干货分享 | 细胞长不好的原因与解答！
养细胞真是一件特别心累的事，不知不觉间可能就会出现很多问题，细胞不长了、不贴壁了......
实在让人操碎了心。
培养细胞不贴壁
可能原因
1.胰蛋白酶消化过度；
2.支原体污染；
3.培养基pH值过碱（NaHCO3分解）；
4.细胞老化；
5.接种细胞起始浓度太低或太高。
解决方法
1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度；
2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物；
3.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2；
4.启用新的保种细胞；
5.调节最佳接种细胞浓度。
悬浮细胞成簇
可能原因
1.培养液中含钙,镁离子；
2.支原体污染；
3.蛋白酶过度消化使得细胞裂解；
4.DNA污染。
解决方法
1.用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸
2.细胞获得单细胞悬液；
3.分离培养物，检测支原体；
4.DNasel处理细胞。
培养细胞生长缓慢
可能原因
1.由于更换不同培养液或血清；
2.培养液中一些细胞生长必须成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏；
3.培养物中有少量细菌或真菌污染；
4.试剂保存不当；
5.接种细胞起始浓度太低；
6.细胞已老化；
7.支原体污染。
解决方法
1.比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液；
2.换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子；
3.用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；
4.血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，需在1周内用完；
5.增加接种细胞起始浓度；
6.换用新的保种细胞；
7.分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
培养细胞生长不好
可能原因
细胞本身的状态
1. 细胞传代次数多，细胞老化；
2. 细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；
3. 细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；
4. 胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；
5. 细胞的冻存与复苏：慢冻速溶。
污染
1. 支原体污染；
2. 霉菌污染。
培养基或血清
1. 更换血清或培养基之前未进行验证；
2. 选择的培养基是否合适；
3. 培养基配制是否合适；
4. 培养基配制是否准确无误。
培养环境
1. CO2供应是否正常；
2. 培养箱或摇床温度控制是否正确。
解决方法
根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案
1.注意细胞的本身状态：如传代次数，接种量等；
2.避免产生污染（用正规，合法，可朔源的血清）；
3.要用合适的血清或培养基，最好经过验证；
4.注意实验室的环境。
培养细胞死亡
可能原因
1.培养箱内无CO2；
2.培养箱内温度波动太大；
3.细胞冻存或复苏过程中损伤；
4.培养液渗透压不正确；
5.培养液中有毒代谢产物堆积。
解决方法
1.检测培养箱内CO2；
2.检查培养箱内温度；
3.取新的保存细胞种；
4.检测培养液渗透压；
5.换入新鲜培养液；
养细胞真是一件特别心累的事，不知不觉间可能就会出现很多问题，细胞不长了、不贴壁了......
实在让人操碎了心。
培养细胞不贴壁
可能原因
1.胰蛋白酶消化过度；
2.支原体污染；
3.培养基pH值过碱（NaHCO3分解）；
4.细胞老化；
5.接种细胞起始浓度太低或太高。
解决方法
1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度；
2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物；
3.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2；
4.启用新的保种细胞；
5.调节最佳接种细胞浓度。
悬浮细胞成簇
可能原因
1.培养液中含钙,镁离子；
2.支原体污染；
3.蛋白酶过度消化使得细胞裂解；
4.DNA污染。
解决方法
1.用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸
2.细胞获得单细胞悬液；
3.分离培养物，检测支原体；
4.DNasel处理细胞。
培养细胞生长缓慢
可能原因
1.由于更换不同培养液或血清；
2.培养液中一些细胞生长必须成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏；
3.培养物中有少量细菌或真菌污染；
4.试剂保存不当；
5.接种细胞起始浓度太低；
6.细胞已老化；
7.支原体污染。
解决方法
1.比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液；
2.换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子；
3.用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；
4.血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，需在1周内用完；
5.增加接种细胞起始浓度；
6.换用新的保种细胞；
7.分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
