在华为引人注目的创新后面有一个很重要的支持因素
自1997年起美国政府就不断抛出出口管制“实体名单”，来限制对名单上的企业或机构出口、进口或转口一些高端技术产品,目前被列入这个实体清单的中国企业已超过300家。2019年美商务部又宣布将中国一批公司列入这一“实体名单”，其中就包括华为及其附属公司，在其禁令影响下英国芯片设计商ARM也暂停了与华为的全部业务。当即就有分析师指出这将极大地影响华为开发自己芯片的能力，因为华为旗下海思的许多芯片都是使用ARM的基础技术制造的。然而，没想到没过多久，华为海思总裁何庭波就在一封致员工信中抛出了华为的“备胎”计划——因为早前就有被美国断供的假设，海思已为公司的生存打造好了“备胎”。这一举措很好地为国人演绎了一把《孙子兵法》中提到的“上兵伐谋，其次伐交，其次伐兵，其下攻城”的战略谋划，而令美国大跌眼镜。那么，华为何以能很早就掌握了这些高端芯片技术呢？无疑靠的是创新能力和创新技术的不断积累，而这些创新能力又从何而来呢？经我们多年的研究发现这绝不单纯仅是技术的创新，而是一个创新集合体，更重要的是这个创新体系背后的一个关键元素。下面文菲君就把其重要的几个创新项给大家介绍一下。
㈠华为首当其冲的创新是技术创新
华为有句话是“研发的10%投不下去是要被砍头的”。从1992年开始，华为就坚持将每年销售额的至少10%投入研发，到2013年华为的研发投入已到12.8%，达到53亿美金；至2018年其研发投入已经超越了微软，苹果和Intel（英特尔），这是他们能够保持在5G技术上领先的关键因素。华为在全球有16个研发中心，有7万多人的研发队伍，特别是俄罗斯研究所和法国研究所，曾在华为的2G、3G研究方面做出了重大贡献。
㈡ 华为的制度创新：“人人有股”
提到华为公司的股票激励制度几乎是业内无人不知、无人不晓的一大举措，实现了完全意义上的“工者有其股”，算是华为最大的一个颠覆性创新，是华为能不断成长壮大的根本所在。在华为创立之初，任正非就给知识人才——这一软性资产进行了定价，让“知本家”在华为成为了现实。迄今华为已有将近8万股东，成为人类商业史上的一大壮举，也体现了身为企业领舵人任正非的宽广胸襟。
㈢华为决策体制的创新
在2004年咨询公司对华为的决策机制提出了一个变革建议即轮值CEO的模型，主旨是由七位常务副总裁轮流担任CEO，每半年轮值一次。在高管团队成员轮流坐庄担任轮值CEO期间，要对企业战略策划和制度建设短期负责。任正非公开倡导了这一模式，强调了公司发展不能靠“个人英雄主义”，必须依靠“集体奋斗与集体智慧”，并总结了这一制度为华为带来的好处：“这种轮值制度平衡了公司各方面的矛盾，使公司得以均衡成长；每个轮值CEO在轮值期间都会奋力地拉车，牵引公司前进。一旦他走偏了，下一轮的轮值CEO会及时去纠正航向，使大船能早一些拨正船头。”
㈣ 华为无处不在的创新文化
华为产品始终能赢得全球客户的信任并成为行业的领导者还得益于其贴近客户需求的微创新文化，否则面对遍布全球的客户企业很难令他们都能满意。曾有个很有趣的例子：华为交换机也销到了湖南，但不知何故一到冬天那里的设备就短路。技术人员把故障设备拉回了深圳，大家开始黑天白夜地查找问题。后来发现外壳上有类似老鼠的尿痕，于是马上就试着在设备上撒一泡尿，插电后却发现没问题，只得再寻它径。等到第二天突然有人说不对，昨天那人撒尿之前喝了水，再换一人几小时别喝水，尿一泡尿再试试。果不其然，撒完尿，电源一插就短路了。从而确定动物尿是断电的原因。于是很快问题就解决了。这看似是个小问题但如果没有鼓励微创新这种机制，恐怕华为还有着不少地区的客户难题没解决呢！
㈤重中之重的创新源泉：对试错的鼓励与包容
