私服打板的一件chao重工小香外套
一眼爱上的粗花呢
门襟的领口和袖口做了拼色
是由很多个颜色组合而成红色基调的拼色
一看就很高ji ❤️
版型就是小香hen经典的小短款 fei常合身 溜肩的姐妹一定要入 穿上立马变直角肩 内里的做工也是h精致 五金锁边
丝质内里 由内到外的质感100昏~
值得收藏的一件
第738天
《泪管堵塞做什么手术》
根据泪道阻塞的部位和严重程度来选取相应的治疗方案。目前主要是通过手术治疗，主流的手术方式有以下几种：泪道探通术、泪道置管术和鼻腔泪囊吻合术。
新生儿的先天性泪道堵塞一般多不需手术，可按摩泪囊区，一般在小孩三个月左右的时候会自行通畅，半岁以后仍不通畅，可行泪道探通术。
成人的泪道堵塞，可发生在泪小点，泪小管，泪囊，鼻泪管等位置。泪小点闭塞时可行有点扩张，然后行泪道冲洗；泪小管闭塞，可行泪小管硅胶管置管术；鼻泪管阻塞时可行，鼻腔泪囊吻合，鼻泪管置管术。
第一种：
泪道阻塞常规治疗方法有泪道冲洗、扩张、穿线或手术的方法，但均存在不同程度的弊端。非手术方法简便，但效果差，如泪道探通虽可使泪道扩张，但对阻塞部位仅为穿破而非穿通，且损伤正常粘膜组织形成疤痕加重阻塞。
第二种：
较轻微的泪道阻塞可以考虑做泪道探通治疗，是用一根探针进入泪道将阻塞的部位通开，但是这种治疗容易复发，如果复发以后可以再次做泪道探通。
泪道探通术使用一根探针从下泪小点通入泪道，然后逐渐经过泪总管，泪囊和鼻泪管，找到狭窄或者阻塞的部位，然后用探针将它通开，通开之后要继续配合按摩，以及点抗生素滴眼液和激素滴眼液，消除感染以及防止泪道再次发生阻塞。
泪道探通术是目前最简单的手术方式，它存在的问题是复发几率比较大。
第三种：
反复泪道探通都出现复发，可以考虑做泪道置管手术，也就是探通之后，在泪道中植入一根硅胶管将泪道支撑起来，这样就不容易复发了，等到术后三个月恢复稳定的时候再将硅胶管取出来。
它的缺点主要是，硅胶管在内眼角部位会有一些异物感，容易造成患者眼睛不舒服。泪道插管术有义管不易固定，常有滑脱感，并长期刺激粘膜产生炎性增生，再度阻塞。
第四种：
果泪道阻塞范围比较大，难以通过探通将它通开，或者是泪道探通置管手术失败这种情况。比较彻底一点的手术，可以考虑做鼻腔泪囊吻合术，也就是在鼻腔和泪囊之间做一个人工的引流通道绕开阻塞的鼻泪管，使泪液直接从泪囊排入鼻腔当中。
这种情况在泪道处进行开放性的切口，然后暴露出泪囊，在泪囊的地方进行手术，将泪囊与鼻粘膜连接在一起，此类到重新开放，适合各种类型不适合做探通的泪道阻塞患者。
鼻腔泪囊吻合术效果肯定，但手术复杂组织损伤大。改道后的鼻腔引流不符合人体的生理要求，且颜面留有疤痕。
第五种：
激光泪道成形术（KTP/YAG倍频激光泪道阻塞治疗技术），激光激开泪道管、泪总管、鼻泪管联合药物灌注，这种手术方式可恢复泪道的生理通道。泪小管及泪总管阻塞，对周围组织热损伤小。
目前国内外全新的也是最有效的治疗方法，其汽化明显，对周围组织热损伤小，时间短、不出血，不住院、不开刀，不需在泪道内留置支撑物，是理想的泪道重造门诊手术。
泪道激光是通过激光使阻塞部位再次探通，与泪道探通相似，应用探针从泪点进入经过泪小管一直推进。泪小管发生阻塞部位应用激光探针对阻塞部位进行探通，激光能量足够，在手术开始之前眼表会进行表面麻醉，点用麻醉剂后再进行手术，术前鼻腔会用鼻部使用的表面麻醉剂和收缩鼻甲药物减轻患者疼痛反应，手术中有利多卡因表面麻醉剂冲洗到泪道使泪道黏膜发生麻醉。手术过程应用麻药，患者在手术过程中感觉轻度疼痛，但大部分患者可以忍受。
对于成年人的泪道阻塞，其原因往往是泪道结石、瘢痕、炎症等，激光治疗有损伤小的优点。但对于先天性的泪道阻塞，激光治疗不适用，它可能会造成瘢痕收缩、泪道狭窄等问题。泪道有急性炎症禁忌。
泪道阻塞可发生在泪小点，泪小管，泪总管，鼻泪管等。共同症状是流泪，但发生在泪小点，泪小管，泪总管处时一般只有流泪的症状，不会发生泪囊炎。若阻塞部位在鼻类管处易反复发生急性或慢性泪囊炎。
泪道是由泪小点、泪小管、泪囊及鼻泪管组成，泪液就是由泪小点进入泪小管、泪囊，经鼻泪管流入鼻腔。眼部或鼻腔疾病都可能殃及泪道，引起泪道阻塞，泪液储留于泪囊内，继发细菌感染，就会发生慢性泪囊炎，出现流脓症状，严重时还可导致角膜溃疡，眼眶蜂窝组织炎、内眼手术感染等并发症。
