《裙下客》崔喜周闵生（小说阅读）小说阅读笔趣阁Fluc
❗书名：《裙下客》
❗主角：崔喜周闵生《周闵生崔喜》
请到微#心#皓〖duo12051128〗《裙下客》崔喜周闵生就行了
看着米娜姐风风火火的背影，我的心有点沉重不想再接着往下想。
很多事情想的太透彻反而是折磨。
我翻了一下自己的更衣柜，平时放着备用的T恤和牛仔裤不见了。只有白天我穿来的周闵生的那件衣服还在柜子里面放着。
估计是平时会所里面和我走的近的几个妹妹拿走的。
平日里有些客人在会所就玩的很大，姑娘们的衣服经常被弄的不能见人。
我经验多，就特意准备了几件均码的白T恤和牛仔裤放在更衣室。
谁有急用就拿走，然后第二天多半都会转个千八百块的给我。
看见柜子里面的常备的衣服没有了，我给有点开心，想着多半明天就有妹妹们送钱给我。
我把周闵生的那件T恤套在了裙子上，换了双平底鞋往会所一楼走准备回家。
刚走到二楼长廊的最尽头，手提包里面的手机突然响了起来。我低头去摸手机，拐角的包间里面突然伸出了一只手猛的把我拉了进去。
包厢里面没开灯，昏暗一片。
我看不清拉我进来的人是谁。
男人有力的大手死死的掐住我的腰，把我背对着扼制在他怀里。
我吓了一跳，下意识的全身紧绷。
刚下要挣扎，就感觉到身后的男人俯身把头靠在我的脖颈间。
有冰凉的金丝眼镜边挨到了我的肌肤，我停止了挣扎。
“梁先生，您不是和黎音小姐一起走了吗？”
我的声音有点发颤。
不知道是因为他的突然出现吓到了，还是因为心底里隐秘的兴奋。
“我有话想单独问你。”
梁先生低沉磁性的嗓音紧贴着我的耳边响起，带起我的一阵战栗。
❗书名：《裙下客》
❗主角：崔喜周闵生《周闵生崔喜》
请到微#心#皓〖duo12051128〗《裙下客》崔喜周闵生就行了
看着米娜姐风风火火的背影，我的心有点沉重不想再接着往下想。
很多事情想的太透彻反而是折磨。
我翻了一下自己的更衣柜，平时放着备用的T恤和牛仔裤不见了。只有白天我穿来的周闵生的那件衣服还在柜子里面放着。
估计是平时会所里面和我走的近的几个妹妹拿走的。
平日里有些客人在会所就玩的很大，姑娘们的衣服经常被弄的不能见人。
我经验多，就特意准备了几件均码的白T恤和牛仔裤放在更衣室。
谁有急用就拿走，然后第二天多半都会转个千八百块的给我。
看见柜子里面的常备的衣服没有了，我给有点开心，想着多半明天就有妹妹们送钱给我。
我把周闵生的那件T恤套在了裙子上，换了双平底鞋往会所一楼走准备回家。
刚走到二楼长廊的最尽头，手提包里面的手机突然响了起来。我低头去摸手机，拐角的包间里面突然伸出了一只手猛的把我拉了进去。
包厢里面没开灯，昏暗一片。
我看不清拉我进来的人是谁。
男人有力的大手死死的掐住我的腰，把我背对着扼制在他怀里。
我吓了一跳，下意识的全身紧绷。
刚下要挣扎，就感觉到身后的男人俯身把头靠在我的脖颈间。
有冰凉的金丝眼镜边挨到了我的肌肤，我停止了挣扎。
“梁先生，您不是和黎音小姐一起走了吗？”
我的声音有点发颤。
不知道是因为他的突然出现吓到了，还是因为心底里隐秘的兴奋。
“我有话想单独问你。”
梁先生低沉磁性的嗓音紧贴着我的耳边响起，带起我的一阵战栗。
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书名：《独家宠爱》林霄《独家宠爱》林霄
主角：《独家宠爱》林霄《独家宠爱》林霄
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《强军科技》陆峰《强军科技》陆峰
《精忠报国》岳扬《精忠报国》岳扬
《完美犯罪》苏晨《完美犯罪》苏晨
《有钱真好》白露沈峰《有钱真好》白露沈峰
《无懈可击》方默《无懈可击》方默
《香江之主》叶启阳《香江之主》叶启阳
《全面高科技》严磊《全面高科技》严磊