美国屡出像乔布斯、马斯克、盖茨等商界奇才，学者们都认为有赖于美国开放、宽容的文化，尤其是硅谷文化追捧的是癫狂，是狂想。看似荒诞臆想但其带来的结果却是：如果他成功，人类便成功。
对这类型的狂人，任正非倡导的理念一个是“灰度理论”，反对非黑即白的用人观。他多次强调：华为要容得下各种异类人；另一个是“蓝军参谋部理论”，要求公司从高层到基层组织都要有蓝军参谋，他的任务就是唱反调，虚拟各种对抗声音。任正非曾说华为研发20年浪费1千亿，或许正是这1千亿构筑了华为的软实力，华为的世界级创新实力是构筑巨额学费之上的，在数不清的教训的基础上积累了创新成功的经验。通用电气的杰克·韦尔奇认为，管理者过于关注员工的错误就不会有人勇于尝试。而无人敢尝试比犯错还可怕，它使员工故步自封，不敢有丝毫的突破和逾越。
文菲君认为任何企业的成功都不是一朝一夕、一蹴而就的，特别是像华为这样多产品线、大体量的科技型公司更是如此。往往需要居安思危、运筹帷幄、步步为营的精心谋划与设计，需要大智慧才能取得今天这样的成就。华为靠技术优势积累了雄厚的经济实力，来为创新做源源不断的补给；靠它不断完善的各种管理体系形成了各种创新集合体，来更好地保证对创新的不断推进，最主要的是它能有容错的胸怀与气度为各类人才和部门提供了很好的创新氛围，这是创新成功背后不容忽视的一个元素。目前，在国家的“双创”政策鼓舞下广大科技创新企业、独角兽们也迎来了难得的发展机遇，如能很好地借鉴这些成功企业好的做法和思想，深练基本功，相信就会如虎添翼地腾飞起来。作为咨询研究机构，我们希望能为这些企业摇旗助阵、提供粮台给养来支持他们取得成功，来，携手努力吧！
自1997年起美国政府就不断抛出出口管制“实体名单”，来限制对名单上的企业或机构出口、进口或转口一些高端技术产品,目前被列入这个实体清单的中国企业已超过300家。2019年美商务部又宣布将中国一批公司列入这一“实体名单”，其中就包括华为及其附属公司，在其禁令影响下英国芯片设计商ARM也暂停了与华为的全部业务。当即就有分析师指出这将极大地影响华为开发自己芯片的能力，因为华为旗下海思的许多芯片都是使用ARM的基础技术制造的。然而，没想到没过多久，华为海思总裁何庭波就在一封致员工信中抛出了华为的“备胎”计划——因为早前就有被美国断供的假设，海思已为公司的生存打造好了“备胎”。这一举措很好地为国人演绎了一把《孙子兵法》中提到的“上兵伐谋，其次伐交，其次伐兵，其下攻城”的战略谋划，而令美国大跌眼镜。那么，华为何以能很早就掌握了这些高端芯片技术呢？无疑靠的是创新能力和创新技术的不断积累，而这些创新能力又从何而来呢？经我们多年的研究发现这绝不单纯仅是技术的创新，而是一个创新集合体，更重要的是这个创新体系背后的一个关键元素。下面文菲君就把其重要的几个创新项给大家介绍一下。
㈠华为首当其冲的创新是技术创新
华为有句话是“研发的10%投不下去是要被砍头的”。从1992年开始，华为就坚持将每年销售额的至少10%投入研发，到2013年华为的研发投入已到12.8%，达到53亿美金；至2018年其研发投入已经超越了微软，苹果和Intel（英特尔），这是他们能够保持在5G技术上领先的关键因素。华为在全球有16个研发中心，有7万多人的研发队伍，特别是俄罗斯研究所和法国研究所，曾在华为的2G、3G研究方面做出了重大贡献。
㈡ 华为的制度创新：“人人有股”
提到华为公司的股票激励制度几乎是业内无人不知、无人不晓的一大举措，实现了完全意义上的“工者有其股”，算是华为最大的一个颠覆性创新，是华为能不断成长壮大的根本所在。在华为创立之初，任正非就给知识人才——这一软性资产进行了定价，让“知本家”在华为成为了现实。迄今华为已有将近8万股东，成为人类商业史上的一大壮举，也体现了身为企业领舵人任正非的宽广胸襟。
