中华人民共和国轻工行业标准
QB/T 5715-2022
发酵液中衣康酸的测定 高效液相色谱法
Determination of itaconic acid in fermentation liquor-High performance liquid chromatography method
（转载自：https://t.cn/A6ls5Oaj）
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中国轻工业联合会提出。
本文件由全国食品工业标准化技术委员会（SAC/TC 64） 归口。
本文件起草单位：安徽省食品药品检验研究院、青岛琅琊台集团股份有限公司、中国生物发酵产业协会、山东省食品发酵工业研究院、山东寿光巨能金玉米开发有限公司、武汉远大弘元股份有限公司、天津科技大学。
本文件主要起草人：李建军、何俊、李悦明、冯志合、田延军、李静、徐建春、吴泽华、李霞、王晋、张居舟、张文文、程坚、张成林。
本文件为首次发布。
1范围
本文件描述了发酵液中衣康酸的高效液相色谱测定方法。
本文件适用于衣康酸发酵液中衣康酸的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
第一法 高效液相色谱紫外检测器法
4方法提要
试样中的衣康酸经甲醇溶液提取或直接稀释，经强阴离子固相萃取柱净化，利用反相液相色谱柱分离，用紫外检测器检测，外标法定量。
5试剂和材料
水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 甲醇：色谱纯。
5. 1.2 磷酸：优级纯。
5.2试剂配制
5.2.1 甲醇溶液（1+1，体积比）：量取250mL甲醇（5.1.1）至500 mL容量瓶，用水定容，混匀。
5.2.2 2%磷酸甲醇溶液：量取2mL磷酸（5.1.2）至100mL容量瓶，用甲醇（5.1.1）定容，混匀。
5.2.3 0.1%磷酸溶液：准确吸取1 mL磷酸（5.1.2），转移入1 000 mL容量瓶，用水定容，混匀。
5.2.4 0.1%磷酸甲醇溶液 （87+13，体积比）：量取0.1%磷酸溶液（5.2.3） 870mL至1 000 mL容量瓶，用甲醇（5.1.1）定容，混匀。
5.3标准品
衣康酸标准品（CAS： 97-65-4，CH6O4）：纯度不小于99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.4标准溶液配制
提示：在衣康酸配制时注意安全防护。
5.4.1衣康酸标准储备液（2.0 mg/mL）：精密称取20 mg （精确至0.1 mg）的衣康酸标准品（5.3），用甲醇（5.1.1）溶解并定容至10 mL，此溶液衣康酸含量为2.0 mg/mL，于4℃下保存，有效期6个月。
5.4.2 衣康酸标准工作液：分别量取适量衣康酸标准储备液（5.4.1），用0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）配制成5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的标准工作液，于4℃保存，现配现用。
5.5材料
5.5.1 强阴离子固相萃取小柱（SAX）：1 000 mg/6mL，或相当者，使用前依次用4mL甲醇（5.1.1）、4mL水、4mL甲醇溶液（5.2.1） 活化。
5.5.2 0.45 um滤膜，有机系。
6仪器和设备
6.1高效液相色谱仪： 配紫外检测器。
6.2 电子天平：感量0.1 mg和0.01 g。
6.3涡旋振荡器。
6.4氮吹仪。
6.5固相萃取装置。
6.6离心机：转速不低于6 000 r/min.
6.7其他实验室常用仪器。
7分析步骤
7.1试液制备
量取500 mL发酵液搅匀，取适量体积经6 000 r/min离心5 min，称取上清液1.0g（精确至0.01 g）于100 mL容量瓶（可根据实际样品中衣康酸的含量，增加或减少称样量），用甲醇溶液（5.2.1）溶解并定容。
7.2 净化
移取1.00 mL上述溶解液（7.1）转移至预先活化的SAX固相萃取柱（5.5.1），控制流速约0.5 mL/min，弃去流出液，用1mL甲醇水溶液（5.2.1） 淋洗，再用2%磷酸甲醇溶液（5.2.2）4mL洗脱，收集洗脱液于氮吹管中，50℃下氮气缓缓吹至近干，用0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.45μm滤膜（5.5.2） 过滤，供高效液相色谱仪分析。
如果样品基质对衣康酸的准确定性和定量没有干扰，可省略7.2，将定容液经0.45μm滤膜（5.5.2）过滤后直接进行液相色谱分析。
7.3 标准曲线的制作
将配制的标准工/作液，按浓度由低到高的顺序经液相色谱仪测定，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标作图，绘制标准曲线。
7.4仪器参考条件
液相色谱参考条件如下
色谱柱： C18（250×4.6 mm，5μm）或具有同等性能的色谱柱：
b）流动相：0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）；
c）流速：0.8mL/min；
d）柱温：45℃；
e）检测波长210 nm；
f）进样量：5 μL。
7.5 测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，测得相应的峰面积，由标准曲线得到试样溶中衣康酸的浓度。在上述色谱条件下，标准溶液和试样溶液的高效液相色谱图见附录A图A.1。
7.6 空白试验
除不加试样外，采用完全相同的步骤进行平行操作。
8分析结果的表述
试样中衣康酸的含量按公式（1）计算
image.png
式中：
X——试样中衣康酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；
c——由标准曲线求得试样溶液中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
c0——由标准曲线水得空白试验中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL） ；
m——试样质量单位为克（g）；
f——稀释倍数（若不改变称样量，则为100）；
1 000——换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。
9灵敏度
若取1.0 g样品测定，衣康酸的检出限为0.50 gkg.