《无敌战舰》秦铭《无敌战舰》秦铭
《港江风雨》秦峰《港江风雨》秦峰
小说书名:《以和为贵》主角:沈栋李欣欣
小说主角:《以和为贵》主角:沈栋李欣欣
《专属浪漫》主角:张阳
《大明崛起》主角:朱裕
《基建狂魔》主角：方墨
《世界大冒险》主角:江扬
《大明五年狗县令震惊朱屠夫》宋隐
《游戏之神》主角:陆子昂
《幕后兵王》主角:方寒
《文娱:离婚后，天后纠缠我》主角:陆云
《人在封神，一切全靠捡》主角:殷郊云龙
《作曲鬼才》主角:李默
《光辉警途》主角:朱锐锋
《世界神豪》主角:林枫
《官路巅峰》主角:沈枫
《军工无敌》主角:林枫
[桃里桃气]永和九年，岁在癸丑，暮春之初，会于会稽山阴之兰亭，修禊事也。群贤毕至，少长咸集。此地有崇山峻岭，茂林修竹，又有清流激湍，映带左右，引以为流觞曲水，列坐其次。虽无丝竹管弦之盛，一觞一咏，亦足以畅叙幽情。
是日也，天朗气清，惠风和畅。仰观宇宙之大，俯察品类之盛，所以游目骋怀，足以极视听之娱，信可乐也。
夫人之相与，俯仰一世。或取诸怀抱，悟言一室之内；或因寄所托，放浪形骸之外。虽趣舍万殊，静躁不同，当其欣于所遇，暂得于己，快然自足，不知老之将至；及其所之既倦，情随事迁，感慨系之矣。向之所欣，俯仰之间，已为陈迹，犹不能不以之兴怀，况修短随化，终期于尽！古人云：“死生亦大矣。”岂不痛哉！
每览昔人兴感之由，若合一契，未尝不临文嗟悼，不能喻之于怀。固知一死生为虚诞，齐彭殇为妄作。后之视今，亦犹今之视昔，悲夫！故列叙时人，录其所述，虽世殊事异，所以兴怀，其致一也。后之览者，亦将有感于斯文。
书名：《独家宠爱》林霄《独家宠爱》林霄
主角：《独家宠爱》林霄《独家宠爱》林霄
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《无懈可击》方默《无懈可击》方默
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《港江风雨》秦峰《港江风雨》秦峰
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《专属浪漫》主角:张阳
《大明崛起》主角:朱裕
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《世界大冒险》主角:江扬
《大明五年狗县令震惊朱屠夫》宋隐
《游戏之神》主角:陆子昂
《幕后兵王》主角:方寒
《文娱:离婚后，天后纠缠我》主角:陆云
《人在封神，一切全靠捡》主角:殷郊云龙
《作曲鬼才》主角:李默
《光辉警途》主角:朱锐锋
《世界神豪》主角:林枫
《官路巅峰》主角:沈枫
《军工无敌》主角:林枫
[桃里桃气]永和九年，岁在癸丑，暮春之初，会于会稽山阴之兰亭，修禊事也。群贤毕至，少长咸集。此地有崇山峻岭，茂林修竹，又有清流激湍，映带左右，引以为流觞曲水，列坐其次。虽无丝竹管弦之盛，一觞一咏，亦足以畅叙幽情。
是日也，天朗气清，惠风和畅。仰观宇宙之大，俯察品类之盛，所以游目骋怀，足以极视听之娱，信可乐也。
夫人之相与，俯仰一世。或取诸怀抱，悟言一室之内；或因寄所托，放浪形骸之外。虽趣舍万殊，静躁不同，当其欣于所遇，暂得于己，快然自足，不知老之将至；及其所之既倦，情随事迁，感慨系之矣。向之所欣，俯仰之间，已为陈迹，犹不能不以之兴怀，况修短随化，终期于尽！古人云：“死生亦大矣。”岂不痛哉！
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双荧光素酶报告基因检测（三）
