中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 5481-2022
进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法 液相色谱-质谱/质谱法
Determination of Gentamycin in edible animal and feeds for import and export-LC-MS/MS
（转载自：https://t.cn/A6jv1n4W）
前言
本文件按照GB/T 1.1- 2020《标准化工作导则第1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国成都海关。
本文件主要起草人：于刚、谭志、李永丽、何开蓉、俞凌云、肖宇、林华、李丹丹。
1范围
本文件规定了食用动物、饲料中庆大霉素残留量的液相色谱质谱/质谱测定方法。
本文件适用于进出口工作中牛、猪、羊、鸡的血清，牛、猪、羊的尿液和猪饲料中庆大霉素的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件；仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 甲醇：色谱纯。
4.2乙腈：色谱纯。
4.3三氯乙酸：优级纯。
4.4七氟丁酸（Heptafluorobutyric acid，HFBA）：HPLC级。
4.5 甲酸：色谱纯。
4.6 标准物质：庆大霉素硫酸盐（C19H39N5O7·H2SO4），含量高于99.0%。
4.7 标准储备溶液：1.0 mg/mL。称取4.6所述标准物质适量，用水配成1.0 mg/mL的标准储备溶液于塑料容量瓶中，2℃~8℃保存。
4.8 标准工作溶液（10.0 μg/mL）：吸取4.7所述各标准储备溶液1 mL于100 mL塑料容量瓶中，用水定容至刻度，2℃~8℃保存。
4.9 三氯乙酸溶液（5%）：称取三氯乙酸10.0 g，用水200 mL，溶解（常温下保存2个月）。
4. 10 七氟丁酸（HFBA）水溶液（500 mmol/L）：准确量取12.8 mL七氟丁酸，用水稀释至200 mL（4℃避光保存，有效期1个月）。
4. 11 七氟丁酸（HFBA）水溶液（50 mmol/L）：准确量取4.10中七氟丁酸溶液10 mL，用水稀释至100 mL（4℃避光保存，有效期1个月）。
4.12 七氟丁酸（HFBA）水溶液（5 mmol/L）：准确量取4.11中七氟丁酸溶液10 mL，用水稀释至100 mL（4℃避光保存，有效期1个月）。
4.13七氟丁酸（ HFBA）水溶液（10 mmol/L）：准确量取50 mmol/L七氟丁酸溶液10 mL，用水稀释至100mL。
4.14 HLB固相萃取柱（60 mg/3 mL）。
4.15 0.22μm水相滤膜。
5仪器设备
5.1 液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源。
5.2 天平：感量分别为0.01 g和0.000 1 g。
5.3氮吹浓缩仪。
5.4 高速冷冻离心机（最高转速可达15 000 r/min）。
5.5 固相萃取装置。
6样品的采集与保存
6.1血样的采集
采集动物血样约10 mL，待自然凝固后分离血清，分装于聚四氟乙烯材质小管，加盖密封。
6.2 尿样的采集
采集动物尿样约10 mL，12 000 r/min离心10 min后，上清液分装于聚四氟乙烯材质小管，加盖密封。
6.3 饲料试样
采集饲料样品约500g。在实验室粉碎混匀，四分法至约20 g后分装于小塑料袋，密封。
6.4试样的保存
将分装后的血情、尿样于-20℃保存，饲料样品于4℃保存。
7测定步骤
7.1 提取
7.1.1血清和尿样试样
称取约2 g血清或尿样（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入3 mL三氯乙酸溶液（4.9）.涡旋振荡1 min，在4℃下10000 r/min离心5 min，取上清液置于15 mL离心管中。用2 mL三氯乙酸溶液重复提取1次，合并提取液，加2 mL七氟丁酸（HFBA）水溶液（4.11），混匀，备用。
7.1.2饲料试样
称取约2 g试样（精确至0.01 g），加入5 mL 三氯乙酸溶液（4.9），涡旋振荡3 min，在4℃下以10 000 r/min离心5 min，取上清液层置于15 mL塑料离心管中。用5 mL三氯乙酸溶液（4.9）重复提取1次，合并提取液，加2 mL七氟丁酸（HFBA）水溶液（4.11），混匀，备用。
7.2净化
固相萃取柱（HLB）（4.14）依次用甲醇、水、七氟丁酸（ HFBA）水溶液（4. 12）各3 mL活化，取备用液上柱，用水5 mL淋洗，甲醇3 mL洗脱，收集洗脱液于塑料离心管中，置于40℃水浴中轻微氮气流吹干，用七氟丁酸（HFBA）水溶液（4.12）1.0 mL溶解残渣，经0.22 μm滤膜过滤后，待测。
7.3基质工作曲线的配制
取空白试样（不含有庆大霉素的动物生物样品或饲料），按7.1和7.2进行提取净化，获得基质提取液。分别吸取适量标准工作溶液（4.8），依次加入相应试剂瓶中，用基质提取液定容至1.0 mL获得0.05 mg/L、0.2 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L和5.0 mg/L的系列基质标准工作溶液。
7.4测定条件
7.4.1液相色谱质谱参考条件
7.4. 1.1 色谱柱：C18，3μm，2.1×100 mm，或相当者。
7.4. 1.2流速：0.3 mL/min。
7.4.1.3 柱温箱温度：35℃。
7.4.1.4 进样量：5 μL。
7.4. 1.5 流动相：10 mmol/L HFBA水溶液（A）和乙腈（B）。梯度洗脱条件见表1。
image.png
7.4.1.6 离子源：电喷雾离子源。