若仅有流泪的症状，且对生活困扰不大者可不行手术治疗。
激光泪道成形术手术步骤：
1.泪点闭塞 找准泪点准确位置后，用激光击射，击射通时有落空感，再击射扩大泪点，用生理盐水冲洗泪道，证实泪道畅通后插细塑料管，涂抗生素眼膏，遮盖术眼。
2.泪小管或总泪小管阻塞 将眼睑固定好，使泪小管变直拉紧。先用泪点扩张器扩大泪点，再用0或1号探针插入泪小管至阻塞部，适当扩张泪小管，准确掌握阻塞部位后，换置中空带针芯的泪道探针，拔出针芯，将激光导光纤维插入，对准阻塞处行连续击射（输出功率8～14W，脉冲频率3000～5000pps），待阻力消除有落空感后，抽出光纤，注入生理盐水，确认泪道畅通后，插入细塑料管，将管之一端固定于眼睑外。
3.鼻泪管阻塞 按泪道探通的方法扩大泪点，插入1或2号泪道探针，待探针抵鼻泪管阻塞部时，不再向下进针，适当换置稍粗型号泪道针，置换中空带针芯的泪道探针，拔出针芯后，将激光导光纤维插入，对准阻塞处行连续击射（输出功率8～14W，脉冲频率3000～5000pps），当阻力消除后有落空感，抽出光纤，可将探针继续下探后拔出冲洗。也可在击射后直接冲洗泪道，确认泪道疏通后拔针，插入细塑料管，将管之一端固定于睑外。
术中注意要点：
1.在击射泪小管或总泪小管阻塞部时，一定要把眼睑固定好，使泪小管始终处于拉紧变直的状态，以免损伤正常泪小管及其周围组织，造成假道。
2.在击射鼻泪管阻塞前，先用探针探查阻塞部位，一定要按泪道探通的方法进针，以免损伤正常泪道组织，造成假道。即探针要以泪囊鼻侧骨壁为支点，将针尾作90°旋转，紧贴额际，感知探针由骨窝滑入鼻泪管后，再向下推进，直抵阻塞部。
3.对泪道阻塞段较长或泪道阻塞时间长者，激光击射通后可立即灌注少量低浓度丝裂霉素C（0.2～0.4mg/ml）溶液并保留3min后，用生理盐水冲洗掉残留药液。由于丝裂霉素生物活性降低后成为DNA的烷基化物质，可交替抑制细胞增殖，从而减少再阻塞的机会。
4.拔管时间 泪点闭塞24～72h拔管；泪小管或总泪小管阻塞1周左右拔管；鼻泪管阻塞1～3个月拔管。
日常防护：
第一，在风沙较大的环境下戴防护镜减少眼表刺激。
第二，不要用卫生纸，手绢等擦眼睑。
第三，尽量避免用力擤鼻涕。
第四，若出现眼睛分泌物增多，泪囊部位压痛等不适症状及时就医。
《泪管堵塞做什么手术》
根据泪道阻塞的部位和严重程度来选取相应的治疗方案。目前主要是通过手术治疗，主流的手术方式有以下几种：泪道探通术、泪道置管术和鼻腔泪囊吻合术。
新生儿的先天性泪道堵塞一般多不需手术，可按摩泪囊区，一般在小孩三个月左右的时候会自行通畅，半岁以后仍不通畅，可行泪道探通术。
成人的泪道堵塞，可发生在泪小点，泪小管，泪囊，鼻泪管等位置。泪小点闭塞时可行有点扩张，然后行泪道冲洗；泪小管闭塞，可行泪小管硅胶管置管术；鼻泪管阻塞时可行，鼻腔泪囊吻合，鼻泪管置管术。
第一种：
泪道阻塞常规治疗方法有泪道冲洗、扩张、穿线或手术的方法，但均存在不同程度的弊端。非手术方法简便，但效果差，如泪道探通虽可使泪道扩张，但对阻塞部位仅为穿破而非穿通，且损伤正常粘膜组织形成疤痕加重阻塞。
第二种：
较轻微的泪道阻塞可以考虑做泪道探通治疗，是用一根探针进入泪道将阻塞的部位通开，但是这种治疗容易复发，如果复发以后可以再次做泪道探通。
泪道探通术使用一根探针从下泪小点通入泪道，然后逐渐经过泪总管，泪囊和鼻泪管，找到狭窄或者阻塞的部位，然后用探针将它通开，通开之后要继续配合按摩，以及点抗生素滴眼液和激素滴眼液，消除感染以及防止泪道再次发生阻塞。
泪道探通术是目前最简单的手术方式，它存在的问题是复发几率比较大。
第三种：
反复泪道探通都出现复发，可以考虑做泪道置管手术，也就是探通之后，在泪道中植入一根硅胶管将泪道支撑起来，这样就不容易复发了，等到术后三个月恢复稳定的时候再将硅胶管取出来。
它的缺点主要是，硅胶管在内眼角部位会有一些异物感，容易造成患者眼睛不舒服。泪道插管术有义管不易固定，常有滑脱感，并长期刺激粘膜产生炎性增生，再度阻塞。
第四种：
果泪道阻塞范围比较大，难以通过探通将它通开，或者是泪道探通置管手术失败这种情况。比较彻底一点的手术，可以考虑做鼻腔泪囊吻合术，也就是在鼻腔和泪囊之间做一个人工的引流通道绕开阻塞的鼻泪管，使泪液直接从泪囊排入鼻腔当中。
