#盐野义制药# 【盐野义重组蛋白类#新冠疫苗# 在日本申请上市】
11月24日，盐野义宣布，已向日本厚生劳动省申请S-268019的生产和销售批准，这主要基于在日本进行的5项临床试验的积极结果。S-268019是一种重组蛋白类的预防性疫苗，针对由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染引起的COVID-19，作为启动和加强针（3rd）使用。
S-268019含有纯化的靶抗原蛋白，采用盐野义子公司UMN Pharma专有的BEVS重组蛋白疫苗技术生产而成。所谓BEVS（杆状病毒表达载体系统）是指使用无横纹病毒昆虫细胞培养技术建立的蛋白质表达技术，该技术已经用于获批上市的流感预防疫苗。
在测试启动剂量给药的主要临床试验中，III期中和抗体滴度比较研究达到主要终点——在第2次接种S-268019后28天，患者的SARS-CoV-2中和抗体几何平均滴度（GMT）较ChAdOx1 nCoV-19组显示出优越性。关于加强剂量（3rd剂量）给药临床研究，也达到了主要终点。S-268019组 vs COMIRNATY（原始菌株）组的非劣效性在GMT以及SARS-CoV-2中和抗体滴度的血清反应率的比较中得到证实。
关于安全性，5项试验中均没有发现重大的临床问题。
值得一提的是，就在两日前，盐野义口服3CL蛋白酶抑制剂ensitrelvir (S-217622)的紧急使用授权获日本药品和医疗器械局 (PMDA)批准，用于治疗新型冠状病毒感染。
11月24日，盐野义宣布，已向日本厚生劳动省申请S-268019的生产和销售批准，这主要基于在日本进行的5项临床试验的积极结果。S-268019是一种重组蛋白类的预防性疫苗，针对由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染引起的COVID-19，作为启动和加强针（3rd）使用。
S-268019含有纯化的靶抗原蛋白，采用盐野义子公司UMN Pharma专有的BEVS重组蛋白疫苗技术生产而成。所谓BEVS（杆状病毒表达载体系统）是指使用无横纹病毒昆虫细胞培养技术建立的蛋白质表达技术，该技术已经用于获批上市的流感预防疫苗。
在测试启动剂量给药的主要临床试验中，III期中和抗体滴度比较研究达到主要终点——在第2次接种S-268019后28天，患者的SARS-CoV-2中和抗体几何平均滴度（GMT）较ChAdOx1 nCoV-19组显示出优越性。关于加强剂量（3rd剂量）给药临床研究，也达到了主要终点。S-268019组 vs COMIRNATY（原始菌株）组的非劣效性在GMT以及SARS-CoV-2中和抗体滴度的血清反应率的比较中得到证实。
关于安全性，5项试验中均没有发现重大的临床问题。
值得一提的是，就在两日前，盐野义口服3CL蛋白酶抑制剂ensitrelvir (S-217622)的紧急使用授权获日本药品和医疗器械局 (PMDA)批准，用于治疗新型冠状病毒感染。
无论是保存还是运输，请避免反复冻融。反复冻融，冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构，导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变，从而降低抗体的结合能力，也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否，直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果，如果保存得当，抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。
1. 收到抗体和重组蛋白后的操作收到抗体和重组蛋白后（大部分抗体和重组蛋白是溶液态），请务必在 4℃，12000rpm，离心 3 分钟，再打开管盖进行分装、溶解和保存（如果抗体和重组蛋白体积小于 50ml，请延长离心时间至 5 分钟，以保证全部抗体和重组蛋白均离心下来，干粉状态的同样适用）。抗体和重组蛋白使用特制的储存管，只有在 12000rpm 离心 3 分钟，才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白全部离心下来（即使是在 10000rpm 离心也会离心不完全，导致出现抗体和重组蛋白的量不足的现象）。请详细阅读说明书，并按照推荐的保存条件正确保存和使用抗体和重组蛋白。