7.4.1.7 扫描方式：正离子扫描。
7. 4. 1.8 检测方式：多反应监测。
7.4.1.9 电喷雾电压：5 500 V。
7.4.1.10 气帘气压力：20 psi。
7.4.1.11 辅肋气压力：GAS1.60 psi；GAS2.60 psi。
7.4.1.12 离子源温度：550℃。
7.4. 1.13 定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量，见表2。
image.png
7.4.2 测定
7.4.2.1定性测定
在相同试验条件下，样品溶液中的被测物的保留时间与基质标准工作溶液中被测物的保留时间比值，偏差在±2.5%之内。待测样品溶液中，被测物中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准工作溶液中被测物的各定性离子相对丰度的比值，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在庆大霉素。
image.png
7. 4.2.2 定量测定
在相同的仪器工作条件下，以基质标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标，以对应的标准溶液浓度（mg/L）为横坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，应使样品溶液中庆大霉素的响应值在仪器测定的线性范围内。在上述色谱和质谱条件下，庆大霉素（组分C1）的提取离于色谱图见附录A。
7.5空白试验
除不加试样溶液外，均按上述操作步骤进行。
8结果计算
庆大霉素的含量用色谱数据处理软件外标法计算或按式（1）计算：
image.png
式中：
X——试料中庆大霉素残留量，单位为亳克每千克（mg/kg）；
A——试样溶液中庆大霉素的峰面积；
Cs——标准工作液中庆大霉素的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——溶解残余物所得试样溶液体积，单位为亳升（mL）；
As——标准工作液中庆大霉素的峰面积；
W——样品质量，单位为克（g）。
9检测限、定量限、回收率和精密度
9.1 检测限和定量限
本方法对血清、尿样和猪饲料中庆大霉素的检测限为0.025 mg/kg，定量限为0.05 mg/kg。
9.2回收率和精密度
牛、猪、羊和鸡血清，牛、猪、羊尿液和猪饲料中庆大霉素类药物的添加回收率和精密度见附录B。
SN/T 5481-2022
进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法 液相色谱-质谱/质谱法
Determination of Gentamycin in edible animal and feeds for import and export-LC-MS/MS
（转载自：https://t.cn/A6jv1n4W）
前言
本文件按照GB/T 1.1- 2020《标准化工作导则第1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国成都海关。
本文件主要起草人：于刚、谭志、李永丽、何开蓉、俞凌云、肖宇、林华、李丹丹。
1范围
本文件规定了食用动物、饲料中庆大霉素残留量的液相色谱质谱/质谱测定方法。
本文件适用于进出口工作中牛、猪、羊、鸡的血清，牛、猪、羊的尿液和猪饲料中庆大霉素的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件；仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 甲醇：色谱纯。
4.2乙腈：色谱纯。
4.3三氯乙酸：优级纯。
4.4七氟丁酸（Heptafluorobutyric acid，HFBA）：HPLC级。
4.5 甲酸：色谱纯。
4.6 标准物质：庆大霉素硫酸盐（C19H39N5O7·H2SO4），含量高于99.0%。
4.7 标准储备溶液：1.0 mg/mL。称取4.6所述标准物质适量，用水配成1.0 mg/mL的标准储备溶液于塑料容量瓶中，2℃~8℃保存。
4.8 标准工作溶液（10.0 μg/mL）：吸取4.7所述各标准储备溶液1 mL于100 mL塑料容量瓶中，用水定容至刻度，2℃~8℃保存。
4.9 三氯乙酸溶液（5%）：称取三氯乙酸10.0 g，用水200 mL，溶解（常温下保存2个月）。
4. 10 七氟丁酸（HFBA）水溶液（500 mmol/L）：准确量取12.8 mL七氟丁酸，用水稀释至200 mL（4℃避光保存，有效期1个月）。
4. 11 七氟丁酸（HFBA）水溶液（50 mmol/L）：准确量取4.10中七氟丁酸溶液10 mL，用水稀释至100 mL（4℃避光保存，有效期1个月）。
4.12 七氟丁酸（HFBA）水溶液（5 mmol/L）：准确量取4.11中七氟丁酸溶液10 mL，用水稀释至100 mL（4℃避光保存，有效期1个月）。
4.13七氟丁酸（ HFBA）水溶液（10 mmol/L）：准确量取50 mmol/L七氟丁酸溶液10 mL，用水稀释至100mL。
4.14 HLB固相萃取柱（60 mg/3 mL）。
4.15 0.22μm水相滤膜。
5仪器设备
5.1 液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源。
5.2 天平：感量分别为0.01 g和0.000 1 g。
5.3氮吹浓缩仪。
5.4 高速冷冻离心机（最高转速可达15 000 r/min）。
5.5 固相萃取装置。
6样品的采集与保存
6.1血样的采集
采集动物血样约10 mL，待自然凝固后分离血清，分装于聚四氟乙烯材质小管，加盖密封。
6.2 尿样的采集
采集动物尿样约10 mL，12 000 r/min离心10 min后，上清液分装于聚四氟乙烯材质小管，加盖密封。
