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SOP文件 | 抗心肌抗体操作规程及临床意义
目的:
规范抗心肌抗体的检测的操作
范围：
检验科免疫实验室
责任人:
免疫实验室专业组长和实验室工作人员
基本原理：
本试剂盒采用基因工程表达的高纯度、高活性心肌特异性抗原包被酶联板，辣根过氧化物（HRP）标记的鼠抗人IgG（抗r链）单克隆抗体为示踪物，TMB显色系统，间接ELISA方法检测人血清或血浆中的抗心肌IgG抗体。本试剂盒具有灵敏度高,特异性强，操作简单，加样变色。反应快速，反应模式及重复性好等优点。适用于病毒型心肌炎、心肌梗塞后综合症等的诊断。
试剂盒组成：
1、预包被板： 48孔
2、标本稀释液： 1瓶（6ml）
3、阴性对照： 1瓶（0.5ml）
4、阳性对照： 1瓶（0.5ml）
5、浓缩洗液（20×）：1瓶（25ml）
6、酶结合物： 1瓶（6ml）
7、底物液A： 1瓶（3ml）
8、底物液B： 1瓶（3ml）
9、终止液： 1瓶（3ml）
10、塑封袋： 1个
11、封板膜： 3帖
12、说明书： 1份
标本收集：
1、最好使用新鲜血清样本，如需保存，可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。
2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。
操作步骤：
1、平衡：
将试剂盒冷藏环境中取出，置室温平衡30分钟后使用。
2、配液：
将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释备用。
3、设定：
留一孔作空白对照，暂不加任何液体。另设阴性对照3孔、阳性对照2孔，不加标本稀释液，直接加100μl对照血清。
4、加样：
在其他反应孔中各加标本稀释液100μl，按顺序各加入待检标本10μl，加样时吹打混匀则变色效果更佳。
5、温育：
在反应板上加盖封板膜，振荡混匀，置37℃温箱或水浴锅中，反应30分钟。
6、洗板：
弃去反应液，每孔加入稀释后的洗液300μl，浸泡15秒，甩弃洗液。连续洗板5次，最后拍干。
7、加酶：
每孔加入100μl酶结合物（空白对照孔不加）。
8、温育：
在反应板上加盖封板膜，置37℃温箱或水浴锅中，反应30分钟。
9、洗板：
洗板5次，同操作步骤6。
10、显色：
每孔依次加入底物A、B液各50μl（包括空白对照孔），加盖封板膜，振荡混匀，37℃避光显色15分钟。
11、终止：
每孔加入终止液各50μl（包括空白对照孔），振荡混匀终止反应。
12、测定：
用空白对照孔调零，并尽快用酶标仪单波长450nm测定各孔OD值。
结果判定：
1、临界值（cut-off值）计算：
临界值=0.10+阴性对照OD平均值（阴性对照OD平均值≤0.05按0.05计算）。
2、结果判定：
测定标本OD值≥临界值时为抗心肌-IgG抗体阳性。
测定标本OD值< 临界值时为抗心肌-IgG抗体阴性。
注意事项：
1、检测标本尽量避免反复冻融、溶血或长菌，否则可能影响检测结果。
2、不同批号、不同品种试剂不能混用；封板膜不能重复使用。
3、各种试剂使用前要混匀；部分溶液（如洗液等）如有结晶析出，轻微加热或摇匀溶解后不影响使用。
4、请严格按说明书操作，严格控制反应时间和反应温度，各种反应液尽量用加液器加注，并经常校对其准确性。
5、反应板开封后不能一次用完时，将剩余板条和干燥剂同时放入塑料袋内封好，置2-8℃可短期保存。
6、所有标本、废液、阳性对照等均按传染性污染物处理（对照血清已进行灭活处理），121℃高压蒸汽灭菌30分钟或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。
临床意义：
许多心脏疾病和免疫有关。当细菌感染，部分心肌变性、坏死、长期冠状动脉痉挛时，患者血中常出现抗心肌抗体（AMA）。 阳性见于风湿热、心肌手术后，局部缺血性心脏病、心肌梗塞等。
SOP文件 | 抗结核杆菌抗体(胶体金法)操作规程及临床意义