2. 抗体和重组蛋白的长期保存对于 大部分抗体和重组蛋白，比较合适的保存方式是：抗体分装后保存在 -20℃，重组蛋白分装后保存在 -80℃。（1）分装可以-大程度地降低反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体和重组蛋白造成的污染可能性。（2）分装的量以一次实验用完为好，少不能少于 10 ml 每份。因为分装体积越小，抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。（3）复融后的分装抗体和重组蛋白如果一次用不完，将剩余母液保存在 4℃，避免再冻起来。（4）抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完，4℃ 保存尽量不要超过 1 天。（5）绝-对避免将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中，将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。
3. 抗体和重组蛋白的短期保存大部分 的抗体和重组蛋白收到后 4℃ 短暂保存 1~2 周，对抗体和重组蛋白活性没有影响。如果抗体和重组蛋白很快会使用（1~2 周内），推荐在 4℃ 保存，这是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害。关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确地保存抗体和重组蛋白。
4. 抗体和重组蛋白的运输条件一般的运输过程需要 1~2 周的时间，所以是在低温 4℃ 的条件下来完成的。4℃ 运输主要的目的是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体和重组蛋白是冻起来的，为了分装就需要解冻，这就多了一次冻融的过程），所以运输过程中一般避免干冰运输。
5. 抗体和重组蛋白的稳定性（1）抗体的稳定性是自然界长期进化的结果，抗体是免疫系统中重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果，在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构。（2）抗体的高Tm值，在室温下，甚至短时间温度达到 50~60℃，抗体分子都能维持正确折叠，保持其应有的活性。（3）抗体和重组蛋白的纯度。 采用先进的抗体和重组蛋白纯化技术，确保抗体和重组蛋白产品的高纯度，保障其抗体和重组蛋白产品的稳定性。（4）抗体和重组蛋白的浓度。高浓度的抗体和重组蛋白产品可减少容器表面吸附造成的物质损失，高浓度的抗体和重组蛋白稳定性更好。 大部分抗体和重组蛋白浓度为 1mg/ml，抗体和重组蛋白纯度高，特异性好，效价更高。
6. 重组蛋白的特性重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在 -80℃ 条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
1. 收到抗体和重组蛋白后的操作收到抗体和重组蛋白后（大部分抗体和重组蛋白是溶液态），请务必在 4℃，12000rpm，离心 3 分钟，再打开管盖进行分装、溶解和保存（如果抗体和重组蛋白体积小于 50ml，请延长离心时间至 5 分钟，以保证全部抗体和重组蛋白均离心下来，干粉状态的同样适用）。抗体和重组蛋白使用特制的储存管，只有在 12000rpm 离心 3 分钟，才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白全部离心下来（即使是在 10000rpm 离心也会离心不完全，导致出现抗体和重组蛋白的量不足的现象）。请详细阅读说明书，并按照推荐的保存条件正确保存和使用抗体和重组蛋白。