6.3 饲料试样
采集饲料样品约500g。在实验室粉碎混匀，四分法至约20 g后分装于小塑料袋，密封。
6.4试样的保存
将分装后的血情、尿样于-20℃保存，饲料样品于4℃保存。
7测定步骤
7.1 提取
7.1.1血清和尿样试样
称取约2 g血清或尿样（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入3 mL三氯乙酸溶液（4.9）.涡旋振荡1 min，在4℃下10000 r/min离心5 min，取上清液置于15 mL离心管中。用2 mL三氯乙酸溶液重复提取1次，合并提取液，加2 mL七氟丁酸（HFBA）水溶液（4.11），混匀，备用。
7.1.2饲料试样
称取约2 g试样（精确至0.01 g），加入5 mL 三氯乙酸溶液（4.9），涡旋振荡3 min，在4℃下以10 000 r/min离心5 min，取上清液层置于15 mL塑料离心管中。用5 mL三氯乙酸溶液（4.9）重复提取1次，合并提取液，加2 mL七氟丁酸（HFBA）水溶液（4.11），混匀，备用。
7.2净化
固相萃取柱（HLB）（4.14）依次用甲醇、水、七氟丁酸（ HFBA）水溶液（4. 12）各3 mL活化，取备用液上柱，用水5 mL淋洗，甲醇3 mL洗脱，收集洗脱液于塑料离心管中，置于40℃水浴中轻微氮气流吹干，用七氟丁酸（HFBA）水溶液（4.12）1.0 mL溶解残渣，经0.22 μm滤膜过滤后，待测。
7.3基质工作曲线的配制
取空白试样（不含有庆大霉素的动物生物样品或饲料），按7.1和7.2进行提取净化，获得基质提取液。分别吸取适量标准工作溶液（4.8），依次加入相应试剂瓶中，用基质提取液定容至1.0 mL获得0.05 mg/L、0.2 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L和5.0 mg/L的系列基质标准工作溶液。
7.4测定条件
7.4.1液相色谱质谱参考条件
7.4. 1.1 色谱柱：C18，3μm，2.1×100 mm，或相当者。
7.4. 1.2流速：0.3 mL/min。
7.4.1.3 柱温箱温度：35℃。
7.4.1.4 进样量：5 μL。
7.4. 1.5 流动相：10 mmol/L HFBA水溶液（A）和乙腈（B）。梯度洗脱条件见表1。
image.png
7.4.1.6 离子源：电喷雾离子源。
7.4.1.7 扫描方式：正离子扫描。
7. 4. 1.8 检测方式：多反应监测。
7.4.1.9 电喷雾电压：5 500 V。
7.4.1.10 气帘气压力：20 psi。
7.4.1.11 辅肋气压力：GAS1.60 psi；GAS2.60 psi。
7.4.1.12 离子源温度：550℃。
7.4. 1.13 定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量，见表2。
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7.4.2 测定
7.4.2.1定性测定
在相同试验条件下，样品溶液中的被测物的保留时间与基质标准工作溶液中被测物的保留时间比值，偏差在±2.5%之内。待测样品溶液中，被测物中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准工作溶液中被测物的各定性离子相对丰度的比值，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在庆大霉素。
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7. 4.2.2 定量测定
在相同的仪器工作条件下，以基质标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标，以对应的标准溶液浓度（mg/L）为横坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，应使样品溶液中庆大霉素的响应值在仪器测定的线性范围内。在上述色谱和质谱条件下，庆大霉素（组分C1）的提取离于色谱图见附录A。
7.5空白试验
除不加试样溶液外，均按上述操作步骤进行。
8结果计算
庆大霉素的含量用色谱数据处理软件外标法计算或按式（1）计算：
image.png
式中：
X——试料中庆大霉素残留量，单位为亳克每千克（mg/kg）；
A——试样溶液中庆大霉素的峰面积；
Cs——标准工作液中庆大霉素的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——溶解残余物所得试样溶液体积，单位为亳升（mL）；
As——标准工作液中庆大霉素的峰面积；
W——样品质量，单位为克（g）。
9检测限、定量限、回收率和精密度
9.1 检测限和定量限
本方法对血清、尿样和猪饲料中庆大霉素的检测限为0.025 mg/kg，定量限为0.05 mg/kg。
9.2回收率和精密度
牛、猪、羊和鸡血清，牛、猪、羊尿液和猪饲料中庆大霉素类药物的添加回收率和精密度见附录B。
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T 5715-2022
发酵液中衣康酸的测定 高效液相色谱法
Determination of itaconic acid in fermentation liquor-High performance liquid chromatography method
（转载自：https://t.cn/A6ls5Oaj）
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中国轻工业联合会提出。
本文件由全国食品工业标准化技术委员会（SAC/TC 64） 归口。
