#化学每日一文# 【热点文章】 大别山区金寨县杂交天麻和红天麻质量差异分析
引用本文：巩晴晴, 俞年军, 王广政, 等. 大别山区金寨县杂交天麻和红天麻质量差异分析[J]. 化学试剂, 2022，44（11）:1650-1656.
DOI: 10.13822 /j.cnki.hxsj.2022.0130
背景介绍
天麻，作为农民新兴的增产增收中药材之一，为兰科植物天麻Gastrodia elata Bl.的干燥块茎，具有镇静、抗惊厥、增智健脑等药理作用。天麻成分复杂，主要含有酚类、苷类、甾醇等化学成分。对含有多变量的天麻药材进行整合，统一分析，旨在全面反映中药质量的差异性十分重要。金寨县位于大别山腹地，自然环境优良，天麻种植规模大，产量高，是皖西天麻的主要产地之一，探究杂交天麻与红天麻品种间内在质量差异性问题，对于推动金寨天麻的广泛生产有重要意义。
文章亮点
1. 通过指纹图谱结合主成分综合评价分析大别山区金寨县天麻质量差异性；
2. 采用中药指纹图谱软件结合6个成分含量测定以及主成分综合评价对21批金寨天麻药材进行分析；
3.比较了大别山金寨县杂交天麻和红天麻的质量差异性，探究其差异在品种间的规律。
内容介绍
1实验部分
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验方法
1.2.1 HPLC色谱条件
色谱柱：C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；检测波长270 nm；柱温35 ℃；进样量10 μL；体积流量1.0 mL/min；流动相为甲醇（B）-0.1%磷酸溶液（A），0 ~ 20 min，8% B；20 ~ 55 min，8% B→40% B；55 ~ 60 min，40% B→50% B；60 ~ 65 min，50% B→8% B；65 ~ 70 min，8% B。
1.2.2 供试品溶液的制备
采集新鲜天麻样品后，按2020《中国药典》所载方法处理成粉。精密称取1.0 g天麻粉，加入25 mL稀乙醇，称重，超声处理40 min，冷却，称重，用提取溶剂补足减少的重量。取滤液10 mL浓缩，用10%甲醇溶解定容至10mL量瓶中，约取1 mL溶液用0.45 μm膜滤过，即得。
2结果与讨论
2.1 方法学考察
2.1.1 线性关系考察
加10%甲醇制成含0.333 mg/mL天麻素、0.729 mg/mL对羟基苯甲醇、0.335 mg/mL巴利森苷E、0.616 mg/mL巴利森苷B、0.272 mg/mL巴利森苷C、0.996 mg/mL巴利森苷A的混合对照品溶液。精密量取0.5、1、2、3、4、5 mL此溶液，置5 mL容量瓶中，制成对照品溶液。
2.1.2 精密度试验
2.1.3 重复性试验
2.1.4 稳定性试验
2.1.5 加样回收率试验
精密称取已测定的6种成分含量的天麻药材粉末（S15）9份，每份0.5 g，分成3组，每组3份，分别精密加入0.121 mg/mL天麻素、0.058 mg/mL对羟基苯甲醇、0.061 mg/mL巴利森苷E、0.11 mg/mL巴利森苷B、0.032 mg/mL巴利森苷C、0.143 mg/mL巴利森苷A的0.5、0.7、1.0 mL混合对照溶液，照1.2.1项下色谱条件进样测定，计算平均加样回收率。
2.1.6 天麻药材含量测定
