#原代细胞是如何培养的?选择组织块还是消化液培养法?

原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官,让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体,它们的生物性状尚未发生很大的改变,在一定程度上可反映它们在体内的状态,表现出来源组织或细胞的特性, 因此用于药物实验,尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等,是极好的工具。

那么,原代细胞是如何培养的呢?

常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。

(一)组织块培养法

许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养,因为方法简单,细胞也较容易生长。尤其是培养心肌,有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后, 即可进行传代。

1. 设备材料

培养箱、冰箱、超净工作台/无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。

2. 操作步骤

(1) 在无菌条件下,取待培养的组织适量,置入小烧杯中, 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次,去掉组织块表面的血污。
(2)用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
(3)再用Hanks 溶液反复漂洗, 直至液体不混浊为止。等组织块下沉,将烧杯倾斜,用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
(4)用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml 青霉素、200μg/ml 链霉素)的培养液再清洗,用吸管吸干后加入5ml 含20%血清的培养液。
(5)用弯头吸管吸取组织小块,均匀地置于培养皿内表面,吸去多余的培养液,各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖,做好标记, 置37°C 的CO2培养箱内。
(6) 2~4h 后,于超净工作台中,缓缓地向培养皿中加入上述含20%血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 链霉素)的培养液少量,以使组织块浸没在培养液中。
(7)轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱, 如无特殊情况,不必观察。1~2 周后,可观察到细胞从组织块边缘长出,形成生长晕。
(9) 一般说来,若培养液无明显改变, 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面,即可进行传代培养。

3. 需要说明及注意的问题

(1) 如果是用培养瓶而不是培养皿,则接种组织块千培养瓶底壁后, 要轻轻地翻转培养瓶,令瓶底在上,盖好瓶盖后轻轻置入37°C 的CO2 培养箱, 2~4h 后,取出培养瓶,在超净工作台内打开瓶盖,仍令组织块在上方。在组织块对面瓶壁加入适量上述培养液。然后,轻轻翻转培养瓶,让组织块浸没于培养液中。盖好瓶盖后放回二氧化碳孵箱,继续培养。
(2) 从培养皿表面游离下来的组织块,弃去即可。
(3) 如果使用玻璃培养瓶,而不是新的塑料培养瓶,则最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾胶原,这样不但有利于组织块的黏附,而且可使细胞生长得更好。
(4)本方法适于各种组织的培养,操作者还可根据自己的实验需要和细胞种类加以修改。

(二)消化培养法

它与上述组织块培养法的主要区别有2 点。一要用酶制剂(最常用的是胰蛋白酶)处理组织块,除去细胞间质,使细胞相互分离,形成细胞悬液;二细胞生长方式多为单层( monolayer ) 。本方法的优点在于单层细胞更易摄取营养、排出代谢产物,因此生长较快,可较快地应用于实验研究;缺点是步骤颇为繁琐,操作不慎易污染。此外,消化处理要恰到好处,不然对细胞会有一定的损伤作用。

1. 操作程序

(1) 在无菌条件下, 取待培养的组织1cm3左右,置入平皿或烧杯中,以适量Hanks 溶液消洗3 次,去掉组织块表面的血污及结缔组织。
(2)以锋利的眼科剪将组织块反复剪碎,得到约0.5mm x 1mm 大小的小块。
(3)以Hanks 溶液冲洗数遍,稍候组织块下沉,吸除Hanks 溶液。
(4)用少量Hanks 溶液,将组织小块吸入预先置有无菌的磁力搅拌子的锥形烧杯中,再加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
(5)将锥形烧杯用橡皮塞盖紧,外封以锡箔。然后移至预先置入37°C 培养箱内的电磁搅拌器上。
(6)打开搅拌器的电源开关,使搅拌子旋转, 关好培养箱,让胰蛋白酶进行消化。
(7)在消化过程中,每隔一定时间吸取消化物滴于载片上,于光学显微镜下观察,检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散,立即加入适量Hanks 溶液,终止消化。通常需消化10~20min 。
(8)先以100μm 不锈钢筛过滤,滤去未消化的组织块或大细胞团(如获得的细胞量少,这些组织块可继续进行消化,以便取得较多细胞)。继以20μ 不锈钢筛过滤。
(9)将取得的滤液进行低速(每分钟500~ 1000 转)离心5min,吸除上清液。并用Hanks 溶液离心清洗1~2 次,最后加入含血清的培养液,搅匀,制成细胞悬液。
(10)用计数板计数,确定细胞悬液浓度,通常以1×105~3×105个接种于培养瓶或培养皿中。

