【#杭州15岁男生拉肚子差点丢命# 最近连续好几例，全是年轻人】半个月前的一天，杭州15岁初三男生小蒋（化名）突然开始腹泻，起初以为是换季腹泻，就找了点止泻药吃。但两天后，小蒋不但腹泻症状没好，还直接高烧到39℃，伴着轻微心慌，这才去了医院。抽血检查后发现，孩子的肌钙蛋白指标达到1.4ng/ml（正常值为小于0.01ng/ml），患上了“病毒性心肌炎”。所幸发现及时，在抗感染和补液等治疗后，小蒋转危为安，顺利康复出院。
杭州市第一人民医院心血管内科医师谢剑昶说，常见的病毒性心肌炎都是病毒感染所引起，病毒除了作用于上呼吸道和消化道外，还可以直接破坏心肌细胞，影响心脏功能，死亡率极高，如果治疗不及时，病愈后也容易产生后遗症。一到换季，天气转冷，就会进入病毒性心肌炎的高发期。谢剑昶说，这段时间，他陆续收入了好几位以腹泻为首发症状的“病毒性心肌炎”患者，都是不到40岁的年轻人，所幸他们还算就医及时，救治成功。#杭州[地点]#
杭州市第一人民医院心血管内科医师谢剑昶说，常见的病毒性心肌炎都是病毒感染所引起，病毒除了作用于上呼吸道和消化道外，还可以直接破坏心肌细胞，影响心脏功能，死亡率极高，如果治疗不及时，病愈后也容易产生后遗症。一到换季，天气转冷，就会进入病毒性心肌炎的高发期。谢剑昶说，这段时间，他陆续收入了好几位以腹泻为首发症状的“病毒性心肌炎”患者，都是不到40岁的年轻人，所幸他们还算就医及时，救治成功。#杭州[地点]#
有关多囊卵巢综合征的十问十答！
1、如何判断自己是否得了多囊？
答：需要符合下面3点中的2点以上：
①月经稀发（周期35天~6个月）、经量少甚至闭经；
②雄激素睾酮>0.55ng/ml，或者多毛、长痘；
③B-超 显示卵巢多囊样改变。
2、多囊有什么表现？
答：月经失调、多毛、痤/疮、脱发、油脂性皮肤、肥胖、黑棘皮症、不孕等。
3、多囊能治愈吗？
答：暂时不能，但可以通过改善生活方式来控制。
4、多囊患者能自然怀孕吗？
答：可以，可以通过补充韵辛素来改善卵巢功能，恢复排卵，提高卵子质量，增加受孕几率。
5、多囊卵巢综合征常见吗？
答：多囊卵巢综合征在育龄妇女种的发病率为5%~10%，在无排卵的不孕症女性中的发病率为50%~70%。
6、多囊患者在饮食上需要注意什么？
答：应选择升糖指数低的食物，多吃绿叶蔬菜，合理补充优质蛋白，但要注意少吃肥肉，控制水果量。
7、减肥对改善多囊有帮助吗？
答：有很大帮助，大部分多囊在减重后，月经情况会得到改善。
8、胖多囊和瘦多囊有什么区别？
答：胖多囊患者体型肥胖，体重多超过正常值范围，且检查时可发现雄激素水平高、水钠潴留等情况；瘦多囊体型较瘦，体重多在正常值范围内或低于正常体重，其出现胰岛素抵抗的概率比胖多囊低。
9、多囊该怎么运动？
答：提倡无氧+有氧相结合，像胖多囊应以有氧运动、减脂为主，而瘦多囊应以无氧运动、增肌，再结合有氧运动。
10、多囊患者能不能吃奶制品？
答：尽量少吃或不吃。奶制品会刺激胰岛素分泌，使雄激素水平升高。
1、如何判断自己是否得了多囊？
答：需要符合下面3点中的2点以上：
①月经稀发（周期35天~6个月）、经量少甚至闭经；
②雄激素睾酮>0.55ng/ml，或者多毛、长痘；
③B-超 显示卵巢多囊样改变。
2、多囊有什么表现？
答：月经失调、多毛、痤/疮、脱发、油脂性皮肤、肥胖、黑棘皮症、不孕等。
3、多囊能治愈吗？
答：暂时不能，但可以通过改善生活方式来控制。
4、多囊患者能自然怀孕吗？
答：可以，可以通过补充韵辛素来改善卵巢功能，恢复排卵，提高卵子质量，增加受孕几率。
5、多囊卵巢综合征常见吗？
答：多囊卵巢综合征在育龄妇女种的发病率为5%~10%，在无排卵的不孕症女性中的发病率为50%~70%。
6、多囊患者在饮食上需要注意什么？
答：应选择升糖指数低的食物，多吃绿叶蔬菜，合理补充优质蛋白，但要注意少吃肥肉，控制水果量。
7、减肥对改善多囊有帮助吗？
答：有很大帮助，大部分多囊在减重后，月经情况会得到改善。
8、胖多囊和瘦多囊有什么区别？
答：胖多囊患者体型肥胖，体重多超过正常值范围，且检查时可发现雄激素水平高、水钠潴留等情况；瘦多囊体型较瘦，体重多在正常值范围内或低于正常体重，其出现胰岛素抵抗的概率比胖多囊低。
9、多囊该怎么运动？
答：提倡无氧+有氧相结合，像胖多囊应以有氧运动、减脂为主，而瘦多囊应以无氧运动、增肌，再结合有氧运动。
10、多囊患者能不能吃奶制品？
答：尽量少吃或不吃。奶制品会刺激胰岛素分泌，使雄激素水平升高。
没有扩展条带
可能的原因及对应的解决方案如下：
酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。
模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。
变性温度是否准确：PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。