取21批金寨天麻药材，平行3份，按1.2.2方法制备溶液，按1.2.1色谱条件进行测定，记录峰面积，计算天麻除去含水量后的6种化学成分含量（见表3）。结果表明，各成分含量RSD分别为天麻素27.809%、对羟基苯甲醇38.964%、巴利森苷E 25.238%、巴利森苷B 24.231%、巴利森苷C 36.680%、巴利森苷A 35.379%。
2.2 天麻药材指纹图谱的建立及共有峰的标定
2.2.1 天麻药材指纹图谱的建立
分别精密称取21批1.0 g金寨天麻药材，按1.2.2方法制备溶液，1.2.1色谱条件测定，在图谱软件中，设置S15为参照图谱，时间窗宽度为0.1min，校正后确定了11个共有峰，得到天麻药材指纹图谱叠加图，见图1；生成金寨天麻药材的共有模式特征图谱，见图2。
2.2.2 天麻药材指纹图谱共有峰的标定
与对照品的图谱进行比较指认了其中6个共有峰，分别为天麻素（2号峰）、对羟基苯甲醇（3号峰）、巴利森苷E（5号峰）、巴利森苷B（8号峰）、巴利森苷C（9号峰）、巴利森苷A（10号峰）。
2.2.3 天麻药材指纹图谱的相似度评价
计算大别山区金寨县天麻药材相似度，结果见表4，21批杂交天麻和红天麻药材的相似度全在0.900以上。
2.3 聚类分析
采用SPSS 23.0软件，以21批天麻药材共有峰的峰面积为变量，生成聚类分析图，见图3。当分类距离为15时，S1 ~ S13杂交天麻、S17、S21样品聚为一类；S15 ~ S16红天麻、S18 ~ S20红天麻、S3、S14各批样品聚为一类。
2.4 主成分分析（PCA）
PCA是将药材的无数个成分变量根据实验结果截取少量实验数据，所选取的少量实验数据对于复杂的中药体系而言，恰恰能够代表主成分数据以表征中药材数据的整体情况[11-13]。为了进一步分析金寨县杂交天麻和红天麻药材间的差异，以主成分的特征值和累积贡献率，整合SPSS对21批天麻药材数据进行PCA分析。
2.5 杂交天麻和红天麻两种变型综合评价
采用3个主成分对21批2种天麻变型进行综合评价。综合评价函数F = 0.41331*F1＋0.28718*F2＋0.09140*F3，杂交天麻和红天麻化学成分各主成分值、综合得分，见表8，结果表明，对大别山区金寨县杂交天麻和红天麻品种间综合得分顺序与品种之间并没有明显相关性，而是表现出一种无序性。
2.6 讨论
本实验条件参考了《中国药典》2020版一部第59页天麻含量测定项下内容、结合田孟华等[14]用70%乙醇水浴回流提取、李平等[15]用稀乙醇超声提取处理，分析天麻有效成分的差异性。考察了回流法、超声提取法，同时比较以不同浓度乙醇作为提取溶剂，结果发现使用50%乙醇超声提取简便高效；在提取时间上考察了超声提取30、40、50 min，发现在40 min各色谱峰响应度、成分分离较好；本实验考察了在220、270 nm双波长检测条件下的色谱峰情况，发现在270 nm条件下能更好地完成实验；同时比较了乙腈（B）-0.1%磷酸水（A）、甲醇（B）-水溶液（A）、甲醇（B）-0.1%磷酸水（A）等梯度洗脱情况，发现采用甲醇（B）-0.1%磷酸水（A）进行梯度洗脱时色谱峰较好。
3结论
本实验就金寨天麻药材建立综合评价函数，结果表明金寨县综合得分较高的天麻在杂交天麻和红天麻间均有存在，但是杂交天麻与红天麻的综合得分存在明显的差异性。实验比较了大别山金寨县杂交天麻和红天麻的质量差异性，探究其差异在品种间的规律，以期推动金寨天麻的广泛生产。
引用本文：巩晴晴, 俞年军, 王广政, 等. 大别山区金寨县杂交天麻和红天麻质量差异分析[J]. 化学试剂, 2022，44（11）:1650-1656.