2. 需要说明及注意的问题

(1) 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定,除胰蛋白酶外,常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞;用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
(2)如果没有不锈钢筛, 可用4 层纱布代替,但纱布要预先经高温高压灭菌。
(3) 严格地说,原代培养是指未经传代的细胞,但在实际工作中,人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞,因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
(4) 从原代培养的操作步骤不难看出,原代细胞中含有多种细胞成分,即它们是异质型( heterogeneity) 的群体,因此在设计实验及分析结果时,切勿忘记这一因素。

【小米生态链企业折戟科创板 组团上市进度各异】
小米生态链企业折戟科创板IPO。

上交所官网3月2日消息,上交所决定终止上海商米科技集团股份有限公司(简称“商米科技”)首次公开发行股票并在科创板上市审核。据了解,商米科技致力于为客户提供智能商用设备及相应配套的“端、云”一体化服务。简单来说,商米科技就是一家做POS机、扫码枪、人脸支付等等的企业。

值得注意的是,小米生态链企业一直是市场关注的焦点,但去年来多家生态链公司IPO并不顺利。小米定制智能照明产品的供应商易来智能去年7月终止科创板IPO;趣睡科技去年创业板IPO过会后,目前仍在证监会注册问询阶段。

商米科技尚未盈利

3月2日,上交所日前披露,商米科技科创板IPO被终止审核。

据悉,2月28日,商米科技和保荐人海通证券向上交所提交了《上海商米科技集团股份有限公司关于撤回首次公开发行股票并在科创板上市申请文件的申请》和《海通证券股份有限公司关于上海商米科技集团股份有限公司首次公开发行股票并在科创板上市申请文件的申请》,申请撤回申请文件。而这距离其第二次问询回复才过去13天。

商米科技致力于为客户提供智能商用设备及相应配套的“端、云”一体化服务。财务数据显示,商米科技2018年、2019年、2020年营收分别为9.66亿元、16.44亿元、21.84亿元;净利润分别为-1.80亿元、-2.09亿元、484.31万元。

去年6月,商米科技向科创板递交招股书,IPO拟募资10亿元,用于智能商用设备研发升级项目、软件平台研发升级项目、补充流动资金。

商米科技股东星光熠熠,阿里,小米同为公司股东。股权结构方面,商米科技通过特别表决权安排,董事长林喆持有公司40.24%的股权为公司控股股东和实控人。蚂蚁集团控制的云鑫创投持有股权29.99%是公司的第一大股东,小米旗下的金星创投持有7.78%股权。

值得注意的是,在撤回上市申请前,商米科技完成两轮问询回复,在科创板首轮问询中,上交所主要关注公司科创属性、研发费用、生产模式、销售模式、关联方及关联交易、重要股东、收入增长、尚未盈利、应收账款、存货、长期应收款、体外代发工资薪金等15个问题。在二轮问询中,上交所主要关注商米科技科创属性、数据合规、收入核查、媒体质疑四个方面的问题。

生态链企业纷纷上市

小米生态链企业一直是市场关注的焦点,九号公司(689009)、石头科技(688169)先后登陆科创板;华米科技(ZEPP)、云米科技(VIOT)也陆续在美股上市。

小米生态链起源于2013年,当时的小米还只是一个专注于手机平板的企业,但是创始人雷军有着前瞻性的思考即智能硬件和AIoT市场爆发的前景。于是,雷军将发展智能硬件的任务交给小米的联合创始人暨高级副总裁刘德,创立金米投资公司,投资市场上“有潜力且认同小米价值观的企业”,小米生态链企业由此诞生。

但去年来多家小米生态链公司IPO并不顺利。小米定制智能照明产品的供应商易来智能去年7月终止科创板IPO;趣睡科技去年创业板IPO过会后,目前仍在证监会注册问询阶段。

