丰田艰难路（2）与供应商的信任关系在动摇
“丰田与供应商是血脉相通的关系”。
2月24日，在东京都港区的新高轮格兰王子大饭店（Grand Prince Hotel Shin Takanawa），丰田邀请来了约700名全球供应商的负责人，丰田章男社长引用恩人的话如此说道。创始人丰田喜一郎也曾表示“供应商是我们公司的分工厂”等，与供应商“共存共荣”一直是丰田竞争力的源泉。如今，这种信任关系正在动摇。
在爱知县内从事金属加工的零部件企业的负责人一脸苦涩地说：“不能配合丰田的计划”。2021年秋季以后接连出现制造完成的零部件的库存在保管场所里放不下，只能摆满工厂地板的情况。该公司按照（丰田）指定的量完成了零部件的制造，但在交货之前丰田一次又一次下调生产计划，结果造成剩余。上班的员工只能被迫做一些无关紧要的打扫和制作文件的工作。
2022年度，世界各地的零部件短缺加剧，丰田的生产计划不得不三次下调。供应商的不满逐渐积聚。
“立刻就可以拿到想要的零部件的时代已经结束”，丰田相关人员越来越有危机感。采购本部的本部长熊仓和生承认“（部分半导体）不能优先面向汽车供应”。采购陷入困境的主要是老款的半导体。与最尖端、利润率高的产品相比，半导体厂商增产的益处很少，容易出现短缺。
丰田为了稳定生产，要求零部件企业增加半导体库存。考虑到更易于应对产量变化，丰田也开始尽早向这些企业转达生产计划。
以中美脱钩等为契机，“轻资产运营”模式迎来了转变。日本国内制造业的原材料库存3年增至原来的1.5倍。使用大量半导体的电装（DENSO）为了确保库存量，已开始签订长期合同采购。即使冒着库存积压的风险，“也要防止生产线停产”（电装高管）这种想法越来越强烈。
丰田已着手调整汽车设计。计划减少特殊订制品，改为大量使用通用品。爱信集团社长吉田守孝说：“在难以采购的半导体中，一半将换成替代品”。
对于丰田等来说，或许需要确保一定程度的库存及保留更换成替代品的余地等，进一步打磨以防万一的“Just in Case”模式。 20230324周五
“丰田与供应商是血脉相通的关系”。
2月24日，在东京都港区的新高轮格兰王子大饭店（Grand Prince Hotel Shin Takanawa），丰田邀请来了约700名全球供应商的负责人，丰田章男社长引用恩人的话如此说道。创始人丰田喜一郎也曾表示“供应商是我们公司的分工厂”等，与供应商“共存共荣”一直是丰田竞争力的源泉。如今，这种信任关系正在动摇。
在爱知县内从事金属加工的零部件企业的负责人一脸苦涩地说：“不能配合丰田的计划”。2021年秋季以后接连出现制造完成的零部件的库存在保管场所里放不下，只能摆满工厂地板的情况。该公司按照（丰田）指定的量完成了零部件的制造，但在交货之前丰田一次又一次下调生产计划，结果造成剩余。上班的员工只能被迫做一些无关紧要的打扫和制作文件的工作。
2022年度，世界各地的零部件短缺加剧，丰田的生产计划不得不三次下调。供应商的不满逐渐积聚。
“立刻就可以拿到想要的零部件的时代已经结束”，丰田相关人员越来越有危机感。采购本部的本部长熊仓和生承认“（部分半导体）不能优先面向汽车供应”。采购陷入困境的主要是老款的半导体。与最尖端、利润率高的产品相比，半导体厂商增产的益处很少，容易出现短缺。
丰田为了稳定生产，要求零部件企业增加半导体库存。考虑到更易于应对产量变化，丰田也开始尽早向这些企业转达生产计划。
以中美脱钩等为契机，“轻资产运营”模式迎来了转变。日本国内制造业的原材料库存3年增至原来的1.5倍。使用大量半导体的电装（DENSO）为了确保库存量，已开始签订长期合同采购。即使冒着库存积压的风险，“也要防止生产线停产”（电装高管）这种想法越来越强烈。
丰田已着手调整汽车设计。计划减少特殊订制品，改为大量使用通用品。爱信集团社长吉田守孝说：“在难以采购的半导体中，一半将换成替代品”。
对于丰田等来说，或许需要确保一定程度的库存及保留更换成替代品的余地等，进一步打磨以防万一的“Just in Case”模式。 20230324周五
中华人民共和国国家标准
GB 31660.1-2019 食品安全国家标准
水产品中大环内酯类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
（转载自：https://t.cn/A6CBi1so）
前言
本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。
本标准系首次发布。
1范围
本标准规定了水产品中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于水产品中鱼、虾、蟹、贝类等的可食组织中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌9种大环内酯类药物残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中大环内酯类药物的残留经乙腈提取，正己烷除脂、中性氧化铝柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。
4试剂与材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。
4.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。
4.1.3正己烷（C6H14）：色谱纯。
4.1.4甲酸（HCOOH）：色谱纯
4.1.5 乙酸铵（CH3COONH4）。
4.1.6异丙醇[（CH3）2CHOH]。
4.2溶液配制
4.2.1乙腈饱和正己烷： 取正己烷200 mL于250 mL分液漏斗中加入适量乙腈后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙腈层即得。
4.2.2 0.05mol/L乙酸铵溶液；取乙酸铵0.77 g，用水溶解并稀释至200 mL。
4.2.3 0.1%甲酸溶液：取甲酸1 mL，用水溶解并稀释至1000 mL。
4.2.4定容液：取乙腈20 mL和乙酸铵溶液80 mL，混合均匀。
4.3标准品
竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素含量≥92.0%，吉他霉素≥72.0%，具体内容参见附录A。
4.4标准溶液制备
4.4.1标准储备液：取竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星和泰乐菌素标准品各适量（相当于各活性成分10mg），精密称定，分别于100mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100μg/mL大环内酯类药物标准储备液。红霉素、克拉霉素和泰乐菌素-20℃以下避光保存，竹桃霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星4℃以下避光保存，有效期3个月。
4.4.2混合标准工作液：精密量取标准储备液各1mL，于10mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL大环内酯类药物混合标准工作液。4℃以下避光保存，有效期1个月。
4.5 材料
4.5. 1中性氧化铝固相萃取柱：2g/6mL，或相当者。
4.5.2尼龙微孔滤膜：0. 22μm。
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。
5.2 分析天平：感量0.00001 g和0.01 g。
5.3氮吹仪。
5.4涡旋振荡器：3000r/min。
5.5移液枪：200μL，1mL，5mL。
5.6 离心机：4000r/min。
5.7梨形瓶：100mL。
5.8超声波振荡器。
5.9旋转蒸发器。
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质：
a） 取均质后的供试样品，作为供试试料；
b） 取均质后的空白样品，作为空白试料；
c） 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
6.2试料的保存
-18℃以下保存，3个月内进行分析检测。
7测定步骤
7.1 提取
取试料5g（准确至±20mg），于50mL塑料离心管中加入乙腈20 mL，于涡旋振荡器上以2000r/min涡旋1min，超声5min，以3500r/min离心6min，取上清液转移至另一离心管中，残渣再加乙腈15 mL，重复提取一次，合并上清液，备用。
7.2 净化
中性氧化铝固相萃取柱预先用乙腈5mL活化，取备用液过柱，用乙腈5mL洗脱，收集洗脱液于梨形瓶中，加入异丙醇4mL， 40℃旋转蒸发至干。精密加入定容液2mL溶解残余物，加乙腈饱和正己烷2mL，转至10mL离心管中，涡旋10s，以3000r/min离心8min，取下层清液过0. 22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。
7.3基质匹配标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液适量，用空白样品提取液溶解稀释，配制成大环内酯类药物浓度为1ng/mL、5ng/mL、20ng/mL、100ngmL、250ng/mL、500ng/mL和1000ng/mL的系列基质标准工作溶液；现配现用。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.4 测定
7.4.1液相色谱参考条件
a） 色谱柱：C18 色谱柱（150mm×2.0mm，5μm）或相当者；
b） 流动相：A 为0.1%的甲酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱条件见表1；
c） 流速：0.2mL/min；
d） 柱温：30℃；
e） 进样量：10μL。
7.4.2质谱参考条件
a） 离子源：电喷雾（ESI）离子源；
b） 扫描方式：正离子扫描；
c） 检测方式：多反应监测；
d） 喷雾电压：4000V；
e） 离子传输毛细管温度：350℃；
f） 雾化气压力：248kPa；
g） 辅助气压力：48kPa；
h） 定性离子对、定量离子对和碰撞能量见表2。
7.4.3 测定法
7.4.3.1定性测定
在同样测试条件下，试样溶液中大环内酯类药物的保留时间与标准工作液中大环内酯类药物的保留时间之比，偏差在±5%以内，且检测到的离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符合表3要求。
7.4.3.2 定量测定
按7.4.1和7.4.2设定仪器条件以基质标准干作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，作单点或多点校准，按外标法计算试样中药物的残留量，定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片。标准溶液特征离子质量色谱图参见阳录B。
7.5 空白试验
除不加试料外，均按上述测定步骤进行。
8结果计算和表述
试样中待侧药物的残留量按式（1）计算。
X= (C_S×A×V)/(A_S×m) ……………………………………………（1）
式中：
X——试样中被测组分的残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；
Cs——标准工作液测得的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；
A——试样溶波中被测组分峰面积；
As——标准工作液被测组分峰面积；
V——试样容液定容体积，单位为毫开（mL）；
m——试科质量：单位为克（g）
计算结果需扣除空白值，测定结果用2 次平行测定的算术平均值表示保留3位有效数字。
9方法灵敏度、准确度和精密度
9.1灵敏度
本方法的检测限为1.0μg/kg；红霉聚、替米考星定量限为2.0μg/kg，竹桃霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰乐菌素定量限为4.0μg/kg。
