一周小结#小狗日记#
回学校的前一天早上我妈就开始催我整理行李 然后一直拖到晚上7点才开始懒猪一个 然后侥幸地以为我妈最后会帮我收拾的 于是心安理得的玩了2小时手机 然后10点意识到这次真的得我自己来了只能开始搞我的行李箱了
到学校以后我明明记得我的卡是握在手里的!!!我清楚地记得我下车还不小心把卡扔到车在垃圾箱里然后捡起来了!到了寝室楼下发现卡不见了。。。。。我妈说在北门刷卡的时候落下了我死也不信(我发誓我真的记得我拿了!)然后一个电话过来说我的卡就在北门??????绝对是平行世界
不是UNNC你都已经开学了还问我准备好了没你什么居心
不是真的有必要吗 开学第一天就去了宝龙吃蚝翅[允悲][允悲][允悲]宁诺的第五食堂真的不是吹的 又是酒吧。。。。最后成功又充值了commune的月卡 酒鬼没跑了 第一次喝到眩晕了 于是暗暗立下了一个月只喝一次的誓言 真的能实现吗?可是不喝的话我都充了月卡了
好好好三个说要减肥的女人在开学第二天的中午人手一杯霸王茶姬还吃披萨。。。。。。够了
新的ocsb老师是徐光群(外国版+韩美容(外国版 第一节课啥也没讲讲了一堆鸡汤。。。。。我都能背下来了“one hour is one golden coin” 可是老师,,,,,,中国学生真的有逆反心理 你越这么讲我越内个
晚上三个女的看了电影,还行吧,老钟这个zz环境我也不要求什么了 晚上吃了海底捞 本来是要吃蟹肉煲的来不及了 海底捞吃了还不能拍照晒pyq好委屈 为了瞒着一个不知道怎么评价的man,what can I say
出均分了,上80了,也算完成了我的目标,希望下学期可以有85 可以吗 我真的可以吗 我可以做到的吧 我一定可以
两个美女为了在周三陪另一个美女联谊(打台球 都化了美美的妆 虽然结局有点失望 但是友谊万岁
然后晚上安利她们看了惊魔2 可是感觉另外两位美女不喜欢看 算啦没关系 反正明天太阳都会照常升起不是吗
星期四。。。。。又疯狂了 我发誓以后我一个月只会疯狂一次好吗还有张亮 真的好多油
周五vij总算把teams弄好了然后我们三个就像傻子一样玩teams然后打开了视频通话
周五晚上上完班会cw回家了 然后就和来了美美合照(真的很少有合照我们俩 提前溜出劳伦斯回寝的路上遇见了一个外国帅哥(但其实今天又碰见了感觉也就还好吧 送走cw以后又陪去劳伦斯找眼镜原来不在老师那一排在下面一排 回来路过体育馆我很兴奋我说进去找那个外国帅哥要微信结果没有找到 但是‼️遇见了!!!!在打排球 哈哈哈这还是开学以来第一次遇见我的前crush(因为现在回归追星女喜欢我的老公们了
周六在寝室待了一天(真的没出门 只下楼拿了一次外卖 11点起床看文献看了1h就受不了了 就算全部翻译成中文我也不懂啊然后看看电视剧(看了一集就弃了 玩玩手机 最后打开橙光了套橙真的无敌 我一直在看一直没停 看到忘记时间 一抬头发现11:30了 在看知否也忘我了 然后我俩一致取消了周日早上的健身房计划 继续看了(整段垮掉。。。。。
今天早上起来困的像一万年没睡觉 但是还是在10:30爬起来收拾了一下去了tsg 效率还行学到4:30才回寝室 看完两篇文献
不得不说和ls的缘分在放下ls之后姗姗来迟了 周五班会ls坐后面 周六中午小灶台坐隔桌 命运就是这么神奇
cw说放下纯原了 然后寒假找了一个嬛嬛聊的很好 结果正当要和纯原彻底结束的那天嬛嬛发病找我聊天。。。。。。。言语间让cw觉得嬛嬛和纯原没有区别(这点我觉得不对因为这俩sb的点不一样 然后和纯原的“分手饭”就变成了“和好饭” 两个人不间断聊了5个小时 直接把我和看傻了决定以后再也不管cw和纯原之间的事了
第一周就这么drama的结束了
回学校的前一天早上我妈就开始催我整理行李 然后一直拖到晚上7点才开始懒猪一个 然后侥幸地以为我妈最后会帮我收拾的 于是心安理得的玩了2小时手机 然后10点意识到这次真的得我自己来了只能开始搞我的行李箱了
到学校以后我明明记得我的卡是握在手里的!!!我清楚地记得我下车还不小心把卡扔到车在垃圾箱里然后捡起来了!到了寝室楼下发现卡不见了。。。。。我妈说在北门刷卡的时候落下了我死也不信(我发誓我真的记得我拿了!)然后一个电话过来说我的卡就在北门??????绝对是平行世界