易来智能主营智能家居照明及控制系统业务,是小米定制智能照明产品的供应商,拥有米家品牌和自有品牌两大品牌产品,自有品牌包括Yeelight及YeelightPro全屋智能照明系统。作为小米生态链企业,2017年、2018年、2019年和2020年1-6月,易来智能来自小米的关联销售合计占公司全部营收的比例分别为和54.92%。

2020年12月易来智能创业板IPO申请获受理,2021年7月9日公司选择终止IPO。易来智能在首轮问询中被上交所连环追问34个问题,而在二度问询中,再抛13个问题直击要害。首轮问题主要包含股权结构、科创属性、核心技术、业务、独立性等,二度问询问题主要集中在科创属性、独立性、独立性、实控人等多个方面。

另一小米生态链企业趣睡科技去年创业板IPO过会后,目前仍在证监会注册问询阶段。趣睡科技是一家专注于自有品牌科技创新家居产品的互联网零售公司。公司主营业务为高品质易安装家具、家纺等家居产品的研发、设计、生产与销售,公司核心品牌“8H”在消费者群体中有较高知名度。公司产品主要包括家具、家纺两大类别。

作为小米生态链企业之一,小米,京东作为背后股东纷纷加持趣睡科技。招股书显示,小米旗下的顺为投资和天津金米合计持股比例为11.9%,京东数科持股比例为2.47%。另外,喜临门持股2.9187%股份。

另一家冲刺创业板的小米生态链公司素士科技,目前仍在交易所问询阶段。素士科技主要产品包括电动牙刷、冲牙器、吹风机、剃须刀等个护小家电,拥有自有品牌“素士”、“AIRFLY”及“品敬”。 作为小米生态链企业,素士科技与小米集团发生的关联销售金额较高,同时小米集团通过天津金米和顺为科技持有素士科技近20%股份。本次IPO,素士科技拟募资7.75亿元,分别投入到全产品升级项目、品牌推广及营销升级建设项目、素士研发中心建设项目和补充流动资金项目。

下载e公司app,获取更多上市公司资讯:https://t.cn/A6ITxCyj

【花钱“修复”不良征信?这种骗局不能信】

  一纸信用报告,关系着每个人和企业的金融生活,一旦出现不良记录就可能产生房贷等贷款通不过、个人或企业信誉受损等负面影响。因此,部分信息主体急于消除不良征信记录,一些不法分子趁机以“征信修复、洗白、铲单”“异议投诉咨询、代理”为名招揽生意,收取高额服务费。

  花钱就能“洗白”不良征信记录?业内人士表示,征信领域不存在“征信修复”的说法,所有声称合法的、商业的、收费的“征信修复”都是骗局。不仅涉嫌触犯法律,更破坏了社会信用体系。

  “征信修复”骗局花样多多骗财坑人

  湖北天门的张先生因个人疏忽发生贷款逾期,找银行咨询、沟通,寻求删除不良记录未果后,心有不甘的他在网上找到一家“征信修复”机构,并将1万元定金和以自己实名办理的一张手机电话卡交给这家机构,约定事成后再付2万元。

  随后,这家机构以张先生的名义发起信访投诉。中国人民银行天门支行接到投诉后请张先生现场核实,才了解到真相。“我们跟他说,这样做不仅花冤枉钱,还会泄露个人隐私信息。如这家机构用他的手机卡进行电信诈骗、洗钱、冒名网贷等,还可能会被牵连。知道自己受骗后,张先生撤销了投诉。”中国人民银行天门支行征信工作人员说。

  记者检索中国裁判文书网发现,“征信修复”骗局比比皆是:不法分子声称花钱就能修复人民银行征信中心信用报告,有的收取高额费用后失联,有的教唆个人用“非恶意逾期”理由无理申诉,或运用虚假材料等非法手段以图修改不良信息,通常修改失败后不退款或失联。所谓“征信修复”机构的业务大多是材料造假、伪造证明、恶意投诉、欺骗银行。