这种情况在泪道处进行开放性的切口，然后暴露出泪囊，在泪囊的地方进行手术，将泪囊与鼻粘膜连接在一起，此类到重新开放，适合各种类型不适合做探通的泪道阻塞患者。
鼻腔泪囊吻合术效果肯定，但手术复杂组织损伤大。改道后的鼻腔引流不符合人体的生理要求，且颜面留有疤痕。
第五种：
激光泪道成形术（KTP/YAG倍频激光泪道阻塞治疗技术），激光激开泪道管、泪总管、鼻泪管联合药物灌注，这种手术方式可恢复泪道的生理通道。泪小管及泪总管阻塞，对周围组织热损伤小。
目前国内外全新的也是最有效的治疗方法，其汽化明显，对周围组织热损伤小，时间短、不出血，不住院、不开刀，不需在泪道内留置支撑物，是理想的泪道重造门诊手术。
泪道激光是通过激光使阻塞部位再次探通，与泪道探通相似，应用探针从泪点进入经过泪小管一直推进。泪小管发生阻塞部位应用激光探针对阻塞部位进行探通，激光能量足够，在手术开始之前眼表会进行表面麻醉，点用麻醉剂后再进行手术，术前鼻腔会用鼻部使用的表面麻醉剂和收缩鼻甲药物减轻患者疼痛反应，手术中有利多卡因表面麻醉剂冲洗到泪道使泪道黏膜发生麻醉。手术过程应用麻药，患者在手术过程中感觉轻度疼痛，但大部分患者可以忍受。
对于成年人的泪道阻塞，其原因往往是泪道结石、瘢痕、炎症等，激光治疗有损伤小的优点。但对于先天性的泪道阻塞，激光治疗不适用，它可能会造成瘢痕收缩、泪道狭窄等问题。泪道有急性炎症禁忌。
泪道阻塞可发生在泪小点，泪小管，泪总管，鼻泪管等。共同症状是流泪，但发生在泪小点，泪小管，泪总管处时一般只有流泪的症状，不会发生泪囊炎。若阻塞部位在鼻类管处易反复发生急性或慢性泪囊炎。
泪道是由泪小点、泪小管、泪囊及鼻泪管组成，泪液就是由泪小点进入泪小管、泪囊，经鼻泪管流入鼻腔。眼部或鼻腔疾病都可能殃及泪道，引起泪道阻塞，泪液储留于泪囊内，继发细菌感染，就会发生慢性泪囊炎，出现流脓症状，严重时还可导致角膜溃疡，眼眶蜂窝组织炎、内眼手术感染等并发症。
若仅有流泪的症状，且对生活困扰不大者可不行手术治疗。
激光泪道成形术手术步骤：
1.泪点闭塞 找准泪点准确位置后，用激光击射，击射通时有落空感，再击射扩大泪点，用生理盐水冲洗泪道，证实泪道畅通后插细塑料管，涂抗生素眼膏，遮盖术眼。
2.泪小管或总泪小管阻塞 将眼睑固定好，使泪小管变直拉紧。先用泪点扩张器扩大泪点，再用0或1号探针插入泪小管至阻塞部，适当扩张泪小管，准确掌握阻塞部位后，换置中空带针芯的泪道探针，拔出针芯，将激光导光纤维插入，对准阻塞处行连续击射（输出功率8～14W，脉冲频率3000～5000pps），待阻力消除有落空感后，抽出光纤，注入生理盐水，确认泪道畅通后，插入细塑料管，将管之一端固定于眼睑外。
3.鼻泪管阻塞 按泪道探通的方法扩大泪点，插入1或2号泪道探针，待探针抵鼻泪管阻塞部时，不再向下进针，适当换置稍粗型号泪道针，置换中空带针芯的泪道探针，拔出针芯后，将激光导光纤维插入，对准阻塞处行连续击射（输出功率8～14W，脉冲频率3000～5000pps），当阻力消除后有落空感，抽出光纤，可将探针继续下探后拔出冲洗。也可在击射后直接冲洗泪道，确认泪道疏通后拔针，插入细塑料管，将管之一端固定于睑外。
术中注意要点：
1.在击射泪小管或总泪小管阻塞部时，一定要把眼睑固定好，使泪小管始终处于拉紧变直的状态，以免损伤正常泪小管及其周围组织，造成假道。
2.在击射鼻泪管阻塞前，先用探针探查阻塞部位，一定要按泪道探通的方法进针，以免损伤正常泪道组织，造成假道。即探针要以泪囊鼻侧骨壁为支点，将针尾作90°旋转，紧贴额际，感知探针由骨窝滑入鼻泪管后，再向下推进，直抵阻塞部。
3.对泪道阻塞段较长或泪道阻塞时间长者，激光击射通后可立即灌注少量低浓度丝裂霉素C（0.2～0.4mg/ml）溶液并保留3min后，用生理盐水冲洗掉残留药液。由于丝裂霉素生物活性降低后成为DNA的烷基化物质，可交替抑制细胞增殖，从而减少再阻塞的机会。
4.拔管时间 泪点闭塞24～72h拔管；泪小管或总泪小管阻塞1周左右拔管；鼻泪管阻塞1～3个月拔管。
日常防护：
第一，在风沙较大的环境下戴防护镜减少眼表刺激。
第二，不要用卫生纸，手绢等擦眼睑。
第三，尽量避免用力擤鼻涕。