9.2 准确度
红霉素、替米考星在2.0μg/kg~40μg/kg添加浓度的回收率为70%~120%；竹桃霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰乐菌素在4.0μg/kg~40μg/kg添加浓度的回收率为70%~120%。
9.3 精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%。
GB 31660.1-2019 食品安全国家标准
水产品中大环内酯类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
（转载自：https://t.cn/A6CBi1so）
前言
本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。
本标准系首次发布。
1范围
本标准规定了水产品中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于水产品中鱼、虾、蟹、贝类等的可食组织中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌9种大环内酯类药物残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中大环内酯类药物的残留经乙腈提取，正己烷除脂、中性氧化铝柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。
4试剂与材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。
4.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。
4.1.3正己烷（C6H14）：色谱纯。
4.1.4甲酸（HCOOH）：色谱纯
4.1.5 乙酸铵（CH3COONH4）。
4.1.6异丙醇[（CH3）2CHOH]。
4.2溶液配制
4.2.1乙腈饱和正己烷： 取正己烷200 mL于250 mL分液漏斗中加入适量乙腈后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙腈层即得。
4.2.2 0.05mol/L乙酸铵溶液；取乙酸铵0.77 g，用水溶解并稀释至200 mL。
4.2.3 0.1%甲酸溶液：取甲酸1 mL，用水溶解并稀释至1000 mL。
4.2.4定容液：取乙腈20 mL和乙酸铵溶液80 mL，混合均匀。
4.3标准品
竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素含量≥92.0%，吉他霉素≥72.0%，具体内容参见附录A。
4.4标准溶液制备
4.4.1标准储备液：取竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星和泰乐菌素标准品各适量（相当于各活性成分10mg），精密称定，分别于100mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100μg/mL大环内酯类药物标准储备液。红霉素、克拉霉素和泰乐菌素-20℃以下避光保存，竹桃霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星4℃以下避光保存，有效期3个月。
4.4.2混合标准工作液：精密量取标准储备液各1mL，于10mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL大环内酯类药物混合标准工作液。4℃以下避光保存，有效期1个月。
4.5 材料
4.5. 1中性氧化铝固相萃取柱：2g/6mL，或相当者。
4.5.2尼龙微孔滤膜：0. 22μm。
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。
5.2 分析天平：感量0.00001 g和0.01 g。
5.3氮吹仪。
5.4涡旋振荡器：3000r/min。
5.5移液枪：200μL，1mL，5mL。
5.6 离心机：4000r/min。
5.7梨形瓶：100mL。
5.8超声波振荡器。
5.9旋转蒸发器。
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质：
a） 取均质后的供试样品，作为供试试料；
b） 取均质后的空白样品，作为空白试料；
c） 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
6.2试料的保存
-18℃以下保存，3个月内进行分析检测。
7测定步骤
7.1 提取
取试料5g（准确至±20mg），于50mL塑料离心管中加入乙腈20 mL，于涡旋振荡器上以2000r/min涡旋1min，超声5min，以3500r/min离心6min，取上清液转移至另一离心管中，残渣再加乙腈15 mL，重复提取一次，合并上清液，备用。
7.2 净化
中性氧化铝固相萃取柱预先用乙腈5mL活化，取备用液过柱，用乙腈5mL洗脱，收集洗脱液于梨形瓶中，加入异丙醇4mL， 40℃旋转蒸发至干。精密加入定容液2mL溶解残余物，加乙腈饱和正己烷2mL，转至10mL离心管中，涡旋10s，以3000r/min离心8min，取下层清液过0. 22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。
7.3基质匹配标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液适量，用空白样品提取液溶解稀释，配制成大环内酯类药物浓度为1ng/mL、5ng/mL、20ng/mL、100ngmL、250ng/mL、500ng/mL和1000ng/mL的系列基质标准工作溶液；现配现用。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.4 测定