2. 抗体和重组蛋白的长期保存对于 大部分抗体和重组蛋白，比较合适的保存方式是：抗体分装后保存在 -20℃，重组蛋白分装后保存在 -80℃。（1）分装可以-大程度地降低反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体和重组蛋白造成的污染可能性。（2）分装的量以一次实验用完为好，少不能少于 10 ml 每份。因为分装体积越小，抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。（3）复融后的分装抗体和重组蛋白如果一次用不完，将剩余母液保存在 4℃，避免再冻起来。（4）抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完，4℃ 保存尽量不要超过 1 天。（5）绝-对避免将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中，将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。
3. 抗体和重组蛋白的短期保存大部分 的抗体和重组蛋白收到后 4℃ 短暂保存 1~2 周，对抗体和重组蛋白活性没有影响。如果抗体和重组蛋白很快会使用（1~2 周内），推荐在 4℃ 保存，这是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害。关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确地保存抗体和重组蛋白。
4. 抗体和重组蛋白的运输条件一般的运输过程需要 1~2 周的时间，所以是在低温 4℃ 的条件下来完成的。4℃ 运输主要的目的是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体和重组蛋白是冻起来的，为了分装就需要解冻，这就多了一次冻融的过程），所以运输过程中一般避免干冰运输。
5. 抗体和重组蛋白的稳定性（1）抗体的稳定性是自然界长期进化的结果，抗体是免疫系统中重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果，在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构。（2）抗体的高Tm值，在室温下，甚至短时间温度达到 50~60℃，抗体分子都能维持正确折叠，保持其应有的活性。（3）抗体和重组蛋白的纯度。 采用先进的抗体和重组蛋白纯化技术，确保抗体和重组蛋白产品的高纯度，保障其抗体和重组蛋白产品的稳定性。（4）抗体和重组蛋白的浓度。高浓度的抗体和重组蛋白产品可减少容器表面吸附造成的物质损失，高浓度的抗体和重组蛋白稳定性更好。 大部分抗体和重组蛋白浓度为 1mg/ml，抗体和重组蛋白纯度高，特异性好，效价更高。
6. 重组蛋白的特性重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在 -80℃ 条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
【科学家破解叶绿体“守门人”之谜】11月21日，西湖大学特聘研究员闫浈实验室在《细胞》杂志发表研究论文，揭开了叶绿体蛋白转运之谜——蛋白进入叶绿体需要经过TOC-TIC复合物，如同穿过“工厂大门”，他们首次解析了TOC-TIC复合物的完整清晰结构，让人们第一次看到了“守门人”的样子。论文传送门☞https://t.cn/A6Kyiquk
扫码进车站、扫码进公司、扫码进学校……过去三年，扫码进入公共区域是我们日常生活的一部分。如同平行宇宙，在叶绿体上也存在着惊人相似的场景。叶绿体作为光合作用重要场地，是一个“光能工厂”，有2000至3000种蛋白需要被识别然后进入叶绿体“工作”。那么，这扇“大门”长啥样？又是如何运行的？业内争论了近四十年。
此前，科学界已经知道叶绿体是双膜结构，内膜上存在转运因子TIC，外膜上存在转运因子TOC，它们联合形成一个超级复合物TOC-TIC，作为蛋白进入叶绿体的“大门”。虽然这个领域已经研究了近四十年，但是仍有很多核心问题尚未被解决。比如，TIC到底是由哪些组分组成？而TOC和TIC又是如何形成超级复合物来行使“大门”的功能？由于不知道TOC-TIC复合物的全貌，大家的研究就好像“盲人摸象”，各执一词。
闫浈带领的膜蛋白结构与功能实验室利用生物化学和结构生物学的方法来揭示TOC-TIC复合物的组成、组装和转运机制。通过对前人研究成果的分析归纳，实验室选择了克莱因衣藻的TOC-TIC超级复合物为研究对象，在两个已被确认并在不同物种中高度保守的TOC（Toc34）和TIC（Tic20）组分上分别加亲和标签进行纯化。