DOI: 10.13822 /j.cnki.hxsj.2022.0130
背景介绍
天麻，作为农民新兴的增产增收中药材之一，为兰科植物天麻Gastrodia elata Bl.的干燥块茎，具有镇静、抗惊厥、增智健脑等药理作用。天麻成分复杂，主要含有酚类、苷类、甾醇等化学成分。对含有多变量的天麻药材进行整合，统一分析，旨在全面反映中药质量的差异性十分重要。金寨县位于大别山腹地，自然环境优良，天麻种植规模大，产量高，是皖西天麻的主要产地之一，探究杂交天麻与红天麻品种间内在质量差异性问题，对于推动金寨天麻的广泛生产有重要意义。
文章亮点
1. 通过指纹图谱结合主成分综合评价分析大别山区金寨县天麻质量差异性；
2. 采用中药指纹图谱软件结合6个成分含量测定以及主成分综合评价对21批金寨天麻药材进行分析；
3.比较了大别山金寨县杂交天麻和红天麻的质量差异性，探究其差异在品种间的规律。
内容介绍
1实验部分
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验方法
1.2.1 HPLC色谱条件
色谱柱：C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；检测波长270 nm；柱温35 ℃；进样量10 μL；体积流量1.0 mL/min；流动相为甲醇（B）-0.1%磷酸溶液（A），0 ~ 20 min，8% B；20 ~ 55 min，8% B→40% B；55 ~ 60 min，40% B→50% B；60 ~ 65 min，50% B→8% B；65 ~ 70 min，8% B。
1.2.2 供试品溶液的制备
采集新鲜天麻样品后，按2020《中国药典》所载方法处理成粉。精密称取1.0 g天麻粉，加入25 mL稀乙醇，称重，超声处理40 min，冷却，称重，用提取溶剂补足减少的重量。取滤液10 mL浓缩，用10%甲醇溶解定容至10mL量瓶中，约取1 mL溶液用0.45 μm膜滤过，即得。
2结果与讨论
2.1 方法学考察
2.1.1 线性关系考察
加10%甲醇制成含0.333 mg/mL天麻素、0.729 mg/mL对羟基苯甲醇、0.335 mg/mL巴利森苷E、0.616 mg/mL巴利森苷B、0.272 mg/mL巴利森苷C、0.996 mg/mL巴利森苷A的混合对照品溶液。精密量取0.5、1、2、3、4、5 mL此溶液，置5 mL容量瓶中，制成对照品溶液。
2.1.2 精密度试验
2.1.3 重复性试验
2.1.4 稳定性试验
2.1.5 加样回收率试验
精密称取已测定的6种成分含量的天麻药材粉末（S15）9份，每份0.5 g，分成3组，每组3份，分别精密加入0.121 mg/mL天麻素、0.058 mg/mL对羟基苯甲醇、0.061 mg/mL巴利森苷E、0.11 mg/mL巴利森苷B、0.032 mg/mL巴利森苷C、0.143 mg/mL巴利森苷A的0.5、0.7、1.0 mL混合对照溶液，照1.2.1项下色谱条件进样测定，计算平均加样回收率。
2.1.6 天麻药材含量测定
取21批金寨天麻药材，平行3份，按1.2.2方法制备溶液，按1.2.1色谱条件进行测定，记录峰面积，计算天麻除去含水量后的6种化学成分含量（见表3）。结果表明，各成分含量RSD分别为天麻素27.809%、对羟基苯甲醇38.964%、巴利森苷E 25.238%、巴利森苷B 24.231%、巴利森苷C 36.680%、巴利森苷A 35.379%。
2.2 天麻药材指纹图谱的建立及共有峰的标定
2.2.1 天麻药材指纹图谱的建立
分别精密称取21批1.0 g金寨天麻药材，按1.2.2方法制备溶液，1.2.1色谱条件测定，在图谱软件中，设置S15为参照图谱，时间窗宽度为0.1min，校正后确定了11个共有峰，得到天麻药材指纹图谱叠加图，见图1；生成金寨天麻药材的共有模式特征图谱，见图2。