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好好好三个说要减肥的女人在开学第二天的中午人手一杯霸王茶姬还吃披萨。。。。。。够了
新的ocsb老师是徐光群(外国版+韩美容(外国版 第一节课啥也没讲讲了一堆鸡汤。。。。。我都能背下来了“one hour is one golden coin” 可是老师,,,,,,中国学生真的有逆反心理 你越这么讲我越内个
晚上三个女的看了电影,还行吧,老钟这个zz环境我也不要求什么了 晚上吃了海底捞 本来是要吃蟹肉煲的来不及了 海底捞吃了还不能拍照晒pyq好委屈 为了瞒着一个不知道怎么评价的man,what can I say
出均分了,上80了,也算完成了我的目标,希望下学期可以有85 可以吗 我真的可以吗 我可以做到的吧 我一定可以
两个美女为了在周三陪另一个美女联谊(打台球 都化了美美的妆 虽然结局有点失望 但是友谊万岁
然后晚上安利她们看了惊魔2 可是感觉另外两位美女不喜欢看 算啦没关系 反正明天太阳都会照常升起不是吗
星期四。。。。。又疯狂了 我发誓以后我一个月只会疯狂一次好吗还有张亮 真的好多油
周五vij总算把teams弄好了然后我们三个就像傻子一样玩teams然后打开了视频通话
周五晚上上完班会cw回家了 然后就和来了美美合照(真的很少有合照我们俩 提前溜出劳伦斯回寝的路上遇见了一个外国帅哥(但其实今天又碰见了感觉也就还好吧 送走cw以后又陪去劳伦斯找眼镜原来不在老师那一排在下面一排 回来路过体育馆我很兴奋我说进去找那个外国帅哥要微信结果没有找到 但是‼️遇见了!!!!在打排球 哈哈哈这还是开学以来第一次遇见我的前crush(因为现在回归追星女喜欢我的老公们了
周六在寝室待了一天(真的没出门 只下楼拿了一次外卖 11点起床看文献看了1h就受不了了 就算全部翻译成中文我也不懂啊然后看看电视剧(看了一集就弃了 玩玩手机 最后打开橙光了套橙真的无敌 我一直在看一直没停 看到忘记时间 一抬头发现11:30了 在看知否也忘我了 然后我俩一致取消了周日早上的健身房计划 继续看了(整段垮掉。。。。。
今天早上起来困的像一万年没睡觉 但是还是在10:30爬起来收拾了一下去了tsg 效率还行学到4:30才回寝室 看完两篇文献
不得不说和ls的缘分在放下ls之后姗姗来迟了 周五班会ls坐后面 周六中午小灶台坐隔桌 命运就是这么神奇
cw说放下纯原了 然后寒假找了一个嬛嬛聊的很好 结果正当要和纯原彻底结束的那天嬛嬛发病找我聊天。。。。。。。言语间让cw觉得嬛嬛和纯原没有区别(这点我觉得不对因为这俩sb的点不一样 然后和纯原的“分手饭”就变成了“和好饭” 两个人不间断聊了5个小时 直接把我和看傻了决定以后再也不管cw和纯原之间的事了
第一周就这么drama的结束了
#AME资讯# https://t.cn/A6YN3H9q
MiR-29c-3p和MiR-223-3p通过靶向ANGPTL4调控口腔鳞状细胞癌的增殖和耐药性
背景:本研究旨在确定血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)中的表达和功能,并探究miR-29C-3p和miR-223-3p是否可以通过靶向ANGPTL4调控OSCC的增殖和顺铂耐药性。
方法:首先在生物信息学数据库中预测肿瘤中ANGPTL4和microRNAs(miRNAs)的表达,随后通过Western blot和qPCR检测组织和细胞中ANGPTL4和miRNA的蛋白质、mRNA表达水平。通过平板克隆形成、CCK-8实验和IC50确定细胞的增殖和药物敏感性,并使用双荧光素酶报告实验来确定miRNA对ANGPTL4的调控。