萤火虫荧光素酶片段互补成像（LCI）技术是一种新兴的蛋白质相互作用研究方法，其中两个被研究的目标蛋白质分别与萤火虫荧光素酶的N端和C端相连。当这两个蛋白质发生相互作用时，荧光素酶的两个段落会接近并组合成一个活性酶。结合烟草瞬时表达系统的LCI技术，能够在植物细胞内进行实时和定量的蛋白质互作分析。这种方法不受植物自身荧光的干扰，操作简便，无需细胞裂解或蛋白提取，有效地反映了植物在生理条件下蛋白质的相互作用状态。
与其它蛋白质互作研究技术相比, 借助于烟草(Nicotiana benthamiana)瞬时表达系统的萤火素酶互补实验(LCA)具有简单、灵敏、可靠、高效和低背景等优点, 并可轻松扩展为大规模蛋白质互作的筛选和验证研究。萤火素酶互补实验定性并定量分析生物发光或发光强度, 从而检测植物目标蛋白之间的相互作用。
荧光素酶互补法(LCI)
荧光素酶互补实验（LCA）是将荧光素酶分为N端（NLuc）和C端（CLuc）两个功能性片段。在此实验中，两个待研究的目标蛋白分别与NLuc和CLuc融合。当这两个目标蛋白发生相互作用时，它们将NLuc和CLuc拉近，使得荧光素酶的活性得以恢复，进而催化荧光素底物发光。由于其高灵敏度、定量化能力和简便的操作流程。LCA技术已在植物和动物学的蛋白质互作研究中得到广泛应用。
在此技术的应用中，萤火虫荧光素酶的N端和C端片段只有在被分别融合到相互作用的蛋白质上时才能恢复其活性，这一过程可以通过植物活体成像系统进行观测。LCA技术适用于蛋白质相互作用的瞬时表达或稳定的转基因表达研究。
图1 利用荧光素酶互补实验验证植物蛋白互作原理
实验方法
① 分别将待测蛋白质的基因克隆到含有CLuc和NLuc编码序列的质粒中，然后将所得质粒转入农杆菌中。
② 将含有这两种质粒的农杆菌细菌浸入本氏烟草中，以便重组DNA可以被传递到植物细胞中并稳定表达。
③ 收集表达测试蛋白质的叶组织，通过植物活体成像系统和高灵敏度发光检测仪检测生物发光的强度，从而对蛋白之间的相互作用进行定性和定量分析。
最初开发用于检测哺乳动物活细胞中的蛋白质-蛋白质相互作用，但后来被用于植物的研究中。借助于烟草的瞬时表达系统，将含有融合蛋白的表达载体转化农杆菌后注射烟草叶片，培养2-3天后，在注射部位均匀涂抹反应底物（荧火素）。通过植物活体成像系统 (CCD imaging system)或高灵敏度发光检测仪（luminometer）检测生物发光的强度，从而对蛋白之间的相互作用进行定性和定量分析。此方法已被广泛应用于动植物相关领域的蛋白质互作研究。
优/缺点
优点：
① 高度定量，允许在几个数量级的范围内对发光信号进行线性测量。
② 与FRET和BiFC相比，此法可对整个组织或细胞群进行采样，避免了来自单个细胞的偏差。
③ 在黑暗中测量发光，不受叶绿素和细胞壁产生的自荧光的影响。
④ 可用于在组织水平上研究蛋白质-蛋白质相互作用，该技术对于研究组织特异性蛋白质-蛋白质相互作用非常有用。
⑤ 无需显微镜，通过使用植物活体成像系统和板式发光检测仪可以在1-2分钟内收集数据，进行定性和定量分析，同时检测大量的蛋白质组。
⑥ 需要最少的样品处理和实验室培训，操作简便，实验高效。
⑦ LCI作为植物蛋白质相互作用研究的简单工具的可用性将有助于验证从酵母双杂交分析中收集的蛋白质相互作用组数据。
缺点：
萤火虫萤光素酶（Fluc）是SLC技术中最常用的萤光素酶，但Fluc的N端和C端片段体积过大，在某些情况下可能会干扰融合蛋白的功能或互作。
卡梅德生物（KMD Bioscience）(https://t.cn/A6W2Fk3E) 建立了完善的细胞培养平台，能够提供给客户多种细胞学基础实验，可以提供优质的免疫检测服务—双荧光素酶标记基因检测。
#卡梅德生物##双荧光素酶##标记基因检测##蛋白互作#
