#悟显法师[超话]##不能着相#
以前我们还没出家的时候，有些比我们早学佛的，他就等于是老修带后学，就说：哎呀！我告诉你，哪边有个出家人多有修、多有修，穿得少、吃得少，甚至有时候不吃的……。可是一去看，没有佛法啊，都是外道法，都在这个色身上做活计，我们就不亲近，所以要有正知正见。
佛在经上讲，他说第六天的魔王，都能示现三十二相、八十种好，现种种神通，所以你不能著相，要看他里面讲的是不是佛法。
就有一次，在一个村庄，就出现了一个人，长得跟佛一模一样的，也三十二相八十种好，大家都对他恭敬礼拜，那么有一个出家人，他就去跟他谈，谈说佛法。那这出家人证阿罗汉果了，他知道这个人妖魔鬼怪示现的，对于诸法实相是完全不明了。
这个证果的出家人说：你这出家相，我也是恭敬你，我给你顶礼。这个魔王就现身了，他说：不行，我要是让你这个阿罗汉拜了，那我岂不完蛋了？所以那时候有圣者在，有大阿罗汉在，你这妖魔鬼怪你要来作乱，你装得跟佛一样，人家有慧眼可以识得。
但是现代的人，你给他弄一点神通，吹捧一下，有个名气，叫个什么活佛，取了一个藏人的名字，叫做什么活佛，你就可以出来骗吃骗喝了，所以不能著相。
这里讲的“唯有世尊能开示。”所以佛法，我们能信能受，除了自己善根以外，还有就是佛力加持，讲的人如此，听的人也是如此。
所以你在道场，特别是在我们精舍，你听经你会觉得你听得特别清楚，听得更容易了解，这个是事实，为什么？佛力加持，所以唯有世尊能开示。
就像我们讲经，有时候没上讲台，看经文，有些地方理解还没那么透彻，一上了讲台，佛力加持的关系，不懂的地方能懂、懂的地方能深入。这就是佛力加持，为什么？如法说，佛力加持；你们如法听，佛力加持，听经都能消业障，所以这里讲唯有世尊能开示。
那么回到净土宗来看，净宗的这个法门，唯佛乃能说，所以你看《阿弥陀经》世尊无问自说，叫着舍利弗，一开始“尔时。佛告长者舍利弗。从是西方过十万亿佛土。有世界名曰极乐。”这是佛无问自说，“唯有世尊能开示”。
『释迦牟尼佛涅槃日⎜不能著相』https://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzU2MjAwMjI4Mw==&mid=2247526687&idx=1&sn=3b2fdef57be6a1241058db799e35c339&chksm=fdc23187f7727d6a803527ac99f135e04a4f6003283b9a3c2f549995810d72a277a5ef591c53&xtrack=1&scene=0&subscene=274&sessionid=1711404342&clicktime=1711405012&enterid=1711405012&ascene=7&fasttmpl_type=0&fasttmpl_fullversion=7133993-zh_CN-zip&fasttmpl_flag=0&realreporttime=1711405012897&devicetype=android-31&version=28003036&nettype=WIFI&abtest_cookie=AAACAA%3D%3D&lang=zh_CN&session_us=gh_49548e92a2ed&countrycode=CN&exportkey=n_ChQIAhIQOWt8sD9fbXiufhzfj5edQBLrAQIE97dBBAEAAAAAAPb8NCMg4vwAAAAOpnltbLcz9gKNyK89dVj02DP8Gk%2Fh4P4B%2F541lH4lGCw5cCR0ochdtS6yEpWjDeLrAnyjqzPn2PCA%2B1saAmpKMuE7%2BDihocebAsiL4w4S1S5CKCdKQIaVzurrS%2B9cw0c799aC6rZxqQAA44XRaOfPiWI9vp6Y%2FrvBMU%2Fk1QYp96YaNNCcz2IE%2F0V2nG%2FEN2usEqWZWGvfzLeTtiD4X5EPE1y2%2FgYtxBGo9VKFBtmV2SG%2FMzPjugWV4b3mq4gf%2B0aXHFmzdx%2FGw%2BpxHx7MTT8wo%2BWd0Zs%3D&pass_ticket=DGaiSFiYKdMg3I6I5BCHSvleL20iMqn7VER5nbrBPsmaYv9tke42PzuPQwPqe%2B6vf1NtmSEHDhsK94C7I7aoAQ%3D%3D&wx_header=3
#学佛一定要听经[超话]##大乘定香精舍[超话]##一乘了义[超话]##菩萨戒正说[超话]##楞严经白话直解##无量寿经[超话]##妙法莲华经今解##华严[超话]#