㈢华为决策体制的创新
在2004年咨询公司对华为的决策机制提出了一个变革建议即轮值CEO的模型，主旨是由七位常务副总裁轮流担任CEO，每半年轮值一次。在高管团队成员轮流坐庄担任轮值CEO期间，要对企业战略策划和制度建设短期负责。任正非公开倡导了这一模式，强调了公司发展不能靠“个人英雄主义”，必须依靠“集体奋斗与集体智慧”，并总结了这一制度为华为带来的好处：“这种轮值制度平衡了公司各方面的矛盾，使公司得以均衡成长；每个轮值CEO在轮值期间都会奋力地拉车，牵引公司前进。一旦他走偏了，下一轮的轮值CEO会及时去纠正航向，使大船能早一些拨正船头。”
㈣ 华为无处不在的创新文化
华为产品始终能赢得全球客户的信任并成为行业的领导者还得益于其贴近客户需求的微创新文化，否则面对遍布全球的客户企业很难令他们都能满意。曾有个很有趣的例子：华为交换机也销到了湖南，但不知何故一到冬天那里的设备就短路。技术人员把故障设备拉回了深圳，大家开始黑天白夜地查找问题。后来发现外壳上有类似老鼠的尿痕，于是马上就试着在设备上撒一泡尿，插电后却发现没问题，只得再寻它径。等到第二天突然有人说不对，昨天那人撒尿之前喝了水，再换一人几小时别喝水，尿一泡尿再试试。果不其然，撒完尿，电源一插就短路了。从而确定动物尿是断电的原因。于是很快问题就解决了。这看似是个小问题但如果没有鼓励微创新这种机制，恐怕华为还有着不少地区的客户难题没解决呢！
㈤重中之重的创新源泉：对试错的鼓励与包容
美国屡出像乔布斯、马斯克、盖茨等商界奇才，学者们都认为有赖于美国开放、宽容的文化，尤其是硅谷文化追捧的是癫狂，是狂想。看似荒诞臆想但其带来的结果却是：如果他成功，人类便成功。
对这类型的狂人，任正非倡导的理念一个是“灰度理论”，反对非黑即白的用人观。他多次强调：华为要容得下各种异类人；另一个是“蓝军参谋部理论”，要求公司从高层到基层组织都要有蓝军参谋，他的任务就是唱反调，虚拟各种对抗声音。任正非曾说华为研发20年浪费1千亿，或许正是这1千亿构筑了华为的软实力，华为的世界级创新实力是构筑巨额学费之上的，在数不清的教训的基础上积累了创新成功的经验。通用电气的杰克·韦尔奇认为，管理者过于关注员工的错误就不会有人勇于尝试。而无人敢尝试比犯错还可怕，它使员工故步自封，不敢有丝毫的突破和逾越。
文菲君认为任何企业的成功都不是一朝一夕、一蹴而就的，特别是像华为这样多产品线、大体量的科技型公司更是如此。往往需要居安思危、运筹帷幄、步步为营的精心谋划与设计，需要大智慧才能取得今天这样的成就。华为靠技术优势积累了雄厚的经济实力，来为创新做源源不断的补给；靠它不断完善的各种管理体系形成了各种创新集合体，来更好地保证对创新的不断推进，最主要的是它能有容错的胸怀与气度为各类人才和部门提供了很好的创新氛围，这是创新成功背后不容忽视的一个元素。目前，在国家的“双创”政策鼓舞下广大科技创新企业、独角兽们也迎来了难得的发展机遇，如能很好地借鉴这些成功企业好的做法和思想，深练基本功，相信就会如虎添翼地腾飞起来。作为咨询研究机构，我们希望能为这些企业摇旗助阵、提供粮台给养来支持他们取得成功，来，携手努力吧！
在华为引人注目的创新后面有一个很重要的支持因素