本文件起草单位：安徽省食品药品检验研究院、青岛琅琊台集团股份有限公司、中国生物发酵产业协会、山东省食品发酵工业研究院、山东寿光巨能金玉米开发有限公司、武汉远大弘元股份有限公司、天津科技大学。
本文件主要起草人：李建军、何俊、李悦明、冯志合、田延军、李静、徐建春、吴泽华、李霞、王晋、张居舟、张文文、程坚、张成林。
本文件为首次发布。
1范围
本文件描述了发酵液中衣康酸的高效液相色谱测定方法。
本文件适用于衣康酸发酵液中衣康酸的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
第一法 高效液相色谱紫外检测器法
4方法提要
试样中的衣康酸经甲醇溶液提取或直接稀释，经强阴离子固相萃取柱净化，利用反相液相色谱柱分离，用紫外检测器检测，外标法定量。
5试剂和材料
水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 甲醇：色谱纯。
5. 1.2 磷酸：优级纯。
5.2试剂配制
5.2.1 甲醇溶液（1+1，体积比）：量取250mL甲醇（5.1.1）至500 mL容量瓶，用水定容，混匀。
5.2.2 2%磷酸甲醇溶液：量取2mL磷酸（5.1.2）至100mL容量瓶，用甲醇（5.1.1）定容，混匀。
5.2.3 0.1%磷酸溶液：准确吸取1 mL磷酸（5.1.2），转移入1 000 mL容量瓶，用水定容，混匀。
5.2.4 0.1%磷酸甲醇溶液 （87+13，体积比）：量取0.1%磷酸溶液（5.2.3） 870mL至1 000 mL容量瓶，用甲醇（5.1.1）定容，混匀。
5.3标准品
衣康酸标准品（CAS： 97-65-4，CH6O4）：纯度不小于99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.4标准溶液配制
提示：在衣康酸配制时注意安全防护。
5.4.1衣康酸标准储备液（2.0 mg/mL）：精密称取20 mg （精确至0.1 mg）的衣康酸标准品（5.3），用甲醇（5.1.1）溶解并定容至10 mL，此溶液衣康酸含量为2.0 mg/mL，于4℃下保存，有效期6个月。
5.4.2 衣康酸标准工作液：分别量取适量衣康酸标准储备液（5.4.1），用0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）配制成5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的标准工作液，于4℃保存，现配现用。
5.5材料
5.5.1 强阴离子固相萃取小柱（SAX）：1 000 mg/6mL，或相当者，使用前依次用4mL甲醇（5.1.1）、4mL水、4mL甲醇溶液（5.2.1） 活化。
5.5.2 0.45 um滤膜，有机系。
6仪器和设备
6.1高效液相色谱仪： 配紫外检测器。
6.2 电子天平：感量0.1 mg和0.01 g。
6.3涡旋振荡器。
6.4氮吹仪。
6.5固相萃取装置。
6.6离心机：转速不低于6 000 r/min.
6.7其他实验室常用仪器。
7分析步骤
7.1试液制备
量取500 mL发酵液搅匀，取适量体积经6 000 r/min离心5 min，称取上清液1.0g（精确至0.01 g）于100 mL容量瓶（可根据实际样品中衣康酸的含量，增加或减少称样量），用甲醇溶液（5.2.1）溶解并定容。
7.2 净化
移取1.00 mL上述溶解液（7.1）转移至预先活化的SAX固相萃取柱（5.5.1），控制流速约0.5 mL/min，弃去流出液，用1mL甲醇水溶液（5.2.1） 淋洗，再用2%磷酸甲醇溶液（5.2.2）4mL洗脱，收集洗脱液于氮吹管中，50℃下氮气缓缓吹至近干，用0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.45μm滤膜（5.5.2） 过滤，供高效液相色谱仪分析。
如果样品基质对衣康酸的准确定性和定量没有干扰，可省略7.2，将定容液经0.45μm滤膜（5.5.2）过滤后直接进行液相色谱分析。
7.3 标准曲线的制作
将配制的标准工/作液，按浓度由低到高的顺序经液相色谱仪测定，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标作图，绘制标准曲线。
7.4仪器参考条件
液相色谱参考条件如下
色谱柱： C18（250×4.6 mm，5μm）或具有同等性能的色谱柱：
b）流动相：0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）；
c）流速：0.8mL/min；
d）柱温：45℃；
e）检测波长210 nm；
f）进样量：5 μL。
7.5 测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，测得相应的峰面积，由标准曲线得到试样溶中衣康酸的浓度。在上述色谱条件下，标准溶液和试样溶液的高效液相色谱图见附录A图A.1。
7.6 空白试验
除不加试样外，采用完全相同的步骤进行平行操作。
8分析结果的表述
试样中衣康酸的含量按公式（1）计算
image.png
式中：
X——试样中衣康酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；
c——由标准曲线求得试样溶液中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
c0——由标准曲线水得空白试验中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL） ；
m——试样质量单位为克（g）；
f——稀释倍数（若不改变称样量，则为100）；
1 000——换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。
9灵敏度
若取1.0 g样品测定，衣康酸的检出限为0.50 gkg.