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围绕主角《金熙蒋萧羽》金熙 蒋萧羽 展开，这本书又名《金熙蒋萧羽》金熙 蒋萧羽
《金熙蒋萧羽》金熙 蒋萧羽 。
《顾韵初陆森》顾韵初 陆森
《容雾江筎笙》容雾 江筎笙
《蒋南乔霍劭廷》蒋南乔 霍劭廷
《林玉初秦清野》林玉初 秦清野
《花楹周战尧》花楹 周战尧
《秦知喻霍平津》秦知喻 霍平津
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《楚卿慕渊尘》楚卿 慕渊尘 慕渊风
《苏汐靳北琛》苏汐 靳北琛
《桑岁洛挽尘》桑岁 洛挽尘 洛挽风
《黎呦呦霍南城》黎呦呦 霍南城
《江芷澜傅斯漓》江芷澜 傅斯漓
《宋倾颜傅近》宋倾颜 傅近
《萧紫宁杨福安》萧紫宁 杨福安
《颜潇沈卿尘》颜潇 沈卿尘
《姜也霍行止》姜也 霍行止
《楚烟慕砚尘》楚烟 慕砚尘 慕砚风
《黎安念沈忘州》黎安念 沈忘州
《许知欢齐远琛》许知欢 齐远琛
《薛知夏傅平生》薛知夏 傅平生
《姜时宜谢景晏》姜时宜 谢景晏
《夏念汐傅隐寒》夏念汐傅隐寒
《沈芷曦宋勉》沈芷曦 宋勉
《宋佩瑜闻若弦》宋佩瑜 闻若弦
《程檀儿傅沉玉》程檀儿 傅沉玉
《姜黛顾宴森》姜黛 顾宴森
《姜洛顾珩》姜洛 顾珩
《宁蕊商辞》宁蕊 商辞
《沈小嫣楚征》沈小嫣 楚征
《宋颖贞霍政远》宋颖贞 霍政远
《邱苓烟程言锋》邱苓烟 程言锋
《慕琳傅渊尘》慕琳 傅渊尘 傅渊风
《阮软周司寒乔烟》阮软周司寒乔烟
《虞小柳魏祉》虞小柳 魏祉
《桑枝盛淮南》桑枝 盛淮南
《岑桑霍砚》岑桑 霍砚
《胡婷美陆瀚湳》胡婷美 陆瀚湳
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《姜万宁谢无念》姜万宁 谢无念
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《南初陆之律》南初 陆之律
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《潇冉冉顾今年》潇冉冉 顾今年
《陶颜英傅宁浩》陶颜英 傅宁浩
《唐怀雁陶煊洛》唐怀雁 陶煊洛
《齐夏禧陆明哲》齐夏禧 陆明哲
《孟秋云许云洲》孟秋云 许云洲
《潇冉冉顾今年》潇冉冉 顾今年
《佟时穗萧缜之》佟时穗 萧缜之
《南初陆之律》南初 陆之律
《唐芸妍傅慕修》唐芸妍 傅慕修
《闻语澜元清野》闻语澜 元清野
《沈星洛周随》沈星洛 周随
《沈鹿柠贺京川》沈鹿柠 贺京川
《姜钰媚周厌》姜钰媚 周厌
《周枕月商辞昼》周枕月 商辞昼
《方时媚周焰》方时媚 周焰
《谢瑶光季景之》谢瑶光 季景之
《许未央迟北穆》许未央 迟北穆
《慕瑶傅砚尘傅砚风》慕瑶 傅砚尘
《乐婉清姜景曜》乐婉清姜景曜
先帝创业未半而中道崩殂，今天下三分，益州疲弊，此诚危急存亡之秋也。然侍卫之臣不懈于内，忠志之士忘身于外者，盖追先帝之殊遇，欲报之于陛下也。诚宜开张圣听，以光先帝遗德，恢弘志士之气，不宜妄自菲薄，引喻失义，以塞忠谏之路也。
宫中府中，俱为一体；陟罚臧否，不宜异同。若有作奸犯科及为忠善者，宜付有司论其刑赏，以昭陛下平明之理，不宜偏私，使内外异法也。
侍中、侍郎郭攸之、费祎、董允等，此皆良实，志虑忠纯，是以先帝简拔以遗陛下。愚以为宫中之事，事无大小，悉以咨之，然后施行，必能裨补阙漏，有所广益。
永和九年，岁在癸丑，暮春之初，会于会稽山阴之兰亭，修禊事也。群贤毕至，少长咸集。此地有崇山峻岭，茂林修竹，又有清流激湍，映带左右，引以为流觞曲水，列坐其次。虽无丝竹管弦之盛，一觞一咏，亦足以畅叙幽情。
是日也，天朗气清，惠风和畅。仰观宇宙之大，俯察品类之盛，所以游目骋怀，足以极视听之娱，信可乐也。
夫人之相与，俯仰一世。或取诸怀抱，悟言一室之内；或因寄所托，放浪形骸之外。虽趣舍万殊，静躁不同，当其欣于所遇，暂得于己，快然自足，不知老之将至；及其所之既倦，情随事迁，感慨系之矣。向之所欣，俯仰之间，已为陈迹，犹不能不以之兴怀，况修短随化，终期于尽！古人云：“死生亦大矣。”岂不痛哉！
每览昔人兴感之由，若合一契，未尝不临文嗟悼，不能喻之于怀。固知一死生为虚诞，齐彭殇为妄作。后之视今，亦犹今之视昔，悲夫！故列叙时人，录其所述，虽世殊事异，所以兴怀，其致一也。后之览者，亦将有感于斯文。
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MiR-29c-3p和MiR-223-3p通过靶向ANGPTL4调控口腔鳞状细胞癌的增殖和耐药性