10精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术中均值的10%。
第二法 高效液相色谱 示差折光检测器法
11方法提要
试样中的衣康酸经甲醇溶液提取或直接稀释，经强阴离子固相萃取柱净化，利用反相液相色谱柱分离，用示差折光检测器检测，外标法定量。
12试剂和材料
12.1试剂
同5.1。
12.2试剂配制
同5.2。
12.3标准品
同5.3。
12.4标准溶液配制
12.4. 1衣康酸标准储备液
同5.4.1。
12.4.2衣康酸标准工作液
分别量取适量衣康酸标准储备波（12.4.1），用0.1%磷酸甲醇溶浪（5.2.4）配制成0.05 mg/mL、
0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL标准工作波，于4℃保存，现配现用。
12.5 材料
12.5.1强阴离子固相萃取小柱（SAX）：同5.5。
12.5.2 0.45μm滤膜，有机系。
13 仪器和设备
高效液相色谱仪：配示差折光检测器。
其他同6。
14分析步骤
14.1试液制备
同7.1。
14.2 净化
14.2.1同7.2。
14.2.2如果样品基质对衣康酸的准确定性和定量没有干扰，可省略14.2，将定容液经0.45μm滤膜（5.5.2）过滤后直接进行液相色谱分析。
14.3标准曲线的制作
同7.3。
14.4仪器参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C18 （250×4.6mm，5μm）或具有同等性能的色谱柱；
b）流动相：0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）；
c）流速：0.8 mL/min；
d）柱温：45℃；
e）进样量：10μL；
f）示差 折光检测器检测池温度：45℃。
14.5 测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，测得相应的峰面积，由标准曲线得到试样溶液中衣康酸的浓度。在上述色谱条件下，标准溶液和试样溶液的高效液相色谱图见附录A图A.2。
14.6 空白试验
同7.6。
15分析结 果的表述
试样中衣康酸的含量按公式（2）计算：
image.png
式中：
X——试样中衣康酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；
c——由标准曲线求得试样溶液中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）；
c0——由标准曲线求得空白试验中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）；
V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m——试样质量，单位为克（g）；
f——稀释倍数（若不改变称样量，则为100）；
1000——换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。
16灵敏度
若取1.0g样品测定，衣康酸的检出限为5.0 g/kg。
17 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
QB/T 5715-2022
发酵液中衣康酸的测定 高效液相色谱法
Determination of itaconic acid in fermentation liquor-High performance liquid chromatography method
（转载自：https://t.cn/A6ls5Oaj）
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中国轻工业联合会提出。
本文件由全国食品工业标准化技术委员会（SAC/TC 64） 归口。
本文件起草单位：安徽省食品药品检验研究院、青岛琅琊台集团股份有限公司、中国生物发酵产业协会、山东省食品发酵工业研究院、山东寿光巨能金玉米开发有限公司、武汉远大弘元股份有限公司、天津科技大学。
本文件主要起草人：李建军、何俊、李悦明、冯志合、田延军、李静、徐建春、吴泽华、李霞、王晋、张居舟、张文文、程坚、张成林。
本文件为首次发布。
1范围
本文件描述了发酵液中衣康酸的高效液相色谱测定方法。
本文件适用于衣康酸发酵液中衣康酸的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
第一法 高效液相色谱紫外检测器法
4方法提要
试样中的衣康酸经甲醇溶液提取或直接稀释，经强阴离子固相萃取柱净化，利用反相液相色谱柱分离，用紫外检测器检测，外标法定量。
5试剂和材料
水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 甲醇：色谱纯。
