【分子克隆】第十一期：慢病毒载体 [https://t.cn/A6fDi42R]
慢病毒属于逆转录病毒科，能够感染分裂和非分裂的细胞，从而将它们与普通的逆转录病毒区别开来。慢病毒基因组由两个拷贝的单链RNA组成，并被结构蛋白和酶蛋白包裹在衣壳中，这些结构蛋白和酶蛋白包括逆转录酶（将RNA转化为dsDNA）和DNA整合酶（将dsDNA整合到宿主基因组中）。
慢病毒 ----------------------------
如上图步骤｜，用包膜、转移和包装载体转染慢病毒包装细胞系。包膜、转移和包装载体转录的mRNA分别被翻译成：通过内质网进入细胞膜的病毒包膜蛋白（2a）；单链RNA病毒基因组（2b）；病毒结构蛋白和酶（2c），这三种成分组装成病毒颗粒，从宿主细胞膜上出芽。
如上图步骤‖，病毒颗粒通过包膜蛋白附着在宿主细胞表面受体上，病毒与宿主质膜融合释放结构蛋白、酶蛋白和病毒基因组。病毒RNA被逆转录成双链DNA，并与整合酶形成预整合复合物，整合酶通过核孔复合物，催化病毒DNA整合到宿主基因组中，最后转移载体启动子驱动转基因表达。
人类免疫缺陷病毒-1型（HIV-1）作为典型的慢病毒，其基因Gag、Pol和Env分别编码结构核心蛋白、逆转录酶和整合酶以及包膜糖蛋白；Tat和Rev参与病毒复制：Tat启动病毒基因组转录，并受长末端重复序列驱动，Rev促进病毒mRNA的核输出，并受到Rev响应元件的调控；包装信号(Ψ)是将病毒基因组进入衣壳的关键。此外，HIV-1基因组中包含的毒力因子Vif、Vpr、Vpu和Nef会干扰宿主防御机制，并包含在组装好的病毒粒子中。（图2）
慢病毒是以HIV-1为基础发展起来的基因治疗载体。
第一代慢病毒载体将所有包装元件编码在一个载体上，生物安全风险较高；
第二代慢病毒载体去除了毒力因子并将包膜从包装载体中分离，提高了安全性并增强了病毒复制，而不干扰有功能的病毒粒子的生产。此外，3’LTR包含U3缺失，可以消除病毒基因组复制的启动子活性，并在不影响病毒粒子滴度或转基因表达的情况下自灭活载体。
第三代慢病毒载体从包装载体中去除Rev，并用转移载体上游的一个组成启动子替换Tat，是目前被广泛应用的慢病毒包装载体。（图3）
慢病毒属于逆转录病毒科，能够感染分裂和非分裂的细胞，从而将它们与普通的逆转录病毒区别开来。慢病毒基因组由两个拷贝的单链RNA组成，并被结构蛋白和酶蛋白包裹在衣壳中，这些结构蛋白和酶蛋白包括逆转录酶（将RNA转化为dsDNA）和DNA整合酶（将dsDNA整合到宿主基因组中）。
慢病毒 ----------------------------
如上图步骤｜，用包膜、转移和包装载体转染慢病毒包装细胞系。包膜、转移和包装载体转录的mRNA分别被翻译成：通过内质网进入细胞膜的病毒包膜蛋白（2a）；单链RNA病毒基因组（2b）；病毒结构蛋白和酶（2c），这三种成分组装成病毒颗粒，从宿主细胞膜上出芽。
如上图步骤‖，病毒颗粒通过包膜蛋白附着在宿主细胞表面受体上，病毒与宿主质膜融合释放结构蛋白、酶蛋白和病毒基因组。病毒RNA被逆转录成双链DNA，并与整合酶形成预整合复合物，整合酶通过核孔复合物，催化病毒DNA整合到宿主基因组中，最后转移载体启动子驱动转基因表达。