背景：本研究旨在确定血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）中的表达和功能，并探究miR-29C-3p和miR-223-3p是否可以通过靶向ANGPTL4调控OSCC的增殖和顺铂耐药性。
方法：首先在生物信息学数据库中预测肿瘤中ANGPTL4和microRNAs（miRNAs）的表达，随后通过Western blot和qPCR检测组织和细胞中ANGPTL4和miRNA的蛋白质、mRNA表达水平。通过平板克隆形成、CCK-8实验和IC50确定细胞的增殖和药物敏感性，并使用双荧光素酶报告实验来确定miRNA对ANGPTL4的调控。
结果：ANGPTL4在OSCC组织中较正常组织表达高。敲除ANGPTL4后，OSCC细胞增殖减少，对顺铂的敏感性增加。双荧光素酶报告实验显示，当过表达miR-29c-3p和miR-223-3p后，野生型（wild-type, WT）组的荧光强度减少，而突变型（mutant, MUT）组的荧光强度几乎没有变化。上述结果证明了miRNA的过表达降低了ANGPTL4的蛋白水平，从而影响OSCC细胞增殖和耐药性。
结论：miR-29c-3p和miR-223-3p可以通过靶向ANGPTL4来调控OSCC的细胞增殖和顺铂耐药性。
关键词：口腔鳞状细胞癌（OSCC）；微小RNA（microRNA, miRNA）；血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）；增殖；顺铂耐药性。
·前言
口腔癌（Oral cancer）是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，占全球所有恶性肿瘤的1%～2%[1]。因为口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinom, OSCC）易于转移且预后不良，5年总生存率仅为55%[2]。顺铂（Cisplatin）是OSCC术后化疗的一线药物[3]，但OSCC对顺铂化疗的耐药性日益严重[4]。如何有效提高术后化疗的药物敏感性，是OSCC研究中的一个热点和难题。
近期研究表明血管生成样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）可能参与OSCC的发生，并与OSCC的转移相关[5]，同时ANGPTL4也可能是舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma ，TSCC）的重要标志物以及防止TSCC发展和转移的重要治疗靶点[6]。
本课题组前期研究表明，ANGPTL4的下调可以抑制TSCC的迁移和增殖，且ANGPTL4的高表达与TSCC的T分期、淋巴结转移、血管生成和较差的总生存期相关[7]。ANGPTL4基因位于19p131染色体上，包含7个外显子和6个内含子。目前认为，ANGPTL4家族的主要功能是参与物质和能量代谢的调节，但近期许多研究已证实，ANGPTL4在肿瘤进展中也起着重要的调控作用。此外，仍有研究表明ANGPTL4在肝癌和其他癌症中发挥抑癌作用[8]。ANGPTL4可能作为抑癌基因和致癌基因发挥双重功能，但其调节机制仍不清楚。因此，ANGPTL4在OSCC中的作用值得进一步探索。
微小RNA（MicroRNAs, miRNAs）是长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们参与调节转录后基因表达。许多研究已经证明，miRNA的异常表达可以参与头颈鳞状细胞癌（head and neck squamous carcinoma, HNSC）及其他癌症的发生、发展[9]。miRNA可以调节目标基因的表达水平，诱导mRNA降解或抑制蛋白翻译。在本研究中，探索了ANGPTL4在OSCC中的表达水平及其变化的影响，验证miRNA对ANGPTL4的靶向调控，并确定miRNA对ANGPTL4的靶向调控是否对OSCC的增殖和耐药性存在影响。本研究将对OSCC的诊断、治疗以及预后预测提供一定的参考作用。按照MDAR报告清单呈现以下文章。（可在https://t.cn/A6YN3H95获取）
·方法
组织收集