7.4.1液相色谱参考条件
a） 色谱柱：C18 色谱柱（150mm×2.0mm，5μm）或相当者；
b） 流动相：A 为0.1%的甲酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱条件见表1；
c） 流速：0.2mL/min；
d） 柱温：30℃；
e） 进样量：10μL。
7.4.2质谱参考条件
a） 离子源：电喷雾（ESI）离子源；
b） 扫描方式：正离子扫描；
c） 检测方式：多反应监测；
d） 喷雾电压：4000V；
e） 离子传输毛细管温度：350℃；
f） 雾化气压力：248kPa；
g） 辅助气压力：48kPa；
h） 定性离子对、定量离子对和碰撞能量见表2。
7.4.3 测定法
7.4.3.1定性测定
在同样测试条件下，试样溶液中大环内酯类药物的保留时间与标准工作液中大环内酯类药物的保留时间之比，偏差在±5%以内，且检测到的离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符合表3要求。
7.4.3.2 定量测定
按7.4.1和7.4.2设定仪器条件以基质标准干作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，作单点或多点校准，按外标法计算试样中药物的残留量，定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片。标准溶液特征离子质量色谱图参见阳录B。
7.5 空白试验
除不加试料外，均按上述测定步骤进行。
8结果计算和表述
试样中待侧药物的残留量按式（1）计算。
X= (C_S×A×V)/(A_S×m) ……………………………………………（1）
式中：
X——试样中被测组分的残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；
Cs——标准工作液测得的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；
A——试样溶波中被测组分峰面积；
As——标准工作液被测组分峰面积；
V——试样容液定容体积，单位为毫开（mL）；
m——试科质量：单位为克（g）
计算结果需扣除空白值，测定结果用2 次平行测定的算术平均值表示保留3位有效数字。
9方法灵敏度、准确度和精密度
9.1灵敏度
本方法的检测限为1.0μg/kg；红霉聚、替米考星定量限为2.0μg/kg，竹桃霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰乐菌素定量限为4.0μg/kg。
9.2 准确度
红霉素、替米考星在2.0μg/kg~40μg/kg添加浓度的回收率为70%~120%；竹桃霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰乐菌素在4.0μg/kg~40μg/kg添加浓度的回收率为70%~120%。
9.3 精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%。
中华人民共和国国家标准
GB/T 30955-2014 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定
免疫亲和柱净化-高效液相色谱法
（转载自：https://t.cn/A6C15Osu）
1范围
本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的免疫亲和层析净化高效液相色谱法的测定方法。
本标准适用于饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。
本标准的检测限：黄曲霉毒素B1为0.2μg/kg，黄曲霉毒素B2为0.2μg/kg，黄曲霉毒素G1为0.3μg/kg，黄曲霉毒素G2为0.3 μg/kg。
本标准的定量限：黄曲霉毒素B1为1.0μg/kg，黄曲霉毒素B2为1.0μg/kg，黄曲霉毒素G1为1.0μg/kg，黄曲霉毒素G2为1.0μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1饲料 采样
GB/T 20195动物饲料 试样的制备
3原理
试样经过甲醇-水提取后，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析柱层析净化，经高效液相色谱仪分离，荧光检测器柱后光化学衍生测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。
4试剂
除非另有说明，均为分析纯的试剂；实验室用水符合GB/T6682中二级用水规定，标准溶液和流动相用水符合一级用水规定。
4.1甲醇：色谱纯。
4.2苯： 色谱纯。
4.3乙腈：色谱纯。
4.4甲醇+水（8+2）：取 80 mL甲醇（4.1）加20 mL水，混合均匀。
4.5 甲醇+水（45+55）：取45 mL甲醇（4.1）加55 mL水，混合均匀。
4.6苯+乙 腈（98+2）：取2 mL乙腈（4.3）加入98 mL苯（4.2），混合均匀。
4.7黄曲霉毒素标准储备溶液：用苯+乙腈（98+2）溶液（4.6）分别配制0.100 mg/mL的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备液，保存于4℃备用，可使用1年。
4.8黄曲霉毒素混合标准工作液：准确移取适量的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备溶液（4.7）， 50℃下，氮气吹干仪吹干，用适量的甲醇+水（45+ 55）溶液（4.5）定容为混合标准工作液，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各分别为0 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/ mL、50 ng/mL。