人类免疫缺陷病毒-1型（HIV-1）作为典型的慢病毒，其基因Gag、Pol和Env分别编码结构核心蛋白、逆转录酶和整合酶以及包膜糖蛋白；Tat和Rev参与病毒复制：Tat启动病毒基因组转录，并受长末端重复序列驱动，Rev促进病毒mRNA的核输出，并受到Rev响应元件的调控；包装信号(Ψ)是将病毒基因组进入衣壳的关键。此外，HIV-1基因组中包含的毒力因子Vif、Vpr、Vpu和Nef会干扰宿主防御机制，并包含在组装好的病毒粒子中。（图2）
慢病毒是以HIV-1为基础发展起来的基因治疗载体。
第一代慢病毒载体将所有包装元件编码在一个载体上，生物安全风险较高；
第二代慢病毒载体去除了毒力因子并将包膜从包装载体中分离，提高了安全性并增强了病毒复制，而不干扰有功能的病毒粒子的生产。此外，3’LTR包含U3缺失，可以消除病毒基因组复制的启动子活性，并在不影响病毒粒子滴度或转基因表达的情况下自灭活载体。
第三代慢病毒载体从包装载体中去除Rev，并用转移载体上游的一个组成启动子替换Tat，是目前被广泛应用的慢病毒包装载体。（图3）
越南河内海关截获116件CITES禁贸的石首鱼鱼鳔的进口货物，加湾鼠海豚命运更堪忧
中国生物多样性保护与绿色发展基金会
中国绿发会反盗猎工作组发现，联合国《濒危野生动植物种国际贸易公约》（CITES）发布河内海关发现并逮捕了一批CITES所列石首鱼鱼鳔的进口货物。
中国绿发会作为CITES的观察员，密切关注濒危野生动植物种的非法国际贸易问题，现将相关信息整理发布，与读者共赏。
越南河内海关司与公安部协调预防和打击环境犯罪，发现并逮捕从墨西哥到胡志明市的一批石首鱼鱼鳔。
职能部门对这批货物进行实物检查，发现此批货物为石首鱼(学名Totoaba Macdonaldi)，属于CITES附录I所列物种，禁止国际贸易。世界自然保护联盟濒危物种红色名录中评为“易危”物种。
总数量超过2种。提单116件，26.8公斤。目前，职能部门已经进行了评估调查，并继续按照规定进行查验。
石首鱼是鲈鱼目石首鱼科的一种海洋鱼类，是石首鱼科中最大的一种。这是一种生长快速、利润丰厚的鱼。石首鱼“鱼片”在墨西哥和许多国际市场都很受欢迎，尤其是石首鱼丸在亚洲是一种超级贵重的物品。
石首鱼体重可达100多公斤，身长可达2米，是该科中最大的鱼。平均预期寿命是25岁。石首鱼肉多，骨头少，尾部有很多脂肪。幼鱼主要生活在加利福尼亚湾23米深处，呈银蓝色，背部有小斑点。
4年后(雌性)和5年后(雄性)，小石首鱼可以继续繁殖。成年石首鱼生活在海岸附近，杂食性很强，它们的主要食物是大螃蟹和沙丁鱼。小石首鱼通常以小底鱼、甲壳类动物、虾、蟹为食。石首鱼是墨西哥加利福尼亚湾典型鱼类。很少住在别处。
石首鱼鱼肉，尤其是鱼鳔(被认为有治愈能力)非常受欢迎，以至于石首鱼由于过度捕捞而濒临灭绝。
【CITES关于18.292 - 18.295石首鱼决定】
18.292号致缔约方的决定
鼓励各方与相关利益相关者合作:
a)向秘书处和相关缔约方的CITES主管部门通报关于截获石首鱼标本、逮捕非法获取和交易人员、起诉结果以及为执行本决定而采取的行动的信息;
b)开展提高对石首鱼非法贸易及其对小头鼠海豚保护的严重影响的认识活动，包括减少需求运动;
c)消除对非法来源的石首鱼标本的供求关系，加强国家政策和执法措施，防止和打击石首鱼非法交易;
d)支持恢复和监测石首鱼和小头鼠海豚野生种群的努力;
e)支持墨西哥执行第18.293号决定，包括支持刺网检索方案;和
f)为执行第18.294号决定第c)段要求提交常务委员会第73次会议的研究报告提供财政和实物支助。
18.293号致缔约方的决定
敦促墨西哥:
a)在2019年11月1日前立即采取有效行动，应对以下非法贸易对石首鱼和小头鼠海豚构成的威胁:
i)部署具有法定扣押和逮捕权力的政府部门，与海军一起，有效阻止渔民和船只进入小头鼠海豚保护区，并邀请秘书处在2019年底前评估这些措施的有效性和影响;
(二)收集和分析涉及石首鱼非法交易的有组织犯罪集团的资料，召集多学科调查组，在关注的重点领域与地方当局密切合作，并以情报为基础开展行动和调查，打击石首鱼非法交易;
iii)定期(每六个月)向秘书处提供这些行动及其结果的最新情况;和
(4)与相关缔约方共同建立并启动中、美、墨三国执法联络小组，推动2017年“中、美、墨三国打击石首鱼非法贩运会议(8月23日至25日，墨西哥恩塞纳达)”取得成果。
b)加强努力并确保资源，扩大刺网清除工作，使小头鼠海豚保护区保持无网区，并采取一切必要措施保护清除网队并销毁没收的网;
c)坚持执行决定43 COM 7B。26，世界遗产委员会第43届会议通过(巴库，2019年);和
d)提交关于第18.293号决定执行情况的全面报告，各段
(a) 至d)项，以及第18.292号决定第a)段所要求的资料，及时提交秘书处，以便秘书处将上述资料连同其可能提出的任何建议一并提交常务委员会第73次会议。
18.294号致秘书处的决定
秘书处应:
a)根据外部资源和第18.292和18.293号决定所确定行动的可衡量进展情况，考虑在2019年底前召开一次石首鱼分布国、运输国和消费国、选定组织和利益攸关方会议，评估打击石首鱼非法捕捞的进展。消除非法来源石首鱼标本的供求关系，加强执法措施，防止和打击石首鱼非法交易;
b)与国际打击野生动植物犯罪联盟(ICCWC)的伙伴机构合作，支持开展活动，促进整个非法贸易链从源头到目的地开展有针对性的联合调查和执法行动;
c)在有外部资源的情况下，与具有相关专门知识的组织协商，开展《缔约方会议第18号文件第89号文件》附件2所列的关于小头鼠海豚和石首鱼的研究(Rev. 1);和
d)向常务委员会第73次会议报告缔约方和墨西哥根据第18.292和18.293号决定提供的信息，以及根据上文第a)段召开的会议的结果以及可能提出的任何建议。
18.295号致常务委员会的决定
常务委员会应当:
a)审查和评估秘书处根据第18.294号决定提交的任何信息和建议;和
b)基于其评估，如果对第18.292和18.293号决定的及时执行进展不满意，则根据关于CITES合规程序的第14.3号决议(CoP18修订版)，在常务委员会的授权范围内提出任何适当的建议。
更多最新消息将通过“绿会融媒”报道。“绿会融媒”是由约50个平台组成的融媒体矩阵，旨在传播生态文明、推动绿色发展、提升公众科学素质、保护生物多样性，应对气候和公共健康危机，助力“碳达峰”和“碳中和”目标的实现，进而推动地球生命共同体建设。
整理/YJ 审/Linda 编/青鸯
图源：Species+
图源：IUCN
中国生物多样性保护与绿色发展基金会
中国绿发会反盗猎工作组发现，联合国《濒危野生动植物种国际贸易公约》（CITES）发布河内海关发现并逮捕了一批CITES所列石首鱼鱼鳔的进口货物。
中国绿发会作为CITES的观察员，密切关注濒危野生动植物种的非法国际贸易问题，现将相关信息整理发布，与读者共赏。
越南河内海关司与公安部协调预防和打击环境犯罪，发现并逮捕从墨西哥到胡志明市的一批石首鱼鱼鳔。