自1997年起美国政府就不断抛出出口管制“实体名单”，来限制对名单上的企业或机构出口、进口或转口一些高端技术产品,目前被列入这个实体清单的中国企业已超过300家。2019年美商务部又宣布将中国一批公司列入这一“实体名单”，其中就包括华为及其附属公司，在其禁令影响下英国芯片设计商ARM也暂停了与华为的全部业务。当即就有分析师指出这将极大地影响华为开发自己芯片的能力，因为华为旗下海思的许多芯片都是使用ARM的基础技术制造的。然而，没想到没过多久，华为海思总裁何庭波就在一封致员工信中抛出了华为的“备胎”计划——因为早前就有被美国断供的假设，海思已为公司的生存打造好了“备胎”。这一举措很好地为国人演绎了一把《孙子兵法》中提到的“上兵伐谋，其次伐交，其次伐兵，其下攻城”的战略谋划，而令美国大跌眼镜。那么，华为何以能很早就掌握了这些高端芯片技术呢？无疑靠的是创新能力和创新技术的不断积累，而这些创新能力又从何而来呢？经我们多年的研究发现这绝不单纯仅是技术的创新，而是一个创新集合体，更重要的是这个创新体系背后的一个关键元素。下面文菲君就把其重要的几个创新项给大家介绍一下。
㈠华为首当其冲的创新是技术创新
华为有句话是“研发的10%投不下去是要被砍头的”。从1992年开始，华为就坚持将每年销售额的至少10%投入研发，到2013年华为的研发投入已到12.8%，达到53亿美金；至2018年其研发投入已经超越了微软，苹果和Intel（英特尔），这是他们能够保持在5G技术上领先的关键因素。华为在全球有16个研发中心，有7万多人的研发队伍，特别是俄罗斯研究所和法国研究所，曾在华为的2G、3G研究方面做出了重大贡献。
㈡ 华为的制度创新：“人人有股”
提到华为公司的股票激励制度几乎是业内无人不知、无人不晓的一大举措，实现了完全意义上的“工者有其股”，算是华为最大的一个颠覆性创新，是华为能不断成长壮大的根本所在。在华为创立之初，任正非就给知识人才——这一软性资产进行了定价，让“知本家”在华为成为了现实。迄今华为已有将近8万股东，成为人类商业史上的一大壮举，也体现了身为企业领舵人任正非的宽广胸襟。
㈢华为决策体制的创新
在2004年咨询公司对华为的决策机制提出了一个变革建议即轮值CEO的模型，主旨是由七位常务副总裁轮流担任CEO，每半年轮值一次。在高管团队成员轮流坐庄担任轮值CEO期间，要对企业战略策划和制度建设短期负责。任正非公开倡导了这一模式，强调了公司发展不能靠“个人英雄主义”，必须依靠“集体奋斗与集体智慧”，并总结了这一制度为华为带来的好处：“这种轮值制度平衡了公司各方面的矛盾，使公司得以均衡成长；每个轮值CEO在轮值期间都会奋力地拉车，牵引公司前进。一旦他走偏了，下一轮的轮值CEO会及时去纠正航向，使大船能早一些拨正船头。”
㈣ 华为无处不在的创新文化
华为产品始终能赢得全球客户的信任并成为行业的领导者还得益于其贴近客户需求的微创新文化，否则面对遍布全球的客户企业很难令他们都能满意。曾有个很有趣的例子：华为交换机也销到了湖南，但不知何故一到冬天那里的设备就短路。技术人员把故障设备拉回了深圳，大家开始黑天白夜地查找问题。后来发现外壳上有类似老鼠的尿痕，于是马上就试着在设备上撒一泡尿，插电后却发现没问题，只得再寻它径。等到第二天突然有人说不对，昨天那人撒尿之前喝了水，再换一人几小时别喝水，尿一泡尿再试试。果不其然，撒完尿，电源一插就短路了。从而确定动物尿是断电的原因。于是很快问题就解决了。这看似是个小问题但如果没有鼓励微创新这种机制，恐怕华为还有着不少地区的客户难题没解决呢！
㈤重中之重的创新源泉：对试错的鼓励与包容
美国屡出像乔布斯、马斯克、盖茨等商界奇才，学者们都认为有赖于美国开放、宽容的文化，尤其是硅谷文化追捧的是癫狂，是狂想。看似荒诞臆想但其带来的结果却是：如果他成功，人类便成功。
对这类型的狂人，任正非倡导的理念一个是“灰度理论”，反对非黑即白的用人观。他多次强调：华为要容得下各种异类人；另一个是“蓝军参谋部理论”，要求公司从高层到基层组织都要有蓝军参谋，他的任务就是唱反调，虚拟各种对抗声音。任正非曾说华为研发20年浪费1千亿，或许正是这1千亿构筑了华为的软实力，华为的世界级创新实力是构筑巨额学费之上的，在数不清的教训的基础上积累了创新成功的经验。通用电气的杰克·韦尔奇认为，管理者过于关注员工的错误就不会有人勇于尝试。而无人敢尝试比犯错还可怕，它使员工故步自封，不敢有丝毫的突破和逾越。