2.2.2 天麻药材指纹图谱共有峰的标定
与对照品的图谱进行比较指认了其中6个共有峰，分别为天麻素（2号峰）、对羟基苯甲醇（3号峰）、巴利森苷E（5号峰）、巴利森苷B（8号峰）、巴利森苷C（9号峰）、巴利森苷A（10号峰）。
2.2.3 天麻药材指纹图谱的相似度评价
计算大别山区金寨县天麻药材相似度，结果见表4，21批杂交天麻和红天麻药材的相似度全在0.900以上。
2.3 聚类分析
采用SPSS 23.0软件，以21批天麻药材共有峰的峰面积为变量，生成聚类分析图，见图3。当分类距离为15时，S1 ~ S13杂交天麻、S17、S21样品聚为一类；S15 ~ S16红天麻、S18 ~ S20红天麻、S3、S14各批样品聚为一类。
2.4 主成分分析（PCA）
PCA是将药材的无数个成分变量根据实验结果截取少量实验数据，所选取的少量实验数据对于复杂的中药体系而言，恰恰能够代表主成分数据以表征中药材数据的整体情况[11-13]。为了进一步分析金寨县杂交天麻和红天麻药材间的差异，以主成分的特征值和累积贡献率，整合SPSS对21批天麻药材数据进行PCA分析。
2.5 杂交天麻和红天麻两种变型综合评价
采用3个主成分对21批2种天麻变型进行综合评价。综合评价函数F = 0.41331*F1＋0.28718*F2＋0.09140*F3，杂交天麻和红天麻化学成分各主成分值、综合得分，见表8，结果表明，对大别山区金寨县杂交天麻和红天麻品种间综合得分顺序与品种之间并没有明显相关性，而是表现出一种无序性。
2.6 讨论
本实验条件参考了《中国药典》2020版一部第59页天麻含量测定项下内容、结合田孟华等[14]用70%乙醇水浴回流提取、李平等[15]用稀乙醇超声提取处理，分析天麻有效成分的差异性。考察了回流法、超声提取法，同时比较以不同浓度乙醇作为提取溶剂，结果发现使用50%乙醇超声提取简便高效；在提取时间上考察了超声提取30、40、50 min，发现在40 min各色谱峰响应度、成分分离较好；本实验考察了在220、270 nm双波长检测条件下的色谱峰情况，发现在270 nm条件下能更好地完成实验；同时比较了乙腈（B）-0.1%磷酸水（A）、甲醇（B）-水溶液（A）、甲醇（B）-0.1%磷酸水（A）等梯度洗脱情况，发现采用甲醇（B）-0.1%磷酸水（A）进行梯度洗脱时色谱峰较好。
3结论
本实验就金寨天麻药材建立综合评价函数，结果表明金寨县综合得分较高的天麻在杂交天麻和红天麻间均有存在，但是杂交天麻与红天麻的综合得分存在明显的差异性。实验比较了大别山金寨县杂交天麻和红天麻的质量差异性，探究其差异在品种间的规律，以期推动金寨天麻的广泛生产。
伤感文案：有幸在风华正茂的年纪明白爱最没用。
1.后来，我有了新的爱的人了，我发的状态，写的话，听的歌，想到的都是他，通通与你无关了。所以你看，其实人是可以爱上别人的。
2.其实我从来没有选择放弃你，但你的态度打的我好痛。
3.我始终冥顽不灵，不听劝阻，一头栽进这尘世里，跌跌撞撞，满身旧疮，也不愿向命数低头，盼它怜悯半分时运。
4.我们的距离就是，我没睡，你也没睡，手机没响，熬着相同的夜，只是各自的圆缺。
5.当离别的那一刻真正到来，才发觉内心千千万万次预演都轻如鸿毛。
6.亲爱的，永远可是很长很长的时间，而时间会改变很多事情的。
7.你还是容易心动，你还是爱着他那款，你永远做好了为爱投入全部的准备，你不可能吸取教训，你是一个碰到感情就完蛋的人。
8.听闻爱情，十人九悲。听闻誓言，十诺九谎。听闻过往，十忆九伤，听闻后来，始终一人。
9.我们做过的事，遇到的人，以及所有的喜怒悲欢，都会浓缩成一个很感伤的词，过去。
10.感情怎么说呢，像杀手一样冷酷无情，又像风一样捉摸不透，吹过所有人，却不会为任何人停留。
11.时间递过来第一个刺骨的词，跟随人群往大海里走，我把绝望包裹得很紧。