第四，若出现眼睛分泌物增多，泪囊部位压痛等不适症状及时就医。
#原代细胞是如何培养的？选择组织块还是消化液培养法？
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。
那么，原代细胞是如何培养的呢？
常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。
（一）组织块培养法
许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、超净工作台／无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。
2. 操作步骤
（1） 在无菌条件下，取待培养的组织适量，置入小烧杯中， 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉组织块表面的血污。
（2）用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
（3）再用Hanks 溶液反复漂洗， 直至液体不混浊为止。等组织块下沉，将烧杯倾斜，用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml 青霉素、200μg/ml 链霉素）的培养液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培养液。
（5）用弯头吸管吸取组织小块，均匀地置于培养皿内表面，吸去多余的培养液，各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。
（6） 2~4h 后，于超净工作台中，缓缓地向培养皿中加入上述含20％血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 链霉素）的培养液少量，以使组织块浸没在培养液中。
（7）轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，不必观察。1~2 周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。
（9） 一般说来，若培养液无明显改变， 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面，即可进行传代培养。
3. 需要说明及注意的问题
（1） 如果是用培养瓶而不是培养皿，则接种组织块千培养瓶底壁后， 要轻轻地翻转培养瓶，令瓶底在上，盖好瓶盖后轻轻置入37°C 的CO2 培养箱， 2~4h 后，取出培养瓶，在超净工作台内打开瓶盖，仍令组织块在上方。在组织块对面瓶壁加入适量上述培养液。然后，轻轻翻转培养瓶，让组织块浸没于培养液中。盖好瓶盖后放回二氧化碳孵箱，继续培养。
（2） 从培养皿表面游离下来的组织块，弃去即可。
（3） 如果使用玻璃培养瓶，而不是新的塑料培养瓶，则最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾胶原，这样不但有利于组织块的黏附，而且可使细胞生长得更好。
（4）本方法适于各种组织的培养，操作者还可根据自己的实验需要和细胞种类加以修改。
（二）消化培养法
它与上述组织块培养法的主要区别有2 点。一要用酶制剂（最常用的是胰蛋白酶）处理组织块，除去细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；二细胞生长方式多为单层( monolayer ) 。本方法的优点在于单层细胞更易摄取营养、排出代谢产物，因此生长较快，可较快地应用于实验研究；缺点是步骤颇为繁琐，操作不慎易污染。此外，消化处理要恰到好处，不然对细胞会有一定的损伤作用。
1. 操作程序
（1） 在无菌条件下， 取待培养的组织1cm3左右，置入平皿或烧杯中，以适量Hanks 溶液消洗3 次，去掉组织块表面的血污及结缔组织。
（2）以锋利的眼科剪将组织块反复剪碎，得到约0.5mm x 1mm 大小的小块。
（3）以Hanks 溶液冲洗数遍，稍候组织块下沉，吸除Hanks 溶液。