  武汉市反电诈中心、中国人民银行武汉分行营业部近日联合揭露了5种常见的“征信修复”骗局。除了直接针对普通失信主体的诈骗外,还有针对创业、就业人群失信群体的“信用培训考证”诈骗,针对创业人群的“征信加盟代理”诈骗,针对网购网贷群体、冒充客服人员或金融机构工作人员的“账户异常”诈骗和“注销贷款”诈骗。

  业内人士表示,还有两种骗局也比较常见:一是声称可以快速放贷,当事人上钩后,又以征信记录差为由,要求当事人支付“征信修复”费;二是声称只要支付一定的费用,就可以帮助当事人消除网贷借款记录,本息都不用归还,且不会被催收或起诉。

  中国人民银行武汉分行征信管理处副处长唐德鑫说,个人、企业有信用卡或贷款逾期,未履行担保责任,失信被执行等情形,就会产生不良征信记录。正确无误的不良征信记录是不会删除或更改的。“征信修复”骗局的实质是不法分子利用信息主体对征信政策法规不了解,故意混淆征信异议的概念进行误导,以欺骗的手段达到其非法牟利的目的。

  征信异议处置有渠道无需中介

  其实,如果个人认为信用报告上的信息有误时,有权向征信机构提出异议。征信机构或银行需进行核查和处理,有错误的会及时更正。

  “当联络员半年多来接到了6起征信异议咨询,其中两起确因个人疏漏忘了还款、且逾期时间不长,我让客户做了说明,上报征信机构予以记载;其他明显不良的进行解释后客户也能理解。”中国建设银行崇阳财富广场支行征信异议联络员熊峥说。

  唐德鑫说,提出征信异议所需的资料也不复杂,个人持有效身份证件、企业法人自己或委托他人持营业执照即可办理。“提出征信异议完全不需要通过中介,更不存在收费。”他说。

  《征信业管理条例》规定,信息主体认为征信机构采集、保存、提供的信息存在错误、遗漏的,有权向征信机构或者信息提供者提出异议,要求更正。征信机构或信息提供者收到征信异议后,要对异议信息进行核查,发现确实存在错误或遗漏的,应当予以更正。

  唐德鑫表示,征信异议实质是“纠错”,即对于错误或遗漏的数据进行更正或补充,而不是发生“失信行为”之后的信用重塑。无论是征信机构还是商业银行等信息提供者,都不能修改、删除信用报告上正确的征信信息。

  记者了解到,只有征信信息的报送机构才有修改权限。目前,金融机构有严格的系统流程和管理要求,监控征信查询行为,防范内外勾结违规删改征信信息。如果有些人抱着“花钱消灾”的想法,希望花钱消除不良记录,最终往往落入不法分子的圈套。

  堵“旁门”开“正门”共护诚信社会

  多位银行和监管部门人士建议,相关部门应加强协作,严格管控清理网络上的各类“征信修复”虚假宣传广告,加大对不法分子的打击力度,提高违法成本。堵住“旁门”的同时,金融机构和征信机构要普及相关知识,让公众知晓合法的维权渠道和方式,了解“征信修复”骗局,避免上当受骗。

  “第一位的是自己保护自己。”多位专业人士表示,对于个人和企业来说,首先应合理负债,量入为出,按照借款合同约定的还款时间和金额及时还款。尤其要注意保管好自己的身份证件、网银、手机银行等敏感信息,以防发生莫名贷款。

  “出现不良信息后应及时还款,终止不良行为,后续注意按时还款、避免逾期,保持良好的信用记录。”唐德鑫说,有特殊情况造成不良信息,可申请对不良信息做出声明,在保存期内,征信机构会予以记载。(新华社)