10精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术中均值的10%。
第二法 高效液相色谱 示差折光检测器法
11方法提要
试样中的衣康酸经甲醇溶液提取或直接稀释，经强阴离子固相萃取柱净化，利用反相液相色谱柱分离，用示差折光检测器检测，外标法定量。
12试剂和材料
12.1试剂
同5.1。
12.2试剂配制
同5.2。
12.3标准品
同5.3。
12.4标准溶液配制
12.4. 1衣康酸标准储备液
同5.4.1。
12.4.2衣康酸标准工作液
分别量取适量衣康酸标准储备波（12.4.1），用0.1%磷酸甲醇溶浪（5.2.4）配制成0.05 mg/mL、
0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL标准工作波，于4℃保存，现配现用。
12.5 材料
12.5.1强阴离子固相萃取小柱（SAX）：同5.5。
12.5.2 0.45μm滤膜，有机系。
13 仪器和设备
高效液相色谱仪：配示差折光检测器。
其他同6。
14分析步骤
14.1试液制备
同7.1。
14.2 净化
14.2.1同7.2。
14.2.2如果样品基质对衣康酸的准确定性和定量没有干扰，可省略14.2，将定容液经0.45μm滤膜（5.5.2）过滤后直接进行液相色谱分析。
14.3标准曲线的制作
同7.3。
14.4仪器参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C18 （250×4.6mm，5μm）或具有同等性能的色谱柱；
b）流动相：0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）；
c）流速：0.8 mL/min；
d）柱温：45℃；
e）进样量：10μL；
f）示差 折光检测器检测池温度：45℃。
14.5 测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，测得相应的峰面积，由标准曲线得到试样溶液中衣康酸的浓度。在上述色谱条件下，标准溶液和试样溶液的高效液相色谱图见附录A图A.2。
14.6 空白试验
同7.6。
15分析结 果的表述
试样中衣康酸的含量按公式（2）计算：
image.png
式中：
X——试样中衣康酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；
c——由标准曲线求得试样溶液中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）；
c0——由标准曲线求得空白试验中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）；
V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m——试样质量，单位为克（g）；
f——稀释倍数（若不改变称样量，则为100）；
1000——换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。
16灵敏度
若取1.0g样品测定，衣康酸的检出限为5.0 g/kg。
17 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
QB/T 5715-2022
发酵液中衣康酸的测定 高效液相色谱法
Determination of itaconic acid in fermentation liquor-High performance liquid chromatography method
（转载自：https://t.cn/A6ls5Oaj）
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中国轻工业联合会提出。
本文件由全国食品工业标准化技术委员会（SAC/TC 64） 归口。
本文件起草单位：安徽省食品药品检验研究院、青岛琅琊台集团股份有限公司、中国生物发酵产业协会、山东省食品发酵工业研究院、山东寿光巨能金玉米开发有限公司、武汉远大弘元股份有限公司、天津科技大学。
本文件主要起草人：李建军、何俊、李悦明、冯志合、田延军、李静、徐建春、吴泽华、李霞、王晋、张居舟、张文文、程坚、张成林。
本文件为首次发布。
1范围
本文件描述了发酵液中衣康酸的高效液相色谱测定方法。
本文件适用于衣康酸发酵液中衣康酸的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
第一法 高效液相色谱紫外检测器法
4方法提要
试样中的衣康酸经甲醇溶液提取或直接稀释，经强阴离子固相萃取柱净化，利用反相液相色谱柱分离，用紫外检测器检测，外标法定量。
5试剂和材料
水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 甲醇：色谱纯。
5. 1.2 磷酸：优级纯。
5.2试剂配制
5.2.1 甲醇溶液（1+1，体积比）：量取250mL甲醇（5.1.1）至500 mL容量瓶，用水定容，混匀。
5.2.2 2%磷酸甲醇溶液：量取2mL磷酸（5.1.2）至100mL容量瓶，用甲醇（5.1.1）定容，混匀。
5.2.3 0.1%磷酸溶液：准确吸取1 mL磷酸（5.1.2），转移入1 000 mL容量瓶，用水定容，混匀。
5.2.4 0.1%磷酸甲醇溶液 （87+13，体积比）：量取0.1%磷酸溶液（5.2.3） 870mL至1 000 mL容量瓶，用甲醇（5.1.1）定容，混匀。
5.3标准品
衣康酸标准品（CAS： 97-65-4，CH6O4）：纯度不小于99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.4标准溶液配制
提示：在衣康酸配制时注意安全防护。
5.4.1衣康酸标准储备液（2.0 mg/mL）：精密称取20 mg （精确至0.1 mg）的衣康酸标准品（5.3），用甲醇（5.1.1）溶解并定容至10 mL，此溶液衣康酸含量为2.0 mg/mL，于4℃下保存，有效期6个月。
5.4.2 衣康酸标准工作液：分别量取适量衣康酸标准储备液（5.4.1），用0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）配制成5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的标准工作液，于4℃保存，现配现用。
5.5材料
5.5.1 强阴离子固相萃取小柱（SAX）：1 000 mg/6mL，或相当者，使用前依次用4mL甲醇（5.1.1）、4mL水、4mL甲醇溶液（5.2.1） 活化。
5.5.2 0.45 um滤膜，有机系。
6仪器和设备
6.1高效液相色谱仪： 配紫外检测器。
6.2 电子天平：感量0.1 mg和0.01 g。
6.3涡旋振荡器。
6.4氮吹仪。
6.5固相萃取装置。
6.6离心机：转速不低于6 000 r/min.
6.7其他实验室常用仪器。
7分析步骤
7.1试液制备
量取500 mL发酵液搅匀，取适量体积经6 000 r/min离心5 min，称取上清液1.0g（精确至0.01 g）于100 mL容量瓶（可根据实际样品中衣康酸的含量，增加或减少称样量），用甲醇溶液（5.2.1）溶解并定容。
7.2 净化
移取1.00 mL上述溶解液（7.1）转移至预先活化的SAX固相萃取柱（5.5.1），控制流速约0.5 mL/min，弃去流出液，用1mL甲醇水溶液（5.2.1） 淋洗，再用2%磷酸甲醇溶液（5.2.2）4mL洗脱，收集洗脱液于氮吹管中，50℃下氮气缓缓吹至近干，用0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.45μm滤膜（5.5.2） 过滤，供高效液相色谱仪分析。
如果样品基质对衣康酸的准确定性和定量没有干扰，可省略7.2，将定容液经0.45μm滤膜（5.5.2）过滤后直接进行液相色谱分析。
7.3 标准曲线的制作
将配制的标准工/作液，按浓度由低到高的顺序经液相色谱仪测定，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标作图，绘制标准曲线。
7.4仪器参考条件
液相色谱参考条件如下
色谱柱： C18（250×4.6 mm，5μm）或具有同等性能的色谱柱：
b）流动相：0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）；
c）流速：0.8mL/min；
d）柱温：45℃；
e）检测波长210 nm；
f）进样量：5 μL。
7.5 测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，测得相应的峰面积，由标准曲线得到试样溶中衣康酸的浓度。在上述色谱条件下，标准溶液和试样溶液的高效液相色谱图见附录A图A.1。
7.6 空白试验
除不加试样外，采用完全相同的步骤进行平行操作。
8分析结果的表述
试样中衣康酸的含量按公式（1）计算
image.png
式中：
X——试样中衣康酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；
c——由标准曲线求得试样溶液中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
c0——由标准曲线水得空白试验中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL） ；
m——试样质量单位为克（g）；
f——稀释倍数（若不改变称样量，则为100）；
1 000——换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。
9灵敏度
若取1.0 g样品测定，衣康酸的检出限为0.50 gkg.