结果:ANGPTL4在OSCC组织中较正常组织表达高。敲除ANGPTL4后,OSCC细胞增殖减少,对顺铂的敏感性增加。双荧光素酶报告实验显示,当过表达miR-29c-3p和miR-223-3p后,野生型(wild-type, WT)组的荧光强度减少,而突变型(mutant, MUT)组的荧光强度几乎没有变化。上述结果证明了miRNA的过表达降低了ANGPTL4的蛋白水平,从而影响OSCC细胞增殖和耐药性。
结论:miR-29c-3p和miR-223-3p可以通过靶向ANGPTL4来调控OSCC的细胞增殖和顺铂耐药性。
关键词:口腔鳞状细胞癌(OSCC);微小RNA(microRNA, miRNA);血管生成素样蛋白4(ANGPTL4);增殖;顺铂耐药性。
·前言
口腔癌(Oral cancer)是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,占全球所有恶性肿瘤的1%~2%[1]。因为口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinom, OSCC)易于转移且预后不良,5年总生存率仅为55%[2]。顺铂(Cisplatin)是OSCC术后化疗的一线药物[3],但OSCC对顺铂化疗的耐药性日益严重[4]。如何有效提高术后化疗的药物敏感性,是OSCC研究中的一个热点和难题。
近期研究表明血管生成样蛋白4(angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4)可能参与OSCC的发生,并与OSCC的转移相关[5],同时ANGPTL4也可能是舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma ,TSCC)的重要标志物以及防止TSCC发展和转移的重要治疗靶点[6]。
本课题组前期研究表明,ANGPTL4的下调可以抑制TSCC的迁移和增殖,且ANGPTL4的高表达与TSCC的T分期、淋巴结转移、血管生成和较差的总生存期相关[7]。ANGPTL4基因位于19p131染色体上,包含7个外显子和6个内含子。目前认为,ANGPTL4家族的主要功能是参与物质和能量代谢的调节,但近期许多研究已证实,ANGPTL4在肿瘤进展中也起着重要的调控作用。此外,仍有研究表明ANGPTL4在肝癌和其他癌症中发挥抑癌作用[8]。ANGPTL4可能作为抑癌基因和致癌基因发挥双重功能,但其调节机制仍不清楚。因此,ANGPTL4在OSCC中的作用值得进一步探索。
微小RNA(MicroRNAs, miRNAs)是长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,它们参与调节转录后基因表达。许多研究已经证明,miRNA的异常表达可以参与头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous carcinoma, HNSC)及其他癌症的发生、发展[9]。miRNA可以调节目标基因的表达水平,诱导mRNA降解或抑制蛋白翻译。在本研究中,探索了ANGPTL4在OSCC中的表达水平及其变化的影响,验证miRNA对ANGPTL4的靶向调控,并确定miRNA对ANGPTL4的靶向调控是否对OSCC的增殖和耐药性存在影响。本研究将对OSCC的诊断、治疗以及预后预测提供一定的参考作用。按照MDAR报告清单呈现以下文章。(可在https://t.cn/A6YN3H95获取)
·方法
组织收集
本研究符合赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki, 2013年修订版)。该研究已得到中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会的批准(No. SYSEC-KY-KS-2021-028)。从中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科获取了36对来自口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者的肿瘤组织(tumor tissues , T)和癌旁组织(paracancerous tissues, P)。所有患者均为原发OSCC,未接受过术前放疗或化疗。所有样本均存储在-80℃下备用。所有患者均已签署知情同意书。使用了癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库来分析头颈鳞状细胞癌(HNSC)和正常组织中ANGPTL4的表达。