5. 1.2 磷酸：优级纯。
5.2试剂配制
5.2.1 甲醇溶液（1+1，体积比）：量取250mL甲醇（5.1.1）至500 mL容量瓶，用水定容，混匀。
5.2.2 2%磷酸甲醇溶液：量取2mL磷酸（5.1.2）至100mL容量瓶，用甲醇（5.1.1）定容，混匀。
5.2.3 0.1%磷酸溶液：准确吸取1 mL磷酸（5.1.2），转移入1 000 mL容量瓶，用水定容，混匀。
5.2.4 0.1%磷酸甲醇溶液 （87+13，体积比）：量取0.1%磷酸溶液（5.2.3） 870mL至1 000 mL容量瓶，用甲醇（5.1.1）定容，混匀。
5.3标准品
衣康酸标准品（CAS： 97-65-4，CH6O4）：纯度不小于99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.4标准溶液配制
提示：在衣康酸配制时注意安全防护。
5.4.1衣康酸标准储备液（2.0 mg/mL）：精密称取20 mg （精确至0.1 mg）的衣康酸标准品（5.3），用甲醇（5.1.1）溶解并定容至10 mL，此溶液衣康酸含量为2.0 mg/mL，于4℃下保存，有效期6个月。
5.4.2 衣康酸标准工作液：分别量取适量衣康酸标准储备液（5.4.1），用0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）配制成5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的标准工作液，于4℃保存，现配现用。
5.5材料
5.5.1 强阴离子固相萃取小柱（SAX）：1 000 mg/6mL，或相当者，使用前依次用4mL甲醇（5.1.1）、4mL水、4mL甲醇溶液（5.2.1） 活化。
5.5.2 0.45 um滤膜，有机系。
6仪器和设备
6.1高效液相色谱仪： 配紫外检测器。
6.2 电子天平：感量0.1 mg和0.01 g。
6.3涡旋振荡器。
6.4氮吹仪。
6.5固相萃取装置。
6.6离心机：转速不低于6 000 r/min.
6.7其他实验室常用仪器。
7分析步骤
7.1试液制备
量取500 mL发酵液搅匀，取适量体积经6 000 r/min离心5 min，称取上清液1.0g（精确至0.01 g）于100 mL容量瓶（可根据实际样品中衣康酸的含量，增加或减少称样量），用甲醇溶液（5.2.1）溶解并定容。
7.2 净化
移取1.00 mL上述溶解液（7.1）转移至预先活化的SAX固相萃取柱（5.5.1），控制流速约0.5 mL/min，弃去流出液，用1mL甲醇水溶液（5.2.1） 淋洗，再用2%磷酸甲醇溶液（5.2.2）4mL洗脱，收集洗脱液于氮吹管中，50℃下氮气缓缓吹至近干，用0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.45μm滤膜（5.5.2） 过滤，供高效液相色谱仪分析。
如果样品基质对衣康酸的准确定性和定量没有干扰，可省略7.2，将定容液经0.45μm滤膜（5.5.2）过滤后直接进行液相色谱分析。
7.3 标准曲线的制作
将配制的标准工/作液，按浓度由低到高的顺序经液相色谱仪测定，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标作图，绘制标准曲线。
7.4仪器参考条件
液相色谱参考条件如下
色谱柱： C18（250×4.6 mm，5μm）或具有同等性能的色谱柱：
b）流动相：0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）；
c）流速：0.8mL/min；
d）柱温：45℃；
e）检测波长210 nm；
f）进样量：5 μL。
7.5 测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，测得相应的峰面积，由标准曲线得到试样溶中衣康酸的浓度。在上述色谱条件下，标准溶液和试样溶液的高效液相色谱图见附录A图A.1。
7.6 空白试验
除不加试样外，采用完全相同的步骤进行平行操作。
8分析结果的表述
试样中衣康酸的含量按公式（1）计算
image.png
式中：
X——试样中衣康酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；
c——由标准曲线求得试样溶液中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
c0——由标准曲线水得空白试验中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL） ；
m——试样质量单位为克（g）；
f——稀释倍数（若不改变称样量，则为100）；
1 000——换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。
9灵敏度
若取1.0 g样品测定，衣康酸的检出限为0.50 gkg.