本研究符合赫尔辛基宣言（Declaration of Helsinki, 2013年修订版）。该研究已得到中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会的批准（No. SYSEC-KY-KS-2021-028）。从中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科获取了36对来自口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者的肿瘤组织（tumor tissues , T）和癌旁组织（paracancerous tissues, P）。所有患者均为原发OSCC，未接受过术前放疗或化疗。所有样本均存储在-80℃下备用。所有患者均已签署知情同意书。使用了癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA）数据库来分析头颈鳞状细胞癌（HNSC）和正常组织中ANGPTL4的表达。
细胞培养和处理
购买了来自中国科学院（上海，中国）的HOK、SCC9、UM1、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞系，并使用上述细胞开展实验。所有细胞系均培养于含10％胎牛血清（FBS）（Thermo Fisher，美国）和1％青霉素-链霉素溶液（Thermo Fisher，美国）的DMEM（Thermo Fisher，美国）或DMEM-F12（Thermo Fisher，美国）所配完全培养基，温度37℃，含有5％CO2的细胞培养箱中。其中HOK、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞培养使用DMEM，SCC9和UM1细胞培养使用F12/DMEM。
RNA提取和定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）
总RNA使用TRIzol试剂（TaKaRa，日本）提取，按照制造商说明，使用ABI 9700实时PCR仪（ABI，美国）反转录为cDNA。MicroRNA反转录引物按照茎环法[10]设计。1 µL的cDNA与TB Green® Premix Ex Taq™ II (#RR820B, TaKaRa, Japan）按照制造商的说明，在20 µL反应体积下混合。在Light Cycler 480 II实时PCR系统（Roche，瑞士）中测定mRNA的相对表达，使用统计软件进行统计分析。反应条件如下：94℃ 2 min，94℃ 20秒，58℃ 20秒，72℃ 20秒，共40循环，所有反应均重复3次。根据GAPDH和U6的表达进行标准化后，使用2−ΔΔCt方法计算ANGPTL4和microRNA的相对表达水平。如表S1所示，所有PCR引物均从IGEBIO（广州，中国）购买。
Western blot检测
为提取蛋白，将细胞用预冷PBS洗涤2次，刮取收集细胞，然后在含有1%蛋白酶抑制剂（#CW2200S，CWBIO，中国）的裂解缓冲液（#01408，Beyotime，中国）中裂解。离心后，收集上清液，使用BCA蛋白定量试剂盒（#CW0014S，CWBIO，中国）确定蛋白浓度。稀释并混合上样缓冲液（#CW0027S，CWBIO，中国），并在95℃加热5 min使蛋白变性。按照Beyotime聚丙烯酰胺凝胶试剂盒的说明准备SDS-PAGE凝胶。电泳后（90 V，1.3 h），将蛋白转移到PVDF膜（#P0021S，Beyotime，中国）（250 mA，70 min）。将PVDF膜在含有5％脱脂牛奶和0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中孵育1 h，以封闭蛋白。将一抗ANGPTL4 (#18374-1-AP, Proteintech, USA）和GAPDH (60004-1-Ig, Proteintech, USA）在含有0.1％ Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白抗体稀释液中溶解，稀释比例为1:1000，然后在4℃摇床中孵育16 h（过夜孵育）。将膜在含有0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中洗涤。然后在含有0.1％Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白中，以1:1,000的稀释比例孵育二抗，包括山羊抗小鼠IgG-HRP (#sc-2005, Santa Cruz Biotechnology, USA）和山羊抗兔IgG-HRP (#sc-2004, Santa Cruz Biotechnology, USA)1 h。根据标准流程进行显色，拍照和凝胶图像分析。
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MiR-29c-3p和MiR-223-3p通过靶向ANGPTL4调控口腔鳞状细胞癌的增殖和耐药性
