《他其实没那么喜欢你》人间清醒的爱情电影

爱情大概是这个世界上最让人琢磨不透的存在。

这部电影献给每个在爱情里迷茫的女孩儿。

大概所有女生在最初追逐爱情的时候，都像影片中的女生们一样，因为一个男生不回你消息而日思夜想。

因为表白被拒而伤心欲绝。

喜欢一个人迟迟等不到回应。

对方对你展露一丝暧昧的气息，就足够让你神魂颠倒。

有时候会分不清楚理想与现实中的爱情。

付出真心却发现自己爱错了人。

最后深陷其中，才发现——他其实没那么喜欢你？

在经历了一段又一段的失败爱情后，看到别人如此幸福美满，于是陷入自我怀疑。是不是我不够好，不配拥有爱情？

其实有时候并不是你不好，而是对方太渣。

在很多人的眼里，爱情就像是一场游戏。他们的游戏规则是——付出真心的人会输的很惨。因此，他们把玩弄别人的感情当做成就。

请不要让自己的真心被这样的人玷污。

就像影片中的女性们一样，或是如愿以偿寻找到了真爱；或是从一段糟糕的感情里脱身，选择重新开始。

但无论如何，要始终在爱情里保持清醒。

不要总是以身边的人为例，认为自己或许会是他的例外？其实，他不爱你已经很明显了，只是你自己不愿接受，依然沉浸在自己想象之中的爱情里。

（不得不说影片中的一些台词都是人间清醒的至理名言。）

额额额怎么说呢
从早上涂唇膏时被我掰断了 从早上上厕所发现来姨妈开始 就注定这是不平凡的一天 但幸好去考试的路上没有很晕车 幸好痛经没有发作 幸好带了一杯热水 但是这还是无法避免 我是最后一个抽题 第一个进考场 我前面是一位声音很洪亮的男士 后面是和我题目一模一样的女生 最最失败的是我讲课超时了 进门没有来得及问好 最后差点忘记擦黑板，，，
但我觉得整堂课还是挺从容的 我一点都不紧张 只是有时候忘记下面的思路 于是展开的过程过长 总之 也算是一次教训 下次改正
但我也希望能过过过，好想感受一下一次过的感觉，是不是特别爽。
忙完面试，马上又进入课程最忙碌的时候了，明天休息下，继续战斗吧！

一 、模板质量问题：

1）模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以泡个电泳看看提取的DNA，PCR阳性样品与阴性样品是否有明显差别。如果确定是这种问题，可以增加模板量试试，但不一定行得通。2）模板里面残留某种试剂成份，可能抑制Taq聚合酶的活性，如果是这种情况，可以用试剂盒把模板再纯化一下，或将模板做个梯度稀释以确定最佳的模板量。3） 为什么跑电泳会出现拖带呢？1. 有可能的因为你的电压调的太高了。电泳跟很多因素有关，其中就有一个是电压，在适当的电压范围内增加是可以加快迁移速率，但是要是超到一个临界值反而有害。你可以适当的调低点看看。2.有时候发现上样量太多的话会有拖带。你看能否回收之后 ，按1:50 或1:100 等稀释后，再当成模板扩一次怎么样。

二 、引物问题

1）样品自身的基因型差异导致扩增失败。也就是说你的引物与某些基因型的样品结合的好，而和另一些基因型结合不好。可以换一对更保守的引物试试。祝顺利！2）普通PCR所用的一对引物中有一个引物加多了，为正常的三倍只要引物特异性比较好，那么不会产生大的影响。如果恰巧是加多的这条引物不是很特异的话，也许会扩出来非特异带。在制备单链探针时候就采取这样的不对称pcr，没关系的三Taq酶处于失活状态。因为活性降低了能出现二聚体。

三、Taq酶处于失活状态。

因为活性降低了能出现二聚体。

四、模板浓度过低。

五、退火温度过高。

有可能，可以做个梯度PCR试一下。

六、循环次数过少或延伸时间过短以致目的基因扩增量不够。

这个可能性不大。

七、dNTP浓度低时PCR产率及特异性均增高，适合于用扩增掺入法标记生物素及放射性元素。

当100μl PCR液中含dNTP各40μmol/L时就足以合成2.6μg的DNA（dNTP消耗一半）,所以,你不小心多加了4倍的量,会很影响PCR结果,即Taq酶活力要降低20～30%，即底物抑制。

八、PCR产物电泳

1.电泳图不清晰，可能电泳缓冲液和制胶缓冲液浓度不准或者脏了吧。换新的电泳缓冲液和制胶缓冲液试试。marker都出问题说明是你的胶的问题，或者电泳操作的问题。2. PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。

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