12.最后的最后，故事结尾，心上人都是远方人。
13.女人在床上流的眼泪，比在任何一个地方多，男人在床上说的谎话，也比任何一个地方多。
14.别喝酒了对胃不好，别抽烟了对肺不好，别熬夜了对身体不好，别想他了对心脏不好。
15.以前觉得世上告别仪式挺多，比如喝酒、旅行、痛哭一场，其实告别都是悄无声息的，即使没有隔山隔水也没有再重逢。
16.感情，有时候就是一个前人栽树，后人乘凉的过程，可是，我教你学会爱，不是叫你去爱别人的。
17.他爱你是真的，他花心也是真的，他的感情就像是廉价的街边传单，走过路过的人，人手一份，并不是单独给你的。
1.后来，我有了新的爱的人了，我发的状态，写的话，听的歌，想到的都是他，通通与你无关了。所以你看，其实人是可以爱上别人的。
2.其实我从来没有选择放弃你，但你的态度打的我好痛。
3.我始终冥顽不灵，不听劝阻，一头栽进这尘世里，跌跌撞撞，满身旧疮，也不愿向命数低头，盼它怜悯半分时运。
4.我们的距离就是，我没睡，你也没睡，手机没响，熬着相同的夜，只是各自的圆缺。
5.当离别的那一刻真正到来，才发觉内心千千万万次预演都轻如鸿毛。
6.亲爱的，永远可是很长很长的时间，而时间会改变很多事情的。
7.你还是容易心动，你还是爱着他那款，你永远做好了为爱投入全部的准备，你不可能吸取教训，你是一个碰到感情就完蛋的人。
8.听闻爱情，十人九悲。听闻誓言，十诺九谎。听闻过往，十忆九伤，听闻后来，始终一人。
9.我们做过的事，遇到的人，以及所有的喜怒悲欢，都会浓缩成一个很感伤的词，过去。
10.感情怎么说呢，像杀手一样冷酷无情，又像风一样捉摸不透，吹过所有人，却不会为任何人停留。
11.时间递过来第一个刺骨的词，跟随人群往大海里走，我把绝望包裹得很紧。
12.最后的最后，故事结尾，心上人都是远方人。
13.女人在床上流的眼泪，比在任何一个地方多，男人在床上说的谎话，也比任何一个地方多。
14.别喝酒了对胃不好，别抽烟了对肺不好，别熬夜了对身体不好，别想他了对心脏不好。
15.以前觉得世上告别仪式挺多，比如喝酒、旅行、痛哭一场，其实告别都是悄无声息的，即使没有隔山隔水也没有再重逢。
16.感情，有时候就是一个前人栽树，后人乘凉的过程，可是，我教你学会爱，不是叫你去爱别人的。
17.他爱你是真的，他花心也是真的，他的感情就像是廉价的街边传单，走过路过的人，人手一份，并不是单独给你的。
Day 316
p1 店员：这是为本月生日的顾客准备的礼物（搜了一下第一家店1971年开的[喵喵]即使是清库存，看在白嫖冰震浓缩份上打个广告）
p2p3p4 大悦和苏州中心这两家西西弗的车票居然不一样，是哪家印刷厂偷工减料了！（虽然杨波淘汰了，但oneliner能在延津不被花二娘压山（虽然脱5不好看，但刘老师这小说解个烦闷很可以，特别是喜欢六里庄遗事人生海海第七天的话（瞎子老董最心明眼亮，明亮也果然有慧根，跟人的情分都在几条烟几瓶酒里了，做人的本分都在猪脚里了
p5 解锁东北春饼和黄豆酱炒蛋，虽咸但好吃
p6 解锁潮汕甘草水果和鱼册，真没想到最好吃的是锅底里的大蒜
p7p8p9 生活带点绿 这周过得去
p1 店员：这是为本月生日的顾客准备的礼物（搜了一下第一家店1971年开的[喵喵]即使是清库存，看在白嫖冰震浓缩份上打个广告）
p2p3p4 大悦和苏州中心这两家西西弗的车票居然不一样，是哪家印刷厂偷工减料了！（虽然杨波淘汰了，但oneliner能在延津不被花二娘压山（虽然脱5不好看，但刘老师这小说解个烦闷很可以，特别是喜欢六里庄遗事人生海海第七天的话（瞎子老董最心明眼亮，明亮也果然有慧根，跟人的情分都在几条烟几瓶酒里了，做人的本分都在猪脚里了
p5 解锁东北春饼和黄豆酱炒蛋，虽咸但好吃
p6 解锁潮汕甘草水果和鱼册，真没想到最好吃的是锅底里的大蒜
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