反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶，应在未加Taq酶以前，将反应体系95℃加热5~10分钟。
引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化，或因储存条件不当而失活。
引物错误。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
DNA凝胶电泳时加入阳性对照，确保不是DNA凝胶和PCR程序的问题。
PCR产物量过少
可能的原因和对应的解决方案如下：
退火温度不合适。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
DNA模板量太少。增加DNA模板量。
PCR循环数不足。增加反应循环数。
引物量不足。增加体系中引物含量。
延伸时间太短。以1kb/分钟的原则设置延伸时间。
变性时间过长。变性时间过长会导致DNA聚合酶失活。
DNA模板中存在抑制剂。确保DNA模板干净
扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散
可能的原因和对应的解决方案如下：
酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。
dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。
MgCl₂浓度过高。可适当降低其用量。
模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。
循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。
退火温度过低。
电泳体系有问题：
①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大；
②凝胶没有凝固好；
③琼脂糖质量差。
若为PCR试剂盒则可能：
①由于运输储存不当引起试剂盒失效；
②试剂盒本身质量有问题，如引物选择、循环参数等选择不当。
降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。
扩展产物出现杂带
可能的原因和对应的解决方案如下：
引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。
循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。
酶的用量偏高或酶的质量不好，应降低酶量或调换另一来源的酶。
退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
样品处理不当。
Mg2+浓度偏高，因适当调整Mg2+使用浓度。
若为PCR试剂盒，也可能时试剂盒本身质量有问题。
复制提前终止。使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。
反应缓冲液未完全融化或未充分混匀。确保反应缓冲液融化完全并彻底混匀。
引物特异性差。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
引物量过多。减少反应体系中引物的用量。
模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
外源DNA污染。确保操作的洁净。
条带大小与理论不符
可能的原因和对应的解决方案如下：
污染。使用全新的试剂和枪头，对工作台进行清洁。
模板或引物使用错误。更换引物和模板。
基因亚型。对研究的基因进行序列分析和BLAST研究。
阴性对照出现条带
可能的原因和对应的解决方案如下：
试剂，枪头，工作台污染。使用全新的试剂和枪头，对工作台进行清洁。
如何有效设计引物
可能的原因和对应的解决方案如下：
使用Oligo或Primer设计引物，在保守区内设计，长度一般在18-27bp，上下游引物Tm值最好是60-75℃，GC含量=40%-60%，引物自身及引物之间不应存在互补序列，避免发夹结构。
持续出现假性条带
可能的原因和对应的解决方案如下：
起始退火温度太低，或目的扩增产物和非目的产物的T值相差不大。可尝试适当提高PCR温度或者设置降落PCR，降低循环数。
菌落PCR检测有条带，接种大摇后无条带
可能的原因和对应的解决方案如下：
可重新以菌落和菌液为模板进行PCR对照检测，因为菌落PCR的假阳性概率还是比较高。如果仍出现上述结果，推测可能是平板上连接液中的未连接载体的扩增引起的目的条带，进一步质粒PCR检测，可证明目的片段是否真正连接成功。
可能的原因及对应的解决方案如下：
酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。
模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。