（4）用少量Hanks 溶液，将组织小块吸入预先置有无菌的磁力搅拌子的锥形烧杯中，再加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
（5）将锥形烧杯用橡皮塞盖紧，外封以锡箔。然后移至预先置入37°C 培养箱内的电磁搅拌器上。
（6）打开搅拌器的电源开关，使搅拌子旋转， 关好培养箱，让胰蛋白酶进行消化。
（7）在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。
（8）先以100μm 不锈钢筛过滤，滤去未消化的组织块或大细胞团（如获得的细胞量少，这些组织块可继续进行消化，以便取得较多细胞）。继以20μ 不锈钢筛过滤。
（9）将取得的滤液进行低速（每分钟500~ 1000 转）离心5min，吸除上清液。并用Hanks 溶液离心清洗1~2 次，最后加入含血清的培养液，搅匀，制成细胞悬液。
（10）用计数板计数，确定细胞悬液浓度，通常以1×105~3×105个接种于培养瓶或培养皿中。
2. 需要说明及注意的问题
（1） 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定，除胰蛋白酶外，常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞；用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
（2）如果没有不锈钢筛， 可用4 层纱布代替，但纱布要预先经高温高压灭菌。
（3） 严格地说，原代培养是指未经传代的细胞，但在实际工作中，人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞，因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
（4） 从原代培养的操作步骤不难看出，原代细胞中含有多种细胞成分，即它们是异质型( heterogeneity) 的群体，因此在设计实验及分析结果时，切勿忘记这一因素。
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。
那么，原代细胞是如何培养的呢？
常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。
（一）组织块培养法
许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、超净工作台／无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。
2. 操作步骤
（1） 在无菌条件下，取待培养的组织适量，置入小烧杯中， 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉组织块表面的血污。
（2）用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
（3）再用Hanks 溶液反复漂洗， 直至液体不混浊为止。等组织块下沉，将烧杯倾斜，用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml 青霉素、200μg/ml 链霉素）的培养液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培养液。
（5）用弯头吸管吸取组织小块，均匀地置于培养皿内表面，吸去多余的培养液，各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。
（6） 2~4h 后，于超净工作台中，缓缓地向培养皿中加入上述含20％血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 链霉素）的培养液少量，以使组织块浸没在培养液中。
（7）轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，不必观察。1~2 周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。