10精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术中均值的10%。
第二法 高效液相色谱 示差折光检测器法
11方法提要
试样中的衣康酸经甲醇溶液提取或直接稀释，经强阴离子固相萃取柱净化，利用反相液相色谱柱分离，用示差折光检测器检测，外标法定量。
12试剂和材料
12.1试剂
同5.1。
12.2试剂配制
同5.2。
12.3标准品
同5.3。
12.4标准溶液配制
12.4. 1衣康酸标准储备液
同5.4.1。
12.4.2衣康酸标准工作液
分别量取适量衣康酸标准储备波（12.4.1），用0.1%磷酸甲醇溶浪（5.2.4）配制成0.05 mg/mL、
0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL标准工作波，于4℃保存，现配现用。
12.5 材料
12.5.1强阴离子固相萃取小柱（SAX）：同5.5。
12.5.2 0.45μm滤膜，有机系。
13 仪器和设备
高效液相色谱仪：配示差折光检测器。
其他同6。
14分析步骤
14.1试液制备
同7.1。
14.2 净化
14.2.1同7.2。
14.2.2如果样品基质对衣康酸的准确定性和定量没有干扰，可省略14.2，将定容液经0.45μm滤膜（5.5.2）过滤后直接进行液相色谱分析。
14.3标准曲线的制作
同7.3。
14.4仪器参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C18 （250×4.6mm，5μm）或具有同等性能的色谱柱；
b）流动相：0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）；
c）流速：0.8 mL/min；
d）柱温：45℃；
e）进样量：10μL；
f）示差 折光检测器检测池温度：45℃。
14.5 测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，测得相应的峰面积，由标准曲线得到试样溶液中衣康酸的浓度。在上述色谱条件下，标准溶液和试样溶液的高效液相色谱图见附录A图A.2。
14.6 空白试验
同7.6。
15分析结 果的表述
试样中衣康酸的含量按公式（2）计算：
image.png
式中：
X——试样中衣康酸的含量，单位为克每千克（g/kg）；
c——由标准曲线求得试样溶液中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）；
c0——由标准曲线求得空白试验中衣康酸的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）；
V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m——试样质量，单位为克（g）；
f——稀释倍数（若不改变称样量，则为100）；
1000——换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。
16灵敏度
若取1.0g样品测定，衣康酸的检出限为5.0 g/kg。
17 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
中华人民共和国国家标准
GB 31659.6-2022
食品安全国家标准
牛奶中氯前列醇残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
National food safety standard-
Determination of cloprostenol residues in milk-Liquid chromatography-
tandem mass spectrometric method
（转载自：https://t.cn/A6ldGISH）
1范围
本文件规定了牛奶中氯前列醇残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本文件适用于牛奶中氯前列醇残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样中残留的氯前列醇，用乙腈提取，混合阴离子交换固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱负离子模式测定，外标法定量。
5试剂和材料
以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1试剂
5. 1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
5.1.2 氨水（NH3·H2O）。
5.1.3 甲酸（CH2O2）。
5.1.4 无水硫酸钠（Na2SO4）。
5.1.5 乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。
5.2 标准品
5.2.1氯前列醇（Cloprostenol，C22H29ClO6，CAS号：40665-92-7），含量≥98%。
5.3溶液配制
5.3.1 0.1%甲酸溶液：取甲酸1 mL，用水稀释至1 000 mL，混匀。
5.3.2 5%氨水溶液：取氨水50 mL，用水稀释至1 000 mL，混匀。
5.3.3 2%甲酸乙腈溶液：取甲酸20 mL，用乙睛稀释至1 000 mL，混匀。
5.3.4 0.1 mol/L乙酸铵溶液：称取乙酸铵7.70 g，用水溶解并稀释至1 000 mL，混匀。
5.3.5 5 mmol/L乙酸铵溶液：取0.1 mol/L乙酸铵溶液50 mL，用水稀释至1 000 mL，混匀。
5.3.6 乙腈乙酸铵溶液：取乙腈30 mL，加5 mmol/L乙酸铵溶液至100 mL，混匀。
5.4标准溶液制备
5.4.1标准储备液：取氯前列醇钠对照品约10mg，精密称定，加乙腈适量使溶解并稀释定容至10mL容量瓶，配制成浓度为1 mg/mL的氯前列醇标准储备液。-18℃以下保存，有效期3个月。
5.4.2标准中间液：准确量取标准储备液0.1mL，于10mL容量瓶，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为10 μg/mL的标准中间液。2℃~8℃保存，有效期1个月。
5.4.3系列标准工作液：准确量取标准中间液适量，用乙酸铵乙腈稀释配制成浓度为5 ng/mL、
10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL的系列标准工作溶液。现用现配。
5.5材料
5.5.1 混合阴离子交换固相萃取柱：60 mg/3 mL或其性能相当者。
5.5.2 滤膜：0.22 μm，有机相。
5.5.3 离心管：10 mL，50 mL。
6仪器和设备
6.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。
6.2 分析天平：感量0.01 g和0.00001 g。
6.3涡旋混合器。
6.4 超声仪。
6.5冷冻离心机。
6.6氮吹仪。
6.7固相萃取装置。