变性温度是否准确：PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。
反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶，应在未加Taq酶以前，将反应体系95℃加热5~10分钟。
引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化，或因储存条件不当而失活。
引物错误。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
DNA凝胶电泳时加入阳性对照，确保不是DNA凝胶和PCR程序的问题。
PCR产物量过少
可能的原因和对应的解决方案如下：
退火温度不合适。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
DNA模板量太少。增加DNA模板量。
PCR循环数不足。增加反应循环数。
引物量不足。增加体系中引物含量。
延伸时间太短。以1kb/分钟的原则设置延伸时间。
变性时间过长。变性时间过长会导致DNA聚合酶失活。
DNA模板中存在抑制剂。确保DNA模板干净
扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散
可能的原因和对应的解决方案如下：
酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。
dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。
MgCl₂浓度过高。可适当降低其用量。
模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。
循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。
退火温度过低。
电泳体系有问题：
①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大；
②凝胶没有凝固好；
③琼脂糖质量差。
若为PCR试剂盒则可能：
①由于运输储存不当引起试剂盒失效；
②试剂盒本身质量有问题，如引物选择、循环参数等选择不当。
降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。
扩展产物出现杂带
可能的原因和对应的解决方案如下：
引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。
循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。
酶的用量偏高或酶的质量不好，应降低酶量或调换另一来源的酶。
退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
样品处理不当。
Mg2+浓度偏高，因适当调整Mg2+使用浓度。
若为PCR试剂盒，也可能时试剂盒本身质量有问题。
复制提前终止。使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。
反应缓冲液未完全融化或未充分混匀。确保反应缓冲液融化完全并彻底混匀。
引物特异性差。利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
引物量过多。减少反应体系中引物的用量。
模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
外源DNA污染。确保操作的洁净。
条带大小与理论不符
可能的原因和对应的解决方案如下：
污染。使用全新的试剂和枪头，对工作台进行清洁。
模板或引物使用错误。更换引物和模板。
基因亚型。对研究的基因进行序列分析和BLAST研究。
阴性对照出现条带
可能的原因和对应的解决方案如下：
试剂，枪头，工作台污染。使用全新的试剂和枪头，对工作台进行清洁。
如何有效设计引物
可能的原因和对应的解决方案如下：
使用Oligo或Primer设计引物，在保守区内设计，长度一般在18-27bp，上下游引物Tm值最好是60-75℃，GC含量=40%-60%，引物自身及引物之间不应存在互补序列，避免发夹结构。
持续出现假性条带
可能的原因和对应的解决方案如下：
起始退火温度太低，或目的扩增产物和非目的产物的T值相差不大。可尝试适当提高PCR温度或者设置降落PCR，降低循环数。
菌落PCR检测有条带，接种大摇后无条带
可能的原因和对应的解决方案如下：
可重新以菌落和菌液为模板进行PCR对照检测，因为菌落PCR的假阳性概率还是比较高。如果仍出现上述结果，推测可能是平板上连接液中的未连接载体的扩增引起的目的条带，进一步质粒PCR检测，可证明目的片段是否真正连接成功。
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