（9） 一般说来，若培养液无明显改变， 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面，即可进行传代培养。
3. 需要说明及注意的问题
（1） 如果是用培养瓶而不是培养皿，则接种组织块千培养瓶底壁后， 要轻轻地翻转培养瓶，令瓶底在上，盖好瓶盖后轻轻置入37°C 的CO2 培养箱， 2~4h 后，取出培养瓶，在超净工作台内打开瓶盖，仍令组织块在上方。在组织块对面瓶壁加入适量上述培养液。然后，轻轻翻转培养瓶，让组织块浸没于培养液中。盖好瓶盖后放回二氧化碳孵箱，继续培养。
（2） 从培养皿表面游离下来的组织块，弃去即可。
（3） 如果使用玻璃培养瓶，而不是新的塑料培养瓶，则最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾胶原，这样不但有利于组织块的黏附，而且可使细胞生长得更好。
（4）本方法适于各种组织的培养，操作者还可根据自己的实验需要和细胞种类加以修改。
（二）消化培养法
它与上述组织块培养法的主要区别有2 点。一要用酶制剂（最常用的是胰蛋白酶）处理组织块，除去细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；二细胞生长方式多为单层( monolayer ) 。本方法的优点在于单层细胞更易摄取营养、排出代谢产物，因此生长较快，可较快地应用于实验研究；缺点是步骤颇为繁琐，操作不慎易污染。此外，消化处理要恰到好处，不然对细胞会有一定的损伤作用。
1. 操作程序
（1） 在无菌条件下， 取待培养的组织1cm3左右，置入平皿或烧杯中，以适量Hanks 溶液消洗3 次，去掉组织块表面的血污及结缔组织。
（2）以锋利的眼科剪将组织块反复剪碎，得到约0.5mm x 1mm 大小的小块。
（3）以Hanks 溶液冲洗数遍，稍候组织块下沉，吸除Hanks 溶液。
（4）用少量Hanks 溶液，将组织小块吸入预先置有无菌的磁力搅拌子的锥形烧杯中，再加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
（5）将锥形烧杯用橡皮塞盖紧，外封以锡箔。然后移至预先置入37°C 培养箱内的电磁搅拌器上。
（6）打开搅拌器的电源开关，使搅拌子旋转， 关好培养箱，让胰蛋白酶进行消化。
（7）在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。
（8）先以100μm 不锈钢筛过滤，滤去未消化的组织块或大细胞团（如获得的细胞量少，这些组织块可继续进行消化，以便取得较多细胞）。继以20μ 不锈钢筛过滤。
（9）将取得的滤液进行低速（每分钟500~ 1000 转）离心5min，吸除上清液。并用Hanks 溶液离心清洗1~2 次，最后加入含血清的培养液，搅匀，制成细胞悬液。
（10）用计数板计数，确定细胞悬液浓度，通常以1×105~3×105个接种于培养瓶或培养皿中。
2. 需要说明及注意的问题
（1） 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定，除胰蛋白酶外，常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞；用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
（2）如果没有不锈钢筛， 可用4 层纱布代替，但纱布要预先经高温高压灭菌。
（3） 严格地说，原代培养是指未经传代的细胞，但在实际工作中，人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞，因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
（4） 从原代培养的操作步骤不难看出，原代细胞中含有多种细胞成分，即它们是异质型( heterogeneity) 的群体，因此在设计实验及分析结果时，切勿忘记这一因素。
✋热门推荐