4.9 PBS缓冲溶液：称取8.0 g氯化钠，1.2 g磷酸氢二钠，0.2 g磷酸二氢钾，0.2 g氯化钾，用990 mL 纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0， 最后用纯水稀释至1000 mL。
4.10次氯酸钠。
5仪器和设备
实验室常规仪器、设备、材料及下列各项。
5.1 高速均质器，18 000 r/ min~22 000 r/min，或震荡器。
5.2 黄曲霉毒素免疫亲和柱，柱容量≥300 ng。
5.3玻璃纤维滤纸，直径 11 cm，孔径1.5 μm。
5.4玻璃定量管，10 mL。
5.5 氮吹仪，50℃。
5.6 光化学衍生系统。
5.7高效液相色谱仪，带荧光检测器。
6试样采集与制备
按GB/T 14699.1采样；按GB/T 20195用四分法缩减至500 g，粉碎后过1 mm孔径的分析筛，混匀后装入密闭容器，冷藏保存。
7分析步骤
7.1 提取
称取试样（粒度小于1mm）50.0 g于250 mL具塞锥形瓶中，加入5.0 g氯化钠及准确加入100.0 mL（V1）甲醇+水（8+2）溶液（4.4），以均质器高速搅拌提取2 min，或震荡器震荡30 min。定量滤纸过滤，准确移取10.0 mL（V2 ）滤液并加入40.0 mL（V3 ）PBS缓冲溶液（4.9）稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1~2次，至滤液澄清，备用。
7.2净化
将免疫亲和柱连接于10.0 mL玻璃定量管下。准确移取10.0 mL（V，）样品提取液注入玻璃定量管中，将空气压力泵与玻璃定量管连接，调节压力使溶液以不超过2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，待溶液全部流出后，以10.0 mL纯水清洗柱子2次，弃去全部流出液。准确加入1.0 mL（V）甲醇（4.1） 洗脱，流速不超过1mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，加纯水定容为2.0mL，供色谱检测用。
7.3测定
7.3.1色谱条件
色谱柱：C18柱，长150 mm，内径4.6 mm，填料直径5μm，或相当者。
流动相：甲醇+水（45+ 55）溶液（4.5）。
流速：0.8 mL/min。
检测波长：激发波长360 nm；发射波长440 nm。
光化学衍生系统。
柱温：30 ℃。
进样量：20μL。
7.3.2色谱测定
分别取相同体积样液和标准工作溶液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰高或峰面积）。经过与黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准溶液谱图比较响应值得到试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的浓度c（μg/L）。标准品色谱图参见附录A。
警告——黄曲霉毒素是高致癌性物质，应十分小心处理。使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用5%浓度次氯酸钠溶液浸泡过夜。
8结果计算与表述
8.1 结果计算
试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量以质量分数Xi计，单位为微克每千克（μg/kg），按式（1）计算：
image.png
式中：
Pi——试样溶液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各组分的峰面积值；
Vi——样品的总稀释体积，单位为毫升（mL）；
ci——黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各标准溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；
V——标准溶液的进样体积（μL）；
P——黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各标准溶液峰面积平均值；
m——试样质量，单位为克（g）。
8.2 结果表示
测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结果表示到小数点后一位。
9重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。
GB/T 30955-2014 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定
免疫亲和柱净化-高效液相色谱法
（转载自：https://t.cn/A6C15Osu）
1范围
本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的免疫亲和层析净化高效液相色谱法的测定方法。
本标准适用于饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。
本标准的检测限：黄曲霉毒素B1为0.2μg/kg，黄曲霉毒素B2为0.2μg/kg，黄曲霉毒素G1为0.3μg/kg，黄曲霉毒素G2为0.3 μg/kg。
本标准的定量限：黄曲霉毒素B1为1.0μg/kg，黄曲霉毒素B2为1.0μg/kg，黄曲霉毒素G1为1.0μg/kg，黄曲霉毒素G2为1.0μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1饲料 采样
GB/T 20195动物饲料 试样的制备
3原理
试样经过甲醇-水提取后，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析柱层析净化，经高效液相色谱仪分离，荧光检测器柱后光化学衍生测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。
4试剂