7试样的制备与保存
7.1试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试试样，并均质。
a）取均质的供试样品，作为供试试样；
b）取均质的空白样品，作为空白试样；
c）取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样。
7.2试样的保存
-18℃以下储存。
8测定步骤
8.1 提取
取试料2 g（准确至±0.05 g）于50 mL离心管中，加乙腈5 mL，无水硫酸钠2 g，涡旋混匀，超声提取10 min，于4℃ 10 000 r/min离心10 min，取上清液于10 mL离心管中，重复提取1次，合并2次上清液。40℃氮气吹干，残余物用1mL乙腈溶解，加0.1%甲酸水溶液3mL，涡旋混匀，备用。
8.2 净化
取混合阴离子交换固相萃取柱，用乙腈3 mL活化，水3 mL平衡。取备用液过柱，用5%氨水溶液3 mL淋洗，抽干。用2%甲酸乙腈溶液3 mL洗脱，收集洗脱液，40℃氮气吹干，残余物用1 mL乙腈乙酸铵溶液溶解，用微孔滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。
8.3基质匹配标准曲线的制备
准确量取氯前列醇的标准工作液各1mL，分别溶解经提取、净化及吹干后的空白试料残余物，滤膜过滤，配制成氯前列醇浓度为5 ng/mL、10 ng/mL、20 ngmL、50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL的系列基质匹配标准溶液，供液相色谱-串联质谱测定，以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为橫坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
8.4 测定
8.4.1色谱条件参考条件
色谱柱：C18柱长150 mm，内径2.1 mm，粒径5 μm，或性能相当者；
b）流动相：A为5 mmol/L乙酸铵溶液；B为乙腈；
c）流速：0.3 mL/ min；
d）进样量：5 μL；
e）柱温：30℃；
f）流动相梯度及洗脱程序见表 1。
image.png
8.4.2质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源，负离子模式；
b）检测方式：多反应监测（MRM）；
c）鞘气压力（GS1）：344.75 kPa（50 psi）；
d）辅助气压力（GS2）：344.75 kPa（50 psi）；
e）碰撞气压力（collision gas）：34.475 kPa（5 psi）；
f）卷帘气压力（curtain gas）：206.85 kPa（30 psi）；
g）负离子模式电喷雾电压（IS）：-4500 V；
h）雾化温度：500℃；
i）鞘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气。喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度；
j）监测离子参数情况见表2。
image.png
8.4.3 测定法
取试料溶液和基质匹配标准溶液，按8.4.1和8.4.2设定仪器条件操作，作单点或多点校准，外标法计算。基质匹配标准溶液及试料溶液中目标药物的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器检测的线性范围之内。试料溶液中待测物质的保留时间与基质匹配标准工作液中待测物质的保留时间之比，偏差在±2.5%以内，且试料溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比，符合表3的要求，则可判定为样品中存在对应的待测物质。相关谱图见附录A。
image.png
image.png
8.5 空白试验
取空白试料，除不加药物外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
9结果计算与表述
试样中氯前列醇的残留量按标准曲线或公式（1）计算。
image.png
式中：
X——试样中氯前列醇残留量的数值，单位为微克每毫升（μg/kg）；
A——试样溶液中氯前列醇的峰面积；
As——基质匹配标准溶液中氯前列醇的峰面积；
Cs——基质匹配标准溶液中氯前列醇浓度的数值，单位为纳克每毫升（μg/L）；
V——试样溶液最终定容体积的数值，单位为毫升（mL）；
m——供试试样质量的数值，单位为克（g）。
10 检测方法的灵敏度、准确度、精密度
10. 1灵敏度
本方法检测限为1.5 μg/kg，定量限为5 μg/kg。
10.2 准确度
本方法在5 μg/kg~500 μg/kg添加浓度的水平上其回收率为80%~ 120%。
10.3 精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%。
GB 31659.6-2022
食品安全国家标准
牛奶中氯前列醇残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
National food safety standard-
Determination of cloprostenol residues in milk-Liquid chromatography-
tandem mass spectrometric method
（转载自：https://t.cn/A6ldGISH）
1范围
本文件规定了牛奶中氯前列醇残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本文件适用于牛奶中氯前列醇残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样中残留的氯前列醇，用乙腈提取，混合阴离子交换固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱负离子模式测定，外标法定量。
5试剂和材料
以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1试剂
5. 1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
5.1.2 氨水（NH3·H2O）。
5.1.3 甲酸（CH2O2）。
5.1.4 无水硫酸钠（Na2SO4）。
5.1.5 乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。
5.2 标准品
5.2.1氯前列醇（Cloprostenol，C22H29ClO6，CAS号：40665-92-7），含量≥98%。
5.3溶液配制
5.3.1 0.1%甲酸溶液：取甲酸1 mL，用水稀释至1 000 mL，混匀。
5.3.2 5%氨水溶液：取氨水50 mL，用水稀释至1 000 mL，混匀。
5.3.3 2%甲酸乙腈溶液：取甲酸20 mL，用乙睛稀释至1 000 mL，混匀。
