生信分析——“质粒图谱”如何看（1）

在读文献的时候经常会遇到过表达或者敲低某种基因的时候，以质粒为载体进行转染细胞，那这种质粒图谱应该如何辨识呢？

首先我们要知道质粒的主要构成元件：

1、复制起始位点Ori：即控制复制起始的位点。Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。

2、抗生素抗性基因：可以便于加以检测

①Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。

②tetr ：可以阻止四环素进入细胞。

③camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。

④neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。

⑤hygr：使潮霉素β失活。

3、多克隆位点：图谱中的MCS区或者许多内切酶集中的部分，就是质粒的多克隆位点。多克隆位点为一系列限制性内切酶酶切位点，是外源DNA的插入位点，一般可通过酶切后连接的方式将外源DNA插入质粒。多克隆位点一般位于转录启动和转录终止信号之间。

4、其他元件：P/E：启动子/增强子；Terms：终止信号；加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA的作用等等。
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原文转载自公众号：医学僧的科研日记（ID：zzudoctor）

我们的小学生已经这么牛逼了吗？中华民族伟大复兴何愁不成？

为啥就这个项目被扒出来了呢？我看了看同期获得小学组三等奖的课题，这个课题的确有点脱离小学生的能力范畴，显得有些脱离常识。

经过专家测算，这项研究需要细胞系、培养液、质粒提取、RNA 提取、抗体以及转基因小鼠构建，这些至少需要十多万元的经费，仅仅基因敲低的小鼠构建就要数万元人民币，还不包括实验设备的成本。

生物专业的本科生至少需要几个月才能构建一个敲低蛋白，初学者光是在实验技能方面的训练就至少需要一年，小学生能完成这样的研究，我想可以直接直升科大少年班了。

再翻了翻中学组一等奖的获奖名单，有一个项目成功地吸引了我。

我活了四十多年，也只是在电视上看到过南极洲的样子，而这位来自北京的中学生，已经在南极成功地发现了一种新的抗辐射微生物，我想这至少是一个SCI级别的发现。

3月份开学，实验室4月份搬过来，5月份开始做实验。同时敲两个基因，都是之前构建好的质粒，接合转移筛菌，5.6两个月每天都是挑单克隆，划线，PCR，跑胶，重复重复又重复，一个是明明验证是双交换在划出来就又回去了，一个是压根连单交换都没有见过，果断放弃无抗敲除。端午后马上开始构建cas9敲除，设计引物，载体重新处理过几次，转化ET都很快，但是TMD孢子污染了实验室的另外一种链霉菌，接合转移几次都不正常。28号买票回家，20几天时间，我恐怕等不到验证收孢了，四舍五入一下，我这个学期每天看上去忙成狗（也不是），其实能在毕业论文上写的一点都没有。 https://t.cn/RKKpHwK