文菲君认为任何企业的成功都不是一朝一夕、一蹴而就的，特别是像华为这样多产品线、大体量的科技型公司更是如此。往往需要居安思危、运筹帷幄、步步为营的精心谋划与设计，需要大智慧才能取得今天这样的成就。华为靠技术优势积累了雄厚的经济实力，来为创新做源源不断的补给；靠它不断完善的各种管理体系形成了各种创新集合体，来更好地保证对创新的不断推进，最主要的是它能有容错的胸怀与气度为各类人才和部门提供了很好的创新氛围，这是创新成功背后不容忽视的一个元素。目前，在国家的“双创”政策鼓舞下广大科技创新企业、独角兽们也迎来了难得的发展机遇，如能很好地借鉴这些成功企业好的做法和思想，深练基本功，相信就会如虎添翼地腾飞起来。作为咨询研究机构，我们希望能为这些企业摇旗助阵、提供粮台给养来支持他们取得成功，来，携手努力吧！
自1997年起美国政府就不断抛出出口管制“实体名单”，来限制对名单上的企业或机构出口、进口或转口一些高端技术产品,目前被列入这个实体清单的中国企业已超过300家。2019年美商务部又宣布将中国一批公司列入这一“实体名单”，其中就包括华为及其附属公司，在其禁令影响下英国芯片设计商ARM也暂停了与华为的全部业务。当即就有分析师指出这将极大地影响华为开发自己芯片的能力，因为华为旗下海思的许多芯片都是使用ARM的基础技术制造的。然而，没想到没过多久，华为海思总裁何庭波就在一封致员工信中抛出了华为的“备胎”计划——因为早前就有被美国断供的假设，海思已为公司的生存打造好了“备胎”。这一举措很好地为国人演绎了一把《孙子兵法》中提到的“上兵伐谋，其次伐交，其次伐兵，其下攻城”的战略谋划，而令美国大跌眼镜。那么，华为何以能很早就掌握了这些高端芯片技术呢？无疑靠的是创新能力和创新技术的不断积累，而这些创新能力又从何而来呢？经我们多年的研究发现这绝不单纯仅是技术的创新，而是一个创新集合体，更重要的是这个创新体系背后的一个关键元素。下面文菲君就把其重要的几个创新项给大家介绍一下。
㈠华为首当其冲的创新是技术创新
华为有句话是“研发的10%投不下去是要被砍头的”。从1992年开始，华为就坚持将每年销售额的至少10%投入研发，到2013年华为的研发投入已到12.8%，达到53亿美金；至2018年其研发投入已经超越了微软，苹果和Intel（英特尔），这是他们能够保持在5G技术上领先的关键因素。华为在全球有16个研发中心，有7万多人的研发队伍，特别是俄罗斯研究所和法国研究所，曾在华为的2G、3G研究方面做出了重大贡献。
㈡ 华为的制度创新：“人人有股”
提到华为公司的股票激励制度几乎是业内无人不知、无人不晓的一大举措，实现了完全意义上的“工者有其股”，算是华为最大的一个颠覆性创新，是华为能不断成长壮大的根本所在。在华为创立之初，任正非就给知识人才——这一软性资产进行了定价，让“知本家”在华为成为了现实。迄今华为已有将近8万股东，成为人类商业史上的一大壮举，也体现了身为企业领舵人任正非的宽广胸襟。
㈢华为决策体制的创新
在2004年咨询公司对华为的决策机制提出了一个变革建议即轮值CEO的模型，主旨是由七位常务副总裁轮流担任CEO，每半年轮值一次。在高管团队成员轮流坐庄担任轮值CEO期间，要对企业战略策划和制度建设短期负责。任正非公开倡导了这一模式，强调了公司发展不能靠“个人英雄主义”，必须依靠“集体奋斗与集体智慧”，并总结了这一制度为华为带来的好处：“这种轮值制度平衡了公司各方面的矛盾，使公司得以均衡成长；每个轮值CEO在轮值期间都会奋力地拉车，牵引公司前进。一旦他走