10精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术中均值的10%。
第二法 高效液相色谱 示差折光检测器法
11方法提要
试样中的衣康酸经甲醇溶液提取或直接稀释，经强阴离子固相萃取柱净化，利用反相液相色谱柱分离，用示差折光检测器检测，外标法定量。
12试剂和材料
12.1试剂
同5.1。
12.2试剂配制
同5.2。
12.3标准品
同5.3。
12.4标准溶液配制
12.4. 1衣康酸标准储备液
同5.4.1。
12.4.2衣康酸标准工作液
分别量取适量衣康酸标准储备波（12.4.1），用0.1%磷酸甲醇溶浪（5.2.4）配制成0.05 mg/mL、
0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL标准工作波，于4℃保存，现配现用。
12.5 材料
12.5.1强阴离子固相萃取小柱（SAX）：同5.5。
12.5.2 0.45μm滤膜，有机系。
13 仪器和设备
高效液相色谱仪：配示差折光检测器。
其他同6。
14分析步骤
14.1试液制备
同7.1。
14.2 净化
14.2.1同7.2。
14.2.2如果样品基质对衣康酸的准确定性和定量没有干扰，可省略14.2，将定容液经0.45μm滤膜（5.5.2）过滤后直接进行液相色谱分析。
14.3标准曲线的制作
同7.3。
14.4仪器参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C18 （250×4.6mm，5μm）或具有同等性能的色谱柱；
b）流动相：0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）；
c）流速：0.8 mL/min；
d）柱温：45℃；
e）进样量：10μL；
f）示差 折光检测器检测池温度：45℃。
14.5 测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，测得相应的峰面积，由标准曲线得到试样溶液中衣康酸的浓度。在上述色谱条件下，标准溶液和试样溶液的高效液相色谱图见附录A图A.2。
14.6 空白试验
同7.6。
15分析结 果的表述
试样中衣康酸的含量按公式（2）计算：
image.png
式中：
X——试样中衣康酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；
c——由标准曲线求得试样溶液中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）；
c0——由标准曲线求得空白试验中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）；
V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m——试样质量，单位为克（g）；
f——稀释倍数（若不改变称样量，则为100）；
1000——换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。
16灵敏度
若取1.0g样品测定，衣康酸的检出限为5.0 g/kg。
17 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
两鬓斑白，念卿如天崖
越来越喜欢夜晚，独处无眠，思念如潮水！相思月，故人魂，故事谁在听；月下，心心念，夜色，醉不沉。无以表白的深情，可寄于明月，从来诗书的疾首，不曾写到无忧。不用共处，灵魂本自孤独，一杯苦涩，一杯清欢。志合者，行当同道，不以山海为远。对你的牵挂便是我最好的存在。多少春秋风雨改，多少崎岖不变爱。远方的悸动，当下的笃定，离人的眼睛，枯叶落人影瘦，飞絮无尽头，风月又一年，拾不尽的遗憾，抹不尽的尘埃。流水岁月，凭添新纹。月有阴晴圆缺，人有生死相依！
#好好吃饭#
越来越喜欢夜晚，独处无眠，思念如潮水！相思月，故人魂，故事谁在听；月下，心心念，夜色，醉不沉。无以表白的深情，可寄于明月，从来诗书的疾首，不曾写到无忧。不用共处，灵魂本自孤独，一杯苦涩，一杯清欢。志合者，行当同道，不以山海为远。对你的牵挂便是我最好的存在。多少春秋风雨改，多少崎岖不变爱。远方的悸动，当下的笃定，离人的眼睛，枯叶落人影瘦，飞絮无尽头，风月又一年，拾不尽的遗憾，抹不尽的尘埃。流水岁月，凭添新纹。月有阴晴圆缺，人有生死相依！
#好好吃饭#
1月5日，主题为“2024 让客户更赚钱”的中国重汽2024年合作伙伴大会盛大开启。来自全国各地的经销商、合作伙伴、行业媒体等齐聚河北石家庄，与中国重汽共探高效运输时代新模式、新业态、新发展。
2023年，中国重汽积极顺应市场潮流，以科技创新赋能产品，引领商用车产品向更节能、更高效、更智能加速进化，为运输人提供最高效无忧的新时代智慧出行解决方案，持续领跑行业。作为中国重汽多年来的战略合作伙伴，汉德致力于为用户提供更快、更省、更优的一体化车桥系统方案。其中，中国重汽明星产品豪沃MAX搭载行业最轻的汉德运煤之星Q系列煤炭运输专用桥，轻松拿捏复杂工况，助力用户“多拉多赚”！
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搭载汉德公路之王H系列高效节油专用桥的中国重汽汕德卡G7S更是凭借极致高效性能成为用户口碑之选。
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01轻量化：行业最轻1.26t，较市场同类产品轻200kg以上；全系新型材料应用，重量可再降80kg/套；
02高可靠：结构全新设计，市场保有量超10万台，平均运营里程超30万公里；
03长免维护：主减免首保，12万/30万公里超长换油，轮边终生免维护，降低保养频次！较竞品每年综合盈利1.2-1.4万元！
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01高效率：驱动巡航工况效率高达98.8%，百公里节油1-1.5L；
02小速比：行业小速比2.056，大马力小速比，专为节油而来；
03长免维护：主减免首保，可选配30/60/80万公里超长换油，轮边终生免维护；较竞品每年综合盈利2.1-2.3万元！
被称为“城配轻卡黄金动力链”的这套王牌组合在会场也是赚足了眼球。搭载汉德260轻卡桥的中国重汽4x2绿通运输轻卡，助力用户踏上创富征程。
01轻量化：较竞品轻10%以上，满载运量更多，空载油耗更少；
02高效率：驱动巡航工况效率较竞品高2%以上，更省油；
03长免维护：免首保，主减12万/30万公里长免维护，轮端终生免维护！较竞品每10万公里综合盈利3220元。
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