背景：本研究旨在确定血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）中的表达和功能，并探究miR-29C-3p和miR-223-3p是否可以通过靶向ANGPTL4调控OSCC的增殖和顺铂耐药性。
方法：首先在生物信息学数据库中预测肿瘤中ANGPTL4和microRNAs（miRNAs）的表达，随后通过Western blot和qPCR检测组织和细胞中ANGPTL4和miRNA的蛋白质、mRNA表达水平。通过平板克隆形成、CCK-8实验和IC50确定细胞的增殖和药物敏感性，并使用双荧光素酶报告实验来确定miRNA对ANGPTL4的调控。
结果：ANGPTL4在OSCC组织中较正常组织表达高。敲除ANGPTL4后，OSCC细胞增殖减少，对顺铂的敏感性增加。双荧光素酶报告实验显示，当过表达miR-29c-3p和miR-223-3p后，野生型（wild-type, WT）组的荧光强度减少，而突变型（mutant, MUT）组的荧光强度几乎没有变化。上述结果证明了miRNA的过表达降低了ANGPTL4的蛋白水平，从而影响OSCC细胞增殖和耐药性。
结论：miR-29c-3p和miR-223-3p可以通过靶向ANGPTL4来调控OSCC的细胞增殖和顺铂耐药性。
关键词：口腔鳞状细胞癌（OSCC）；微小RNA（microRNA, miRNA）；血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）；增殖；顺铂耐药性。
·前言
口腔癌（Oral cancer）是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，占全球所有恶性肿瘤的1%～2%[1]。因为口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinom, OSCC）易于转移且预后不良，5年总生存率仅为55%[2]。顺铂（Cisplatin）是OSCC术后化疗的一线药物[3]，但OSCC对顺铂化疗的耐药性日益严重[4]。如何有效提高术后化疗的药物敏感性，是OSCC研究中的一个热点和难题。
近期研究表明血管生成样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）可能参与OSCC的发生，并与OSCC的转移相关[5]，同时ANGPTL4也可能是舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma ，TSCC）的重要标志物以及防止TSCC发展和转移的重要治疗靶点[6]。
本课题组前期研究表明，ANGPTL4的下调可以抑制TSCC的迁移和增殖，且ANGPTL4的高表达与TSCC的T分期、淋巴结转移、血管生成和较差的总生存期相关[7]。ANGPTL4基因位于19p131染色体上，包含7个外显子和6个内含子。目前认为，ANGPTL4家族的主要功能是参与物质和能量代谢的调节，但近期许多研究已证实，ANGPTL4在肿瘤进展中也起着重要的调控作用。此外，仍有研究表明ANGPTL4在肝癌和其他癌症中发挥抑癌作用[8]。ANGPTL4可能作为抑癌基因和致癌基因发挥双重功能，但其调节机制仍不清楚。因此，ANGPTL4在OSCC中的作用值得进一步探索。
微小RNA（MicroRNAs, miRNAs）是长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们参与调节转录后基因表达。许多研究已经证明，miRNA的异常表达可以参与头颈鳞状细胞癌（head and neck squamous carcinoma, HNSC）及其他癌症的发生、发展[9]。miRNA可以调节目标基因的表达水平，诱导mRNA降解或抑制蛋白翻译。在本研究中，探索了ANGPTL4在OSCC中的表达水平及其变化的影响，验证miRNA对ANGPTL4的靶向调控，并确定miRNA对ANGPTL4的靶向调控是否对OSCC的增殖和耐药性存在影响。本研究将对OSCC的诊断、治疗以及预后预测提供一定的参考作用。按照MDAR报告清单呈现以下文章。（可在https://t.cn/A6YN3H95获取）
·方法
组织收集
