占比高剂量大会导致注射位点炎症反应严重，细胞形态不清晰，跨突触效率受影响，根据测试结果和客户反馈，总结得出TVA滴度最好不大于2x10^12 vg/mL；
4使用Cre转基因鼠诱导AAV辅助病毒表达时，根据注射位点Cre阳性神经元数量调整AAV注射剂量，辅助病毒表达量和Cre阳性细胞数量有关；
5无论是哪一种注射方案，预实验很重要。
救命！谁能想到已经研究生毕业一年的我会因为一款产品重新打开知网读起来了SCI论文。。。。
这款值得我如此深究的产品就是HBN啦～ 这可是我从20年底就开始使用的产品了，一开始只是觉得他们家的发光水好好用啊！尤其是对于我这种混油皮，上脸清爽不粘腻，湿敷脸还嘭嘭亮！
随着对品牌的关注，再加上自己不仅迈过25岁，而且天天熬大夜，普通的补水已经不足以维护皮肤（so sad.....)，用着手头的发光水，研究着抗老，竟然在HBN官博看到这“卷王”不满足于简单的护肤产业，还要在行业内遥遥领先，这不就在SCI上发了三篇论文。这也太有意思了吧！立马去知网扒拉了两篇：
第一篇《五种类视黄醇抗光老化治疗的比较：体外抗炎和抗氧化活性及体内疗效评价》，研究员在繁复的“A类家族”中挑选出了四种类视黄醇（RPalm、RP、HPR 和 ROL）最常见，更稳定，更温和，更有效的A醇衍生物，交叉比对了它们的抗老作用机制等，最终将实验结果公布在国际SCI论文中，也为A醇A酯的科学配比行业难题提供了新思路。看来成分的科学配比才是最重要的，而不是一味追求浓度～～～
第二篇《A酯(视黄醇棕榈酸酯)对UVB诱导的皮肤光老化的抑制作用及机制》，HBN首次多维科研实锤了视黄醇棕榈酸酯对皮肤光老化的有效治疗作用及其机制，同时也提出了该成分还有其他潜在护肤功效。视黄醇棕榈酸酯作为 HBN抗老紧致系列产品的核心成分之一，更是说明了HBN在抗老届遥遥领先！！！
总的来看，HBN真的是功效抗老的科研学霸，不是一味盲目跟风其他品牌，而是拥有自己的一套科学配比成分，背后还有一个屡次在国际SCI皮肤医学领域发表论文强大的研发团队。而且，最近还参加了CDA大会（中国医师协会皮肤科医师分会），这是要卷到皮肤科呀！！！#HBN# #HBN研发# #HBN功效抗老学术大会#
这么一扒拉，HBN用起来就更安心了，我自己也是在无限回购它们家的A醇晚霜，从1.0到2.0。因为身为敏感肌的我，之前也尝试过其他品牌的A醇精华之类，但是上脸太刺激了，根本受不了。但是，后面用上HBN的，温和好多，上脸很舒服，敏感肌也能安心抗老，不愧是深研A醇的元老级专家，真的太让我欣慰了。
再说一下，它的质地，采用的是“黄金微粒”包裹技术，肉眼可见的“黄金”A醇颗粒，延展性超级棒，极易推开，渗透力也超好，我晚上护肤最忌讳厚重难吸收的面霜，而这款面霜刚刚好称心！！！这款2.0版本也用了半罐下来了，脸上皮肤看不出明显细纹、表情纹，摸起来还软软嫩嫩的，有时候肤感好到似乎自己重回“婴儿肌”指日可待。
白天用发光水，脸嘭嘭亮；晚上用双A醇晚霜，科学抗老，早C晚A安排明白了～～～
#hbn功效抗老学术大会#
这款值得我如此深究的产品就是HBN啦～ 这可是我从20年底就开始使用的产品了，一开始只是觉得他们家的发光水好好用啊！尤其是对于我这种混油皮，上脸清爽不粘腻，湿敷脸还嘭嘭亮！
随着对品牌的关注，再加上自己不仅迈过25岁，而且天天熬大夜，普通的补水已经不足以维护皮肤（so sad.....)，用着手头的发光水，研究着抗老，竟然在HBN官博看到这“卷王”不满足于简单的护肤产业，还要在行业内遥遥领先，这不就在SCI上发了三篇论文。这也太有意思了吧！立马去知网扒拉了两篇：
第一篇《五种类视黄醇抗光老化治疗的比较：体外抗炎和抗氧化活性及体内疗效评价》，研究员在繁复的“A类家族”中挑选出了四种类视黄醇（RPalm、RP、HPR 和 ROL）最常见，更稳定，更温和，更有效的A醇衍生物，交叉比对了它们的抗老作用机制等，最终将实验结果公布在国际SCI论文中，也为A醇A酯的科学配比行业难题提供了新思路。看来成分的科学配比才是最重要的，而不是一味追求浓度～～～
第二篇《A酯(视黄醇棕榈酸酯)对UVB诱导的皮肤光老化的抑制作用及机制》，HBN首次多维科研实锤了视黄醇棕榈酸酯对皮肤光老化的有效治疗作用及其机制，同时也提出了该成分还有其他潜在护肤功效。视黄醇棕榈酸酯作为 HBN抗老紧致系列产品的核心成分之一，更是说明了HBN在抗老届遥遥领先！！！
总的来看，HBN真的是功效抗老的科研学霸，不是一味盲目跟风其他品牌，而是拥有自己的一套科学配比成分，背后还有一个屡次在国际SCI皮肤医学领域发表论文强大的研发团队。而且，最近还参加了CDA大会（中国医师协会皮肤科医师分会），这是要卷到皮肤科呀！！！#HBN# #HBN研发# #HBN功效抗老学术大会#
这么一扒拉，HBN用起来就更安心了，我自己也是在无限回购它们家的A醇晚霜，从1.0到2.0。因为身为敏感肌的我，之前也尝试过其他品牌的A醇精华之类，但是上脸太刺激了，根本受不了。但是，后面用上HBN的，温和好多，上脸很舒服，敏感肌也能安心抗老，不愧是深研A醇的元老级专家，真的太让我欣慰了。
再说一下，它的质地，采用的是“黄金微粒”包裹技术，肉眼可见的“黄金”A醇颗粒，延展性超级棒，极易推开，渗透力也超好，我晚上护肤最忌讳厚重难吸收的面霜，而这款面霜刚刚好称心！！！这款2.0版本也用了半罐下来了，脸上皮肤看不出明显细纹、表情纹，摸起来还软软嫩嫩的，有时候肤感好到似乎自己重回“婴儿肌”指日可待。
白天用发光水，脸嘭嘭亮；晚上用双A醇晚霜，科学抗老，早C晚A安排明白了～～～
#hbn功效抗老学术大会#
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