细胞培养和处理
购买了来自中国科学院(上海,中国)的HOK、SCC9、UM1、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞系,并使用上述细胞开展实验。所有细胞系均培养于含10%胎牛血清(FBS)(Thermo Fisher,美国)和1%青霉素-链霉素溶液(Thermo Fisher,美国)的DMEM(Thermo Fisher,美国)或DMEM-F12(Thermo Fisher,美国)所配完全培养基,温度37℃,含有5%CO2的细胞培养箱中。其中HOK、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞培养使用DMEM,SCC9和UM1细胞培养使用F12/DMEM。
RNA提取和定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)
总RNA使用TRIzol试剂(TaKaRa,日本)提取,按照制造商说明,使用ABI 9700实时PCR仪(ABI,美国)反转录为cDNA。MicroRNA反转录引物按照茎环法[10]设计。1 µL的cDNA与TB Green® Premix Ex Taq™ II (#RR820B, TaKaRa, Japan)按照制造商的说明,在20 µL反应体积下混合。在Light Cycler 480 II实时PCR系统(Roche,瑞士)中测定mRNA的相对表达,使用统计软件进行统计分析。反应条件如下:94℃ 2 min,94℃ 20秒,58℃ 20秒,72℃ 20秒,共40循环,所有反应均重复3次。根据GAPDH和U6的表达进行标准化后,使用2−ΔΔCt方法计算ANGPTL4和microRNA的相对表达水平。如表S1所示,所有PCR引物均从IGEBIO(广州,中国)购买。
Western blot检测
为提取蛋白,将细胞用预冷PBS洗涤2次,刮取收集细胞,然后在含有1%蛋白酶抑制剂(#CW2200S,CWBIO,中国)的裂解缓冲液(#01408,Beyotime,中国)中裂解。离心后,收集上清液,使用BCA蛋白定量试剂盒(#CW0014S,CWBIO,中国)确定蛋白浓度。稀释并混合上样缓冲液(#CW0027S,CWBIO,中国),并在95℃加热5 min使蛋白变性。按照Beyotime聚丙烯酰胺凝胶试剂盒的说明准备SDS-PAGE凝胶。电泳后(90 V,1.3 h),将蛋白转移到PVDF膜(#P0021S,Beyotime,中国)(250 mA,70 min)。将PVDF膜在含有5%脱脂牛奶和0.1% Tween-20的TRIS缓冲盐水中孵育1 h,以封闭蛋白。将一抗ANGPTL4 (#18374-1-AP, Proteintech, USA)和GAPDH (60004-1-Ig, Proteintech, USA)在含有0.1% Tween-20 Tris缓冲盐水的5%牛血清白蛋白抗体稀释液中溶解,稀释比例为1:1000,然后在4℃摇床中孵育16 h(过夜孵育)。将膜在含有0.1% Tween-20的TRIS缓冲盐水中洗涤。然后在含有0.1%Tween-20 Tris缓冲盐水的5%牛血清白蛋白中,以1:1,000的稀释比例孵育二抗,包括山羊抗小鼠IgG-HRP (#sc-2005, Santa Cruz Biotechnology, USA)和山羊抗兔IgG-HRP (#sc-2004, Santa Cruz Biotechnology, USA)1 h。根据标准流程进行显色,拍照和凝胶图像分析。
更多方法请点击微信链接查看!