5.3.4 0.1 mol/L乙酸铵溶液：称取乙酸铵7.70 g，用水溶解并稀释至1 000 mL，混匀。
5.3.5 5 mmol/L乙酸铵溶液：取0.1 mol/L乙酸铵溶液50 mL，用水稀释至1 000 mL，混匀。
5.3.6 乙腈乙酸铵溶液：取乙腈30 mL，加5 mmol/L乙酸铵溶液至100 mL，混匀。
5.4标准溶液制备
5.4.1标准储备液：取氯前列醇钠对照品约10mg，精密称定，加乙腈适量使溶解并稀释定容至10mL容量瓶，配制成浓度为1 mg/mL的氯前列醇标准储备液。-18℃以下保存，有效期3个月。
5.4.2标准中间液：准确量取标准储备液0.1mL，于10mL容量瓶，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为10 μg/mL的标准中间液。2℃~8℃保存，有效期1个月。
5.4.3系列标准工作液：准确量取标准中间液适量，用乙酸铵乙腈稀释配制成浓度为5 ng/mL、
10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL的系列标准工作溶液。现用现配。
5.5材料
5.5.1 混合阴离子交换固相萃取柱：60 mg/3 mL或其性能相当者。
5.5.2 滤膜：0.22 μm，有机相。
5.5.3 离心管：10 mL，50 mL。
6仪器和设备
6.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。
6.2 分析天平：感量0.01 g和0.00001 g。
6.3涡旋混合器。
6.4 超声仪。
6.5冷冻离心机。
6.6氮吹仪。
6.7固相萃取装置。
7试样的制备与保存
7.1试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试试样，并均质。
a）取均质的供试样品，作为供试试样；
b）取均质的空白样品，作为空白试样；
c）取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样。
7.2试样的保存
-18℃以下储存。
8测定步骤
8.1 提取
取试料2 g（准确至±0.05 g）于50 mL离心管中，加乙腈5 mL，无水硫酸钠2 g，涡旋混匀，超声提取10 min，于4℃ 10 000 r/min离心10 min，取上清液于10 mL离心管中，重复提取1次，合并2次上清液。40℃氮气吹干，残余物用1mL乙腈溶解，加0.1%甲酸水溶液3mL，涡旋混匀，备用。
8.2 净化
取混合阴离子交换固相萃取柱，用乙腈3 mL活化，水3 mL平衡。取备用液过柱，用5%氨水溶液3 mL淋洗，抽干。用2%甲酸乙腈溶液3 mL洗脱，收集洗脱液，40℃氮气吹干，残余物用1 mL乙腈乙酸铵溶液溶解，用微孔滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。
8.3基质匹配标准曲线的制备
准确量取氯前列醇的标准工作液各1mL，分别溶解经提取、净化及吹干后的空白试料残余物，滤膜过滤，配制成氯前列醇浓度为5 ng/mL、10 ng/mL、20 ngmL、50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL的系列基质匹配标准溶液，供液相色谱-串联质谱测定，以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为橫坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
8.4 测定
8.4.1色谱条件参考条件
色谱柱：C18柱长150 mm，内径2.1 mm，粒径5 μm，或性能相当者；
b）流动相：A为5 mmol/L乙酸铵溶液；B为乙腈；
c）流速：0.3 mL/ min；
d）进样量：5 μL；
e）柱温：30℃；
f）流动相梯度及洗脱程序见表 1。
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8.4.2质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源，负离子模式；
b）检测方式：多反应监测（MRM）；
c）鞘气压力（GS1）：344.75 kPa（50 psi）；
d）辅助气压力（GS2）：344.75 kPa（50 psi）；
e）碰撞气压力（collision gas）：34.475 kPa（5 psi）；
f）卷帘气压力（curtain gas）：206.85 kPa（30 psi）；
g）负离子模式电喷雾电压（IS）：-4500 V；
h）雾化温度：500℃；
i）鞘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气。喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度；
j）监测离子参数情况见表2。
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8.4.3 测定法
取试料溶液和基质匹配标准溶液，按8.4.1和8.4.2设定仪器条件操作，作单点或多点校准，外标法计算。基质匹配标准溶液及试料溶液中目标药物的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器检测的线性范围之内。试料溶液中待测物质的保留时间与基质匹配标准工作液中待测物质的保留时间之比，偏差在±2.5%以内，且试料溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比，符合表3的要求，则可判定为样品中存在对应的待测物质。相关谱图见附录A。
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8.5 空白试验
取空白试料，除不加药物外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
9结果计算与表述
试样中氯前列醇的残留量按标准曲线或公式（1）计算。
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式中：
X——试样中氯前列醇残留量的数值，单位为微克每毫升（μg/kg）；
A——试样溶液中氯前列醇的峰面积；
As——基质匹配标准溶液中氯前列醇的峰面积；
Cs——基质匹配标准溶液中氯前列醇浓度的数值，单位为纳克每毫升（μg/L）；
V——试样溶液最终定容体积的数值，单位为毫升（mL）；
m——供试试样质量的数值，单位为克（g）。
10 检测方法的灵敏度、准确度、精密度
10. 1灵敏度
本方法检测限为1.5 μg/kg，定量限为5 μg/kg。
10.2 准确度
本方法在5 μg/kg~500 μg/kg添加浓度的水平上其回收率为80%~ 120%。
10.3 精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%。
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