除非另有说明，均为分析纯的试剂；实验室用水符合GB/T6682中二级用水规定，标准溶液和流动相用水符合一级用水规定。
4.1甲醇：色谱纯。
4.2苯： 色谱纯。
4.3乙腈：色谱纯。
4.4甲醇+水（8+2）：取 80 mL甲醇（4.1）加20 mL水，混合均匀。
4.5 甲醇+水（45+55）：取45 mL甲醇（4.1）加55 mL水，混合均匀。
4.6苯+乙 腈（98+2）：取2 mL乙腈（4.3）加入98 mL苯（4.2），混合均匀。
4.7黄曲霉毒素标准储备溶液：用苯+乙腈（98+2）溶液（4.6）分别配制0.100 mg/mL的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备液，保存于4℃备用，可使用1年。
4.8黄曲霉毒素混合标准工作液：准确移取适量的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备溶液（4.7）， 50℃下，氮气吹干仪吹干，用适量的甲醇+水（45+ 55）溶液（4.5）定容为混合标准工作液，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各分别为0 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/ mL、50 ng/mL。
4.9 PBS缓冲溶液：称取8.0 g氯化钠，1.2 g磷酸氢二钠，0.2 g磷酸二氢钾，0.2 g氯化钾，用990 mL 纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0， 最后用纯水稀释至1000 mL。
4.10次氯酸钠。
5仪器和设备
实验室常规仪器、设备、材料及下列各项。
5.1 高速均质器，18 000 r/ min~22 000 r/min，或震荡器。
5.2 黄曲霉毒素免疫亲和柱，柱容量≥300 ng。
5.3玻璃纤维滤纸，直径 11 cm，孔径1.5 μm。
5.4玻璃定量管，10 mL。
5.5 氮吹仪，50℃。
5.6 光化学衍生系统。
5.7高效液相色谱仪，带荧光检测器。
6试样采集与制备
按GB/T 14699.1采样；按GB/T 20195用四分法缩减至500 g，粉碎后过1 mm孔径的分析筛，混匀后装入密闭容器，冷藏保存。
7分析步骤
7.1 提取
称取试样（粒度小于1mm）50.0 g于250 mL具塞锥形瓶中，加入5.0 g氯化钠及准确加入100.0 mL（V1）甲醇+水（8+2）溶液（4.4），以均质器高速搅拌提取2 min，或震荡器震荡30 min。定量滤纸过滤，准确移取10.0 mL（V2 ）滤液并加入40.0 mL（V3 ）PBS缓冲溶液（4.9）稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1~2次，至滤液澄清，备用。
7.2净化
将免疫亲和柱连接于10.0 mL玻璃定量管下。准确移取10.0 mL（V，）样品提取液注入玻璃定量管中，将空气压力泵与玻璃定量管连接，调节压力使溶液以不超过2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，待溶液全部流出后，以10.0 mL纯水清洗柱子2次，弃去全部流出液。准确加入1.0 mL（V）甲醇（4.1） 洗脱，流速不超过1mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，加纯水定容为2.0mL，供色谱检测用。
7.3测定
7.3.1色谱条件
色谱柱：C18柱，长150 mm，内径4.6 mm，填料直径5μm，或相当者。
流动相：甲醇+水（45+ 55）溶液（4.5）。
流速：0.8 mL/min。
检测波长：激发波长360 nm；发射波长440 nm。
光化学衍生系统。
柱温：30 ℃。
进样量：20μL。
7.3.2色谱测定
分别取相同体积样液和标准工作溶液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰高或峰面积）。经过与黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准溶液谱图比较响应值得到试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的浓度c（μg/L）。标准品色谱图参见附录A。
警告——黄曲霉毒素是高致癌性物质，应十分小心处理。使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用5%浓度次氯酸钠溶液浸泡过夜。
8结果计算与表述
8.1 结果计算
试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量以质量分数Xi计，单位为微克每千克（μg/kg），按式（1）计算：
image.png
式中：
Pi——试样溶液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各组分的峰面积值；
Vi——样品的总稀释体积，单位为毫升（mL）；
ci——黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各标准溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；
V——标准溶液的进样体积（μL）；
P——黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各标准溶液峰面积平均值；
m——试样质量，单位为克（g）。
8.2 结果表示
测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结果表示到小数点后一位。
9重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。
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