MiR-29c-3p和MiR-223-3p通过靶向ANGPTL4调控口腔鳞状细胞癌的增殖和耐药性
背景:本研究旨在确定血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)中的表达和功能,并探究miR-29C-3p和miR-223-3p是否可以通过靶向ANGPTL4调控OSCC的增殖和顺铂耐药性。
方法:首先在生物信息学数据库中预测肿瘤中ANGPTL4和microRNAs(miRNAs)的表达,随后通过Western blot和qPCR检测组织和细胞中ANGPTL4和miRNA的蛋白质、mRNA表达水平。通过平板克隆形成、CCK-8实验和IC50确定细胞的增殖和药物敏感性,并使用双荧光素酶报告实验来确定miRNA对ANGPTL4的调控。
结果:ANGPTL4在OSCC组织中较正常组织表达高。敲除ANGPTL4后,OSCC细胞增殖减少,对顺铂的敏感性增加。双荧光素酶报告实验显示,当过表达miR-29c-3p和miR-223-3p后,野生型(wild-type, WT)组的荧光强度减少,而突变型(mutant, MUT)组的荧光强度几乎没有变化。上述结果证明了miRNA的过表达降低了ANGPTL4的蛋白水平,从而影响OSCC细胞增殖和耐药性。
结论:miR-29c-3p和miR-223-3p可以通过靶向ANGPTL4来调控OSCC的细胞增殖和顺铂耐药性。
关键词:口腔鳞状细胞癌(OSCC);微小RNA(microRNA, miRNA);血管生成素样蛋白4(ANGPTL4);增殖;顺铂耐药性。
·前言
口腔癌(Oral cancer)是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,占全球所有恶性肿瘤的1%~2%[1]。因为口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinom, OSCC)易于转移且预后不良,5年总生存率仅为55%[2]。顺铂(Cisplatin)是OSCC术后化疗的一线药物[3],但OSCC对顺铂化疗的耐药性日益严重[4]。如何有效提高术后化疗的药物敏感性,是OSCC研究中的一个热点和难题。
近期研究表明血管生成样蛋白4(angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4)可能参与OSCC的发生,并与OSCC的转移相关[5],同时ANGPTL4也可能是舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma ,TSCC)的重要标志物以及防止TSCC发展和转移的重要治疗靶点[6]。
本课题组前期研究表明,ANGPTL4的下调可以抑制TSCC的迁移和增殖,且ANGPTL4的高表达与TSCC的T分期、淋巴结转移、血管生成和较差的总生存期相关[7]。ANGPTL4基因位于19p131染色体上,包含7个外显子和6个内含子。目前认为,ANGPTL4家族的主要功能是参与物质和能量代谢的调节,但近期许多研究已证实,ANGPTL4在肿瘤进展中也起着重要的调控作用。此外,仍有研究表明ANGPTL4在肝癌和其他癌症中发挥抑癌作用[8]。ANGPTL4可能作为抑癌基因和致癌基因发挥双重功能,但其调节机制仍不清楚。因此,ANGPTL4在OSCC中的作用值得进一步探索。
微小RNA(MicroRNAs, miRNAs)是长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,它们参与调节转录后基因表达。许多研究已经证明,miRNA的异常表达可以参与头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous carcinoma, HNSC)及其他癌症的发生、发展[9]。miRNA可以调节目标基因的表达水平,诱导mRNA降解或抑制蛋白翻译。在本研究中,探索了ANGPTL4在OSCC中的表达水平及其变化的影响,验证miRNA对ANGPTL4的靶向调控,并确定miRNA对ANGPTL4的靶向调控是否对OSCC的增殖和耐药性存在影响。本研究将对OSCC的诊断、治疗以及预后预测提供一定的参考作用。按照MDAR报告清单呈现以下文章。(可在https://t.cn/A6YN3H95获取)
·方法
组织收集