可以通俗地理解为，实验室设置了两组实验，一组通过前人已经确认的“象耳朵”来牵出完整的大象，一组通过“象尾巴”来牵出大象。也就是在特定的叶绿体样本中，通过亲和标签把TOC-TIC复合物精确找到，并纯化出来。思路看起来很简单，但实验过程需要克服非常多的困难，需要排除各种干扰因素，同时不能破坏TOC-TIC复合物的结构。令人激动的是，最终这两种不同策略所纯化出来的蛋白质组分完全一致，并且解析出来的电镜结构也高度一致。此后的多重实验也相继验证，TOC-TIC超级复合物终于被找到，并且被精确识别出来。
在闫浈实验室的三维软件里，叶绿体“大门”——TOC-TIC的立体结构呈现了出来。这个克莱因衣藻叶绿体上的TOC-TIC超级复合物，分辨率达到2.5Å，清晰地展示了TOC-TIC各组分的高分辨结构与组装模式。它一共包含14个组分，其中8个为之前已报道的组分，6个为功能未知的新组分。结合前人理论，在双层的叶绿体膜上，这个重要的通道如同检查健康码的守门人一样，让蛋白带着转运信号肽一个个“扫码”入场。比如能否让“大门”提高效率加速放行？能否让“守门人”为 “特种工人”放行？能否以“守门人”为模板再人造出形形色色的“守门人”？
一位审稿人评价说：该研究用纯化并解析结构这个“终极手段”解决了光合物种叶绿体生物学的一个核心问题，为增进理解和认识藻类、植物叶绿体如何发展进化迈出了一大步。因为叶绿体生物学对食品安全与气候变迁的潜在影响，以及对蛋白如何转运这种问题的基础性，该研究也为其他非特定领域的科学家们带来了非常有价值的信息。（来源：中国科学报 温才妃 张弛）
扫码进车站、扫码进公司、扫码进学校……过去三年，扫码进入公共区域是我们日常生活的一部分。如同平行宇宙，在叶绿体上也存在着惊人相似的场景。叶绿体作为光合作用重要场地，是一个“光能工厂”，有2000至3000种蛋白需要被识别然后进入叶绿体“工作”。那么，这扇“大门”长啥样？又是如何运行的？业内争论了近四十年。
此前，科学界已经知道叶绿体是双膜结构，内膜上存在转运因子TIC，外膜上存在转运因子TOC，它们联合形成一个超级复合物TOC-TIC，作为蛋白进入叶绿体的“大门”。虽然这个领域已经研究了近四十年，但是仍有很多核心问题尚未被解决。比如，TIC到底是由哪些组分组成？而TOC和TIC又是如何形成超级复合物来行使“大门”的功能？由于不知道TOC-TIC复合物的全貌，大家的研究就好像“盲人摸象”，各执一词。
闫浈带领的膜蛋白结构与功能实验室利用生物化学和结构生物学的方法来揭示TOC-TIC复合物的组成、组装和转运机制。通过对前人研究成果的分析归纳，实验室选择了克莱因衣藻的TOC-TIC超级复合物为研究对象，在两个已被确认并在不同物种中高度保守的TOC（Toc34）和TIC（Tic20）组分上分别加亲和标签进行纯化。
可以通俗地理解为，实验室设置了两组实验，一组通过前人已经确认的“象耳朵”来牵出完整的大象，一组通过“象尾巴”来牵出大象。也就是在特定的叶绿体样本中，通过亲和标签把TOC-TIC复合物精确找到，并纯化出来。思路看起来很简单，但实验过程需要克服非常多的困难，需要排除各种干扰因素，同时不能破坏TOC-TIC复合物的结构。令人激动的是，最终这两种不同策略所纯化出来的蛋白质组分完全一致，并且解析出来的电镜结构也高度一致。此后的多重实验也相继验证，TOC-TIC超级复合物终于被找到，并且被精确识别出来。
在闫浈实验室的三维软件里，叶绿体“大门”——TOC-TIC的立体结构呈现了出来。这个克莱因衣藻叶绿体上的TOC-TIC超级复合物，分辨率达到2.5Å，清晰地展示了TOC-TIC各组分的高分辨结构与组装模式。它一共包含14个组分，其中8个为之前已报道的组分，6个为功能未知的新组分。结合前人理论，在双层的叶绿体膜上，这个重要的通道如同检查健康码的守门人一样，让蛋白带着转运信号肽一个个“扫码”入场。比如能否让“大门”提高效率加速放行？能否让“守门人”为 “特种工人”放行？能否以“守门人”为模板再人造出形形色色的“守门人”？
一位审稿人评价说：该研究用纯化并解析结构这个“终极手段”解决了光合物种叶绿体生物学的一个核心问题，为增进理解和认识藻类、植物叶绿体如何发展进化迈出了一大步。因为叶绿体生物学对食品安全与气候变迁的潜在影响，以及对蛋白如何转运这种问题的基础性，该研究也为其他非特定领域的科学家们带来了非常有价值的信息。（来源：中国科学报 温才妃 张弛）
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