目的：用于人血清中结核杆菌抗体的定性筛查检测范围：检验科免疫实验室责任人：免疫实验室专业组长和实验室工作人员检测原理：结核分枝杆菌抗体（IgG）检测试剂盒（胶体金法）应用间接固相免疫层析技术。当测试样本从样本孔向上迁移时，固定在膜上的结核抗原会与试验样本（血清、血浆或全血）中的特异性抗体形成抗原-抗体复合物。这种复合物再与标记有相应二抗的胶体金结合，形成肉眼可见的紫红色条带。质控线上的蛋白A也同时与金标二抗结合作为样本正确加入的标记。标本收集：1、最好使用新鲜血清样本，如需保存，可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。操作方法：1、检测前，将试剂盒平衡至室温。2、自包装封口处剪开一侧，打开密封袋。3、在试验反应板上标明样本名称。4、加样方孔内加样25µl。5、样本开始向上迁移，直至样本前沿到达兰色指示线。加3滴缓冲液至圆孔内。6、拉出标有“TB”字样的标签直至感到阻力。加入1滴缓冲液于加样方孔，开始标记，15分钟时读结果。结果判断与分析：1、如果在测试线处（T）和质控线处（C）出现色条带，则结核分枝杆菌抗体阳性。不同颜色深度的条带无论任何密度均被认作阳性。2、如果视窗内仅位置（C）显示质控线，则结核分枝杆菌抗体为阴性。3、如果质控线处（C）未显示条带，则结果无效。此时，应使用新的试验反应板重新检测。注意事项：1、仅供体外诊断用，在有效期内使用。2、处理标本时，不能用嘴吸，不能吃食物或吸烟。3、处理标本时，戴手套，处理结束后洗手。4、所有标本应当作有传染性来处理，按正确操作步骤处理标本和使用检测卡。5、为防止交叉污染，仅使用干净的一次性吸头吸标本。6、用消毒剂清理溅出的标本。临床意义：结核分枝杆菌是引起结核的病原菌，能引起多种组织器官感染，其中以肺结核最为多见。结核分枝杆菌是一种细胞内寄生菌，进入机体后可以诱导产生抗感染的细胞免疫，也可产生抗结核分枝杆菌的抗体反应，后者对机体无保护作用。结核的诊断有赖于影像学检查和细菌学检查，抗结核分枝杆菌抗体测定对结核的诊断价值不大。
目的:
规范抗心肌抗体的检测的操作
范围：
检验科免疫实验室
责任人:
免疫实验室专业组长和实验室工作人员
基本原理：
本试剂盒采用基因工程表达的高纯度、高活性心肌特异性抗原包被酶联板，辣根过氧化物（HRP）标记的鼠抗人IgG（抗r链）单克隆抗体为示踪物，TMB显色系统，间接ELISA方法检测人血清或血浆中的抗心肌IgG抗体。本试剂盒具有灵敏度高,特异性强，操作简单，加样变色。反应快速，反应模式及重复性好等优点。适用于病毒型心肌炎、心肌梗塞后综合症等的诊断。
试剂盒组成：
1、预包被板： 48孔
2、标本稀释液： 1瓶（6ml）
3、阴性对照： 1瓶（0.5ml）
4、阳性对照： 1瓶（0.5ml）
5、浓缩洗液（20×）：1瓶（25ml）
6、酶结合物： 1瓶（6ml）
7、底物液A： 1瓶（3ml）
8、底物液B： 1瓶（3ml）
9、终止液： 1瓶（3ml）
10、塑封袋： 1个
11、封板膜： 3帖
12、说明书： 1份
标本收集：
1、最好使用新鲜血清样本，如需保存，可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。
2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。
操作步骤：
1、平衡：
将试剂盒冷藏环境中取出，置室温平衡30分钟后使用。
2、配液：
将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释备用。
3、设定：
留一孔作空白对照，暂不加任何液体。另设阴性对照3孔、阳性对照2孔，不加标本稀释液，直接加100μl对照血清。
4、加样：
在其他反应孔中各加标本稀释液100μl，按顺序各加入待检标本10μl，加样时吹打混匀则变色效果更佳。
5、温育：
在反应板上加盖封板膜，振荡混匀，置37℃温箱或水浴锅中，反应30分钟。
6、洗板：
弃去反应液，每孔加入稀释后的洗液300μl，浸泡15秒，甩弃洗液。连续洗板5次，最后拍干。