本研究符合赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki, 2013年修订版)。该研究已得到中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会的批准(No. SYSEC-KY-KS-2021-028)。从中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科获取了36对来自口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者的肿瘤组织(tumor tissues , T)和癌旁组织(paracancerous tissues, P)。所有患者均为原发OSCC,未接受过术前放疗或化疗。所有样本均存储在-80℃下备用。所有患者均已签署知情同意书。使用了癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库来分析头颈鳞状细胞癌(HNSC)和正常组织中ANGPTL4的表达。
细胞培养和处理
购买了来自中国科学院(上海,中国)的HOK、SCC9、UM1、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞系,并使用上述细胞开展实验。所有细胞系均培养于含10%胎牛血清(FBS)(Thermo Fisher,美国)和1%青霉素-链霉素溶液(Thermo Fisher,美国)的DMEM(Thermo Fisher,美国)或DMEM-F12(Thermo Fisher,美国)所配完全培养基,温度37℃,含有5%CO2的细胞培养箱中。其中HOK、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞培养使用DMEM,SCC9和UM1细胞培养使用F12/DMEM。
RNA提取和定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)
总RNA使用TRIzol试剂(TaKaRa,日本)提取,按照制造商说明,使用ABI 9700实时PCR仪(ABI,美国)反转录为cDNA。MicroRNA反转录引物按照茎环法[10]设计。1 µL的cDNA与TB Green® Premix Ex Taq™ II (#RR820B, TaKaRa, Japan)按照制造商的说明,在20 µL反应体积下混合。在Light Cycler 480 II实时PCR系统(Roche,瑞士)中测定mRNA的相对表达,使用统计软件进行统计分析。反应条件如下:94℃ 2 min,94℃ 20秒,58℃ 20秒,72℃ 20秒,共40循环,所有反应均重复3次。根据GAPDH和U6的表达进行标准化后,使用2−ΔΔCt方法计算ANGPTL4和microRNA的相对表达水平。如表S1所示,所有PCR引物均从IGEBIO(广州,中国)购买。
Western blot检测
为提取蛋白,将细胞用预冷PBS洗涤2次,刮取收集细胞,然后在含有1%蛋白酶抑制剂(#CW2200S,CWBIO,中国)的裂解缓冲液(#01408,Beyotime,中国)中裂解。离心后,收集上清液,使用BCA蛋白定量试剂盒(#CW0014S,CWBIO,中国)确定蛋白浓度。稀释并混合上样缓冲液(#CW0027S,CWBIO,中国),并在95℃加热5 min使蛋白变性。按照Beyotime聚丙烯酰胺凝胶试剂盒的说明准备SDS-PAGE凝胶。电泳后(90 V,1.3 h),将蛋白转移到PVDF膜(#P0021S,Beyotime,中国)(250 mA,70 min)。将PVDF膜在含有5%脱脂牛奶和0.1% Tween-20的TRIS缓冲盐水中孵育1 h,以封闭蛋白。将一抗ANGPTL4 (#18374-1-AP, Proteintech, USA)和GAPDH (60004-1-Ig, Proteintech, USA)在含有0.1% Tween-20 Tris缓冲盐水的5%牛血清白蛋白抗体稀释液中溶解,稀释比例为1:1000,然后在4℃摇床中孵育16 h(过夜孵育)。将膜在含有0.1% Tween-20的TRIS缓冲盐水中洗涤。然后在含有0.1%Tween-20 Tris缓冲盐水的5%牛血清白蛋白中,以1:1,000的稀释比例孵育二抗,包括山羊抗小鼠IgG-HRP (#sc-2005, Santa Cruz Biotechnology, USA)和山羊抗兔IgG-HRP (#sc-2004, Santa Cruz Biotechnology, USA)1 h。根据标准流程进行显色,拍照和凝胶图像分析。
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#留子日常#
红灯笼真的太有年味了
下午去了cw药房 居然可以刷微信和支付宝
另外真的啥水乳都不用带 东西太齐了只想往回买
原来汉堡王在澳洲叫hungry jack’s 又涨知识了
因为害怕和外国人沟通所以选择自助下单 结果刷不了卡只能去柜台买 我真的要好好提高口语了[开学季]
16的汉堡王套餐是我从阿德下飞机以后吃的第一顿正餐了 没想到在西安飞广州的路上是我吃的最好的一顿 明天就去亚超大买特买狠狠买!!!!!
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