培养细胞生长不好
可能原因
细胞本身的状态
1. 细胞传代次数多，细胞老化；
2. 细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；
3. 细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；
4. 胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；
5. 细胞的冻存与复苏：慢冻速溶。
污染
1. 支原体污染；
2. 霉菌污染。
培养基或血清
1. 更换血清或培养基之前未进行验证；
2. 选择的培养基是否合适；
3. 培养基配制是否合适；
4. 培养基配制是否准确无误。
培养环境
1. CO2供应是否正常；
2. 培养箱或摇床温度控制是否正确。
解决方法
根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案
1.注意细胞的本身状态：如传代次数，接种量等；
2.避免产生污染（用正规，合法，可朔源的血清）；
3.要用合适的血清或培养基，最好经过验证；
4.注意实验室的环境。
培养细胞死亡
可能原因
1.培养箱内无CO2；
2.培养箱内温度波动太大；
3.细胞冻存或复苏过程中损伤；
4.培养液渗透压不正确；
5.培养液中有毒代谢产物堆积。
解决方法
1.检测培养箱内CO2；
2.检查培养箱内温度；
3.取新的保存细胞种；
4.检测培养液渗透压；
5.换入新鲜培养液；
收到新ipad,居然是type c的口了，某人说这属于大件儿[哈哈][哈哈]～ 终于以后乐谱可以升级了！[嘻嘻][鼓掌][嘻嘻][鼓掌] 今日游泳课状态不错，动作流畅还在水里翻了筋斗！原来运动员都是会呛水的，只不过跟我们弹琴一样，对疼痛已经无感了，为了能做到更多这点不舒服又算什么？教练今日的碎碎念干货非常多，也恭喜他拥有一个这么棒的学生[嘻嘻][鼓掌][嘻嘻][鼓掌]！感恩！！
“要想获得最幸福的生活，或许就不该把人际关系抑或非个人的兴趣理想化为唯一的救赎之路。”
拆封的时候，以为这是一本疗愈的心理散文，没想到却是一本心理学硬核干货。好吧，想说清孤独，就不能只说孤独。只有追本溯源的剖析，才能真正地理解孤独，拥抱孤独。
书名：《与孤独共处》
作者：安东尼·斯托尔
出版方：机械工业出版社
忘了是在哪本书中读到过，曾经，人们的活动范围小到只有左右乡邻之间的接触，如今，人们靠一步手机就能连接这个世界。然而，我们在以10倍速彼此接近，却也在以10倍速彼此告别。
在看似喧嚣的繁华背后，每个人都感到自己的孤独无处安放。而孤独也好像成了问题式的存在，就好像“外向点儿好”一样，各种心理话题都围绕如何通过展开亲密关系关系来抵御孤独。于是，越读越内耗，越读越陷入自我质疑。
《与孤独共处》这本书却从独特的视角告诉我们，孤独不是问题，认为孤独有问题才是蕞大的问题。最抓我的是，作者安东尼并没有劈头盖脸地对孤独各种褒奖，而是以各家心理学为基础，把孤独这件事掰开了，揉碎了地展示在你面前。
从弗洛伊德的精神分析，到鲍尔比的依恋理论，从荣格的内外向心理类型，到马斯诺的自我实现...突然发现我读的不只是孤独，简直是集结了众家心理学“镇店之宝”的浓缩手册。
贯穿全书的主要一点是，“个体所能感受的一些最深刻、蕞治愈的心里体验都是在内心发生的，如果真与他人互动交往存在关系的话，那也只是稍有关联而已”。我们都需要在这世上找自己存在的意义，但“人类并非只为爱而生”。
格外关注和他人之间的情感体验，很可能会按照别人的期待生活，努力取悦他人，没有时间读想读的书，没有时间听想听的歌。如果一个人“不过是迎合世界，而不是真实地去体味人生，蕞后会在虚假的自我中进入一种混乱状态，觉得生活毫无意义。”
卢梭在《瓦尔登湖》中所写：如果一个人跟不上他的同伴, 也许是因为他听到不同的鼓声。
所以，你真的不必迎合他人的偏见，强迫自己放下心爱的书走出房间，不必纠结自己是否合群，对那些莫名其妙的人强颜欢笑，不必迫于压力，投身一段无感的亲密关系。
与孤独共处，是一种荣耀。唯愿在孤独中成全自己，在喧嚣世界中静默生长。
共勉～
#阅读##读书##读书[超话]##新书#
拆封的时候，以为这是一本疗愈的心理散文，没想到却是一本心理学硬核干货。好吧，想说清孤独，就不能只说孤独。只有追本溯源的剖析，才能真正地理解孤独，拥抱孤独。
书名：《与孤独共处》
作者：安东尼·斯托尔
出版方：机械工业出版社
忘了是在哪本书中读到过，曾经，人们的活动范围小到只有左右乡邻之间的接触，如今，人们靠一步手机就能连接这个世界。然而，我们在以10倍速彼此接近，却也在以10倍速彼此告别。
在看似喧嚣的繁华背后，每个人都感到自己的孤独无处安放。而孤独也好像成了问题式的存在，就好像“外向点儿好”一样，各种心理话题都围绕如何通过展开亲密关系关系来抵御孤独。于是，越读越内耗，越读越陷入自我质疑。
《与孤独共处》这本书却从独特的视角告诉我们，孤独不是问题，认为孤独有问题才是蕞大的问题。最抓我的是，作者安东尼并没有劈头盖脸地对孤独各种褒奖，而是以各家心理学为基础，把孤独这件事掰开了，揉碎了地展示在你面前。
从弗洛伊德的精神分析，到鲍尔比的依恋理论，从荣格的内外向心理类型，到马斯诺的自我实现...突然发现我读的不只是孤独，简直是集结了众家心理学“镇店之宝”的浓缩手册。
贯穿全书的主要一点是，“个体所能感受的一些最深刻、蕞治愈的心里体验都是在内心发生的，如果真与他人互动交往存在关系的话，那也只是稍有关联而已”。我们都需要在这世上找自己存在的意义，但“人类并非只为爱而生”。
格外关注和他人之间的情感体验，很可能会按照别人的期待生活，努力取悦他人，没有时间读想读的书，没有时间听想听的歌。如果一个人“不过是迎合世界，而不是真实地去体味人生，蕞后会在虚假的自我中进入一种混乱状态，觉得生活毫无意义。”
卢梭在《瓦尔登湖》中所写：如果一个人跟不上他的同伴, 也许是因为他听到不同的鼓声。
所以，你真的不必迎合他人的偏见，强迫自己放下心爱的书走出房间，不必纠结自己是否合群，对那些莫名其妙的人强颜欢笑，不必迫于压力，投身一段无感的亲密关系。
与孤独共处，是一种荣耀。唯愿在孤独中成全自己，在喧嚣世界中静默生长。
共勉～
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