萤火虫荧光素酶片段互补成像（LCI）技术是一种新兴的蛋白质相互作用研究方法，其中两个被研究的目标蛋白质分别与萤火虫荧光素酶的N端和C端相连。当这两个蛋白质发生相互作用时，荧光素酶的两个段落会接近并组合成一个活性酶。结合烟草瞬时表达系统的LCI技术，能够在植物细胞内进行实时和定量的蛋白质互作分析。这种方法不受植物自身荧光的干扰，操作简便，无需细胞裂解或蛋白提取，有效地反映了植物在生理条件下蛋白质的相互作用状态。
与其它蛋白质互作研究技术相比, 借助于烟草(Nicotiana benthamiana)瞬时表达系统的萤火素酶互补实验(LCA)具有简单、灵敏、可靠、高效和低背景等优点, 并可轻松扩展为大规模蛋白质互作的筛选和验证研究。萤火素酶互补实验定性并定量分析生物发光或发光强度, 从而检测植物目标蛋白之间的相互作用。
荧光素酶互补法(LCI)
荧光素酶互补实验（LCA）是将荧光素酶分为N端（NLuc）和C端（CLuc）两个功能性片段。在此实验中，两个待研究的目标蛋白分别与NLuc和CLuc融合。当这两个目标蛋白发生相互作用时，它们将NLuc和CLuc拉近，使得荧光素酶的活性得以恢复，进而催化荧光素底物发光。由于其高灵敏度、定量化能力和简便的操作流程。LCA技术已在植物和动物学的蛋白质互作研究中得到广泛应用。
在此技术的应用中，萤火虫荧光素酶的N端和C端片段只有在被分别融合到相互作用的蛋白质上时才能恢复其活性，这一过程可以通过植物活体成像系统进行观测。LCA技术适用于蛋白质相互作用的瞬时表达或稳定的转基因表达研究。
图1 利用荧光素酶互补实验验证植物蛋白互作原理
实验方法
① 分别将待测蛋白质的基因克隆到含有CLuc和NLuc编码序列的质粒中，然后将所得质粒转入农杆菌中。
② 将含有这两种质粒的农杆菌细菌浸入本氏烟草中，以便重组DNA可以被传递到植物细胞中并稳定表达。
③ 收集表达测试蛋白质的叶组织，通过植物活体成像系统和高灵敏度发光检测仪检测生物发光的强度，从而对蛋白之间的相互作用进行定性和定量分析。
最初开发用于检测哺乳动物活细胞中的蛋白质-蛋白质相互作用，但后来被用于植物的研究中。借助于烟草的瞬时表达系统，将含有融合蛋白的表达载体转化农杆菌后注射烟草叶片，培养2-3天后，在注射部位均匀涂抹反应底物（荧火素）。通过植物活体成像系统 (CCD imaging system)或高灵敏度发光检测仪（luminometer）检测生物发光的强度，从而对蛋白之间的相互作用进行定性和定量分析。此方法已被广泛应用于动植物相关领域的蛋白质互作研究。
优/缺点
优点：
① 高度定量，允许在几个数量级的范围内对发光信号进行线性测量。
② 与FRET和BiFC相比，此法可对整个组织或细胞群进行采样，避免了来自单个细胞的偏差。
③ 在黑暗中测量发光，不受叶绿素和细胞壁产生的自荧光的影响。
④ 可用于在组织水平上研究蛋白质-蛋白质相互作用，该技术对于研究组织特异性蛋白质-蛋白质相互作用非常有用。
⑤ 无需显微镜，通过使用植物活体成像系统和板式发光检测仪可以在1-2分钟内收集数据，进行定性和定量分析，同时检测大量的蛋白质组。
⑥ 需要最少的样品处理和实验室培训，操作简便，实验高效。
⑦ LCI作为植物蛋白质相互作用研究的简单工具的可用性将有助于验证从酵母双杂交分析中收集的蛋白质相互作用组数据。
缺点：
萤火虫萤光素酶（Fluc）是SLC技术中最常用的萤光素酶，但Fluc的N端和C端片段体积过大，在某些情况下可能会干扰融合蛋白的功能或互作。
卡梅德生物（KMD Bioscience）(https://t.cn/A6W2Fk3E) 建立了完善的细胞培养平台，能够提供给客户多种细胞学基础实验，可以提供优质的免疫检测服务—双荧光素酶标记基因检测。
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