职能部门对这批货物进行实物检查，发现此批货物为石首鱼(学名Totoaba Macdonaldi)，属于CITES附录I所列物种，禁止国际贸易。世界自然保护联盟濒危物种红色名录中评为“易危”物种。
总数量超过2种。提单116件，26.8公斤。目前，职能部门已经进行了评估调查，并继续按照规定进行查验。
石首鱼是鲈鱼目石首鱼科的一种海洋鱼类，是石首鱼科中最大的一种。这是一种生长快速、利润丰厚的鱼。石首鱼“鱼片”在墨西哥和许多国际市场都很受欢迎，尤其是石首鱼丸在亚洲是一种超级贵重的物品。
石首鱼体重可达100多公斤，身长可达2米，是该科中最大的鱼。平均预期寿命是25岁。石首鱼肉多，骨头少，尾部有很多脂肪。幼鱼主要生活在加利福尼亚湾23米深处，呈银蓝色，背部有小斑点。
4年后(雌性)和5年后(雄性)，小石首鱼可以继续繁殖。成年石首鱼生活在海岸附近，杂食性很强，它们的主要食物是大螃蟹和沙丁鱼。小石首鱼通常以小底鱼、甲壳类动物、虾、蟹为食。石首鱼是墨西哥加利福尼亚湾典型鱼类。很少住在别处。
石首鱼鱼肉，尤其是鱼鳔(被认为有治愈能力)非常受欢迎，以至于石首鱼由于过度捕捞而濒临灭绝。
【CITES关于18.292 - 18.295石首鱼决定】
18.292号致缔约方的决定
鼓励各方与相关利益相关者合作:
a)向秘书处和相关缔约方的CITES主管部门通报关于截获石首鱼标本、逮捕非法获取和交易人员、起诉结果以及为执行本决定而采取的行动的信息;
b)开展提高对石首鱼非法贸易及其对小头鼠海豚保护的严重影响的认识活动，包括减少需求运动;
c)消除对非法来源的石首鱼标本的供求关系，加强国家政策和执法措施，防止和打击石首鱼非法交易;
d)支持恢复和监测石首鱼和小头鼠海豚野生种群的努力;
e)支持墨西哥执行第18.293号决定，包括支持刺网检索方案;和
f)为执行第18.294号决定第c)段要求提交常务委员会第73次会议的研究报告提供财政和实物支助。
18.293号致缔约方的决定
敦促墨西哥:
a)在2019年11月1日前立即采取有效行动，应对以下非法贸易对石首鱼和小头鼠海豚构成的威胁:
i)部署具有法定扣押和逮捕权力的政府部门，与海军一起，有效阻止渔民和船只进入小头鼠海豚保护区，并邀请秘书处在2019年底前评估这些措施的有效性和影响;
(二)收集和分析涉及石首鱼非法交易的有组织犯罪集团的资料，召集多学科调查组，在关注的重点领域与地方当局密切合作，并以情报为基础开展行动和调查，打击石首鱼非法交易;
iii)定期(每六个月)向秘书处提供这些行动及其结果的最新情况;和
(4)与相关缔约方共同建立并启动中、美、墨三国执法联络小组，推动2017年“中、美、墨三国打击石首鱼非法贩运会议(8月23日至25日，墨西哥恩塞纳达)”取得成果。
b)加强努力并确保资源，扩大刺网清除工作，使小头鼠海豚保护区保持无网区，并采取一切必要措施保护清除网队并销毁没收的网;
c)坚持执行决定43 COM 7B。26，世界遗产委员会第43届会议通过(巴库，2019年);和
d)提交关于第18.293号决定执行情况的全面报告，各段
(a) 至d)项，以及第18.292号决定第a)段所要求的资料，及时提交秘书处，以便秘书处将上述资料连同其可能提出的任何建议一并提交常务委员会第73次会议。
18.294号致秘书处的决定
秘书处应:
a)根据外部资源和第18.292和18.293号决定所确定行动的可衡量进展情况，考虑在2019年底前召开一次石首鱼分布国、运输国和消费国、选定组织和利益攸关方会议，评估打击石首鱼非法捕捞的进展。消除非法来源石首鱼标本的供求关系，加强执法措施，防止和打击石首鱼非法交易;
b)与国际打击野生动植物犯罪联盟(ICCWC)的伙伴机构合作，支持开展活动，促进整个非法贸易链从源头到目的地开展有针对性的联合调查和执法行动;
c)在有外部资源的情况下，与具有相关专门知识的组织协商，开展《缔约方会议第18号文件第89号文件》附件2所列的关于小头鼠海豚和石首鱼的研究(Rev. 1);和
d)向常务委员会第73次会议报告缔约方和墨西哥根据第18.292和18.293号决定提供的信息，以及根据上文第a)段召开的会议的结果以及可能提出的任何建议。
18.295号致常务委员会的决定
常务委员会应当:
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b)基于其评估，如果对第18.292和18.293号决定的及时执行进展不满意，则根据关于CITES合规程序的第14.3号决议(CoP18修订版)，在常务委员会的授权范围内提出任何适当的建议。
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整理/YJ 审/Linda 编/青鸯
图源：Species+
图源：IUCN
日常生活需要的是人工泪液，而不是网红洗眼液！
眼睛进异物，第一时间冲洗
当眼睛进入固体异物，使用人工泪液滴眼睛，可以冲洗出来。
如果是有害液体或固体进入眼睛表面，迅速打开水龙头，冲洗眼表15分钟。
干眼症需要人工泪液
干眼症很常见，表现为眼睛干涩、眼磨、充血、视疲劳。我国40岁以上成年人21%有干眼症。无论是儿童、中青年还是老年人，都有患干眼症的可能。我们不需要忍耐干眼症，随时使用人工泪液，提高生活质量。
人工泪液是干眼症治疗的一线用药，安全有效（Cochrane Database Sys Rev.2016）。人工泪液是无害的，主要成分是水、高分子化合物、调整PH值的溶质、低浓度防腐剂。任何一种成分都不会造成慢性中毒，也不会使人成瘾。
人工泪液就像角膜的护肤乳液，属于改善生活品质的日常用品，我们可以放心使用。您对防腐剂很介意，有很多无防腐配方的人工泪液可以供您选择。网购也很方便的，例如海露、爱丽、思然…… https://t.cn/R2Wx1KD
眼睛进异物，第一时间冲洗
当眼睛进入固体异物，使用人工泪液滴眼睛，可以冲洗出来。
如果是有害液体或固体进入眼睛表面，迅速打开水龙头，冲洗眼表15分钟。
干眼症需要人工泪液
干眼症很常见，表现为眼睛干涩、眼磨、充血、视疲劳。我国40岁以上成年人21%有干眼症。无论是儿童、中青年还是老年人，都有患干眼症的可能。我们不需要忍耐干眼症，随时使用人工泪液，提高生活质量。
人工泪液是干眼症治疗的一线用药，安全有效（Cochrane Database Sys Rev.2016）。人工泪液是无害的，主要成分是水、高分子化合物、调整PH值的溶质、低浓度防腐剂。任何一种成分都不会造成慢性中毒，也不会使人成瘾。
人工泪液就像角膜的护肤乳液，属于改善生活品质的日常用品，我们可以放心使用。您对防腐剂很介意，有很多无防腐配方的人工泪液可以供您选择。网购也很方便的，例如海露、爱丽、思然…… https://t.cn/R2Wx1KD
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