本研究符合赫尔辛基宣言（Declaration of Helsinki, 2013年修订版）。该研究已得到中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会的批准（No. SYSEC-KY-KS-2021-028）。从中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科获取了36对来自口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者的肿瘤组织（tumor tissues , T）和癌旁组织（paracancerous tissues, P）。所有患者均为原发OSCC，未接受过术前放疗或化疗。所有样本均存储在-80℃下备用。所有患者均已签署知情同意书。使用了癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA）数据库来分析头颈鳞状细胞癌（HNSC）和正常组织中ANGPTL4的表达。
细胞培养和处理
购买了来自中国科学院（上海，中国）的HOK、SCC9、UM1、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞系，并使用上述细胞开展实验。所有细胞系均培养于含10％胎牛血清（FBS）（Thermo Fisher，美国）和1％青霉素-链霉素溶液（Thermo Fisher，美国）的DMEM（Thermo Fisher，美国）或DMEM-F12（Thermo Fisher，美国）所配完全培养基，温度37℃，含有5％CO2的细胞培养箱中。其中HOK、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞培养使用DMEM，SCC9和UM1细胞培养使用F12/DMEM。
RNA提取和定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）
总RNA使用TRIzol试剂（TaKaRa，日本）提取，按照制造商说明，使用ABI 9700实时PCR仪（ABI，美国）反转录为cDNA。MicroRNA反转录引物按照茎环法[10]设计。1 µL的cDNA与TB Green® Premix Ex Taq™ II (#RR820B, TaKaRa, Japan）按照制造商的说明，在20 µL反应体积下混合。在Light Cycler 480 II实时PCR系统（Roche，瑞士）中测定mRNA的相对表达，使用统计软件进行统计分析。反应条件如下：94℃ 2 min，94℃ 20秒，58℃ 20秒，72℃ 20秒，共40循环，所有反应均重复3次。根据GAPDH和U6的表达进行标准化后，使用2−ΔΔCt方法计算ANGPTL4和microRNA的相对表达水平。如表S1所示，所有PCR引物均从IGEBIO（广州，中国）购买。
Western blot检测
为提取蛋白，将细胞用预冷PBS洗涤2次，刮取收集细胞，然后在含有1%蛋白酶抑制剂（#CW2200S，CWBIO，中国）的裂解缓冲液（#01408，Beyotime，中国）中裂解。离心后，收集上清液，使用BCA蛋白定量试剂盒（#CW0014S，CWBIO，中国）确定蛋白浓度。稀释并混合上样缓冲液（#CW0027S，CWBIO，中国），并在95℃加热5 min使蛋白变性。按照Beyotime聚丙烯酰胺凝胶试剂盒的说明准备SDS-PAGE凝胶。电泳后（90 V，1.3 h），将蛋白转移到PVDF膜（#P0021S，Beyotime，中国）（250 mA，70 min）。将PVDF膜在含有5％脱脂牛奶和0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中孵育1 h，以封闭蛋白。将一抗ANGPTL4 (#18374-1-AP, Proteintech, USA）和GAPDH (60004-1-Ig, Proteintech, USA）在含有0.1％ Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白抗体稀释液中溶解，稀释比例为1:1000，然后在4℃摇床中孵育16 h（过夜孵育）。将膜在含有0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中洗涤。然后在含有0.1％Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白中，以1:1,000的稀释比例孵育二抗，包括山羊抗小鼠IgG-HRP (#sc-2005, Santa Cruz Biotechnology, USA）和山羊抗兔IgG-HRP (#sc-2004, Santa Cruz Biotechnology, USA)1 h。根据标准流程进行显色，拍照和凝胶图像分析。
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