发布     👍 0 举报 写留言 🖊   
✋热门推荐
  • !!
  • 一个人如果真想做成某一件事,只要你足够的想,是没有任何外界因素可以左右阻止你的,关键就是看你是不是真的想要。所以,我想告诉给位说的是,大家做任何事,一定多研究你
  • #摩登兄弟[超话]##超话星愿池##刘宇宁开始推理吧#|#刘宇宁南珩离十六#|#摩登兄弟[超话]#@摩登兄弟刘宇宁 刘宇宁,情话只说给你听,因为你是我心中最特别
  • #王子毛弟[超话]#品一品这句话的几个意思第一:回复上面那句,我有你没有,明晃晃的炫耀第二:臭屁 变相夸一下自己不笨第三:金主哥哥,我的(占有欲满满的标记)第四
  • 现在才知道不管怎样,我都难以释怀……这几年,我带着孩子在家,因为我怕啊我怕有这么一天,也知道早晚有这么一天,可我没想到会是这样啊,姥娘……我很早就没了姥爷,太小
  • “那我不能白干活啊,你得用什么东西做酬劳,”phuwin打量着人鱼,一片鱼鳞的价钱足够自己逃上岸生活好一阵,phuwin不确定是不是自己的错觉,自己提出条件时只
  • “有人说我是刽子手,做了几万例人流就是杀害了几万个生命,我不认同,但我也没办法替自己辩解。当短短几年后,连小孩组词都会说“无痛的人流”时,人们才发现,巨大的利益
  • ”比肩和劫财是两回事比肩不记仇一些事过去了,人家也不放在心上,自洽劫财,很记仇的一件事让他记住,三十年后还给你翻旧账我观察过比肩旺的和劫财旺的老人家比肩旺的一个
  • #倪海厦经验方[超话]##微博健康公开课##倪海厦经验方##亿点曝光计划# 名祖《百字碑》注解 明·张三丰 养炁忘言守,降心为不为。 动静知宗祖,无事更寻谁。
  • 无惧脱发困扰脱发人群越来越年轻化熬夜脱、压力脱[泪]、产后脱、雄脱[失望]脱发白发就用茶润坊[种草R]专注中药头部养生以养代疗‍♀️还你健康浓密秀发 昆明茶润坊
  • 当你使用的时候,你会觉得这款复刻手表的使用感和正品手表一样,而且时间极其准确。其实有点多虑了,除了那种特别便宜的地摊货之外,大部分高仿手表的机芯,都是采用海鸥,
  • 另外,推特網友的意見大都是認為大火的確燒得很厲害,但這側傾角度應該還能救(至少撐住)才對,看起來是損管有很大的問題才會把重傷搞成往生。AK刘彰说INTO1要糊哦
  • 不要不要注定悲伤的五月我要鲜活生动的小草迎着朝阳像往常一样充满希望要远方的外婆一切安好没有操劳常来梦中与小草重聚要高山低谷笃定前行否极泰来要生命如暗室明写春诗另
  • 少林大濕胸在临近夏天时选择入手这枚腕表,看来是想戴着它一起上天入在入手这枚欧米茄海马300青铜金款之后已经有一段时间,但即便如此也并未从与它的“热恋期”中“退热
  • 昨日国际金价日线收取阴十字星,也就是两连阳开始转阴,又会有很多人看规律,数K线,前几次两阳转阴又要大涨转阳了,交易就是这样数K线那还需要技术吗,前面的走势只能是
  • 从照片中可以看到,杨洋的医生非常负责,对于杨洋的病情很重视,医生站在车门口严杨颖强势回归,《奔跑吧》掀白鹿团危机?从照片中可以看到,杨洋的医生非常负责,对于杨洋
  • 趁你现在还有时间,尽你自己最大的努力,努力做成你最想做的那件事,成为你最想成为的那种人,过着你最想过的那种生活,这个世界永远比你想的要更精彩,不要败给生活。#章
  • 不过zf厂不是最早复刻这款蝶飞多功能动显复刻表的厂家,而是tw工厂,当时TW厂的欧米茄蝶飞直径和正品一致,功能也相同,不过厚度为13mm,而正品是12.5mm,
  • 一、郑州洗衣液批发告诉你夏天袜子清洗晾晒后变硬的原因是什么 大家好,夏天来临,我们每天都会穿着袜子来保持脚部的清洁和舒适。然而,有时我们会发现清洗晾晒后的袜子变
  • 第868章   “不必了,我们本来就不熟,有什么事直接电话里谈吧。”   我让他这两天搜集了一些“如约”影楼宰客的新闻,以及和顾客发生过的各种矛盾,全部都整理