7、加酶：
每孔加入100μl酶结合物（空白对照孔不加）。
8、温育：
在反应板上加盖封板膜，置37℃温箱或水浴锅中，反应30分钟。
9、洗板：
洗板5次，同操作步骤6。
10、显色：
每孔依次加入底物A、B液各50μl（包括空白对照孔），加盖封板膜，振荡混匀，37℃避光显色15分钟。
11、终止：
每孔加入终止液各50μl（包括空白对照孔），振荡混匀终止反应。
12、测定：
用空白对照孔调零，并尽快用酶标仪单波长450nm测定各孔OD值。
结果判定：
1、临界值（cut-off值）计算：
临界值=0.10+阴性对照OD平均值（阴性对照OD平均值≤0.05按0.05计算）。
2、结果判定：
测定标本OD值≥临界值时为抗心肌-IgG抗体阳性。
测定标本OD值< 临界值时为抗心肌-IgG抗体阴性。
注意事项：
1、检测标本尽量避免反复冻融、溶血或长菌，否则可能影响检测结果。
2、不同批号、不同品种试剂不能混用；封板膜不能重复使用。
3、各种试剂使用前要混匀；部分溶液（如洗液等）如有结晶析出，轻微加热或摇匀溶解后不影响使用。
4、请严格按说明书操作，严格控制反应时间和反应温度，各种反应液尽量用加液器加注，并经常校对其准确性。
5、反应板开封后不能一次用完时，将剩余板条和干燥剂同时放入塑料袋内封好，置2-8℃可短期保存。
6、所有标本、废液、阳性对照等均按传染性污染物处理（对照血清已进行灭活处理），121℃高压蒸汽灭菌30分钟或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。
临床意义：
许多心脏疾病和免疫有关。当细菌感染，部分心肌变性、坏死、长期冠状动脉痉挛时，患者血中常出现抗心肌抗体（AMA）。 阳性见于风湿热、心肌手术后，局部缺血性心脏病、心肌梗塞等。
SOP文件 | 抗结核杆菌抗体(胶体金法)操作规程及临床意义
目的：用于人血清中结核杆菌抗体的定性筛查检测范围：检验科免疫实验室责任人：免疫实验室专业组长和实验室工作人员检测原理：结核分枝杆菌抗体（IgG）检测试剂盒（胶体金法）应用间接固相免疫层析技术。当测试样本从样本孔向上迁移时，固定在膜上的结核抗原会与试验样本（血清、血浆或全血）中的特异性抗体形成抗原-抗体复合物。这种复合物再与标记有相应二抗的胶体金结合，形成肉眼可见的紫红色条带。质控线上的蛋白A也同时与金标二抗结合作为样本正确加入的标记。标本收集：1、最好使用新鲜血清样本，如需保存，可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。操作方法：1、检测前，将试剂盒平衡至室温。2、自包装封口处剪开一侧，打开密封袋。3、在试验反应板上标明样本名称。4、加样方孔内加样25µl。5、样本开始向上迁移，直至样本前沿到达兰色指示线。加3滴缓冲液至圆孔内。6、拉出标有“TB”字样的标签直至感到阻力。加入1滴缓冲液于加样方孔，开始标记，15分钟时读结果。结果判断与分析：1、如果在测试线处（T）和质控线处（C）出现色条带，则结核分枝杆菌抗体阳性。不同颜色深度的条带无论任何密度均被认作阳性。2、如果视窗内仅位置（C）显示质控线，则结核分枝杆菌抗体为阴性。3、如果质控线处（C）未显示条带，则结果无效。此时，应使用新的试验反应板重新检测。注意事项：1、仅供体外诊断用，在有效期内使用。2、处理标本时，不能用嘴吸，不能吃食物或吸烟。3、处理标本时，戴手套，处理结束后洗手。4、所有标本应当作有传染性来处理，按正确操作步骤处理标本和使用检测卡。5、为防止交叉污染，仅使用干净的一次性吸头吸标本。6、用消毒剂清理溅出的标本。临床意义：结核分枝杆菌是引起结核的病原菌，能引起多种组织器官感染，其中以肺结核最为多见。结核分枝杆菌是一种细胞内寄生菌，进入机体后可以诱导产生抗感染的细胞免疫，也可产生抗结核分枝杆菌的抗体反应，后者对机体无保护作用。结核的诊断有赖于影像学检查和细菌学检查，抗结核分枝杆菌抗体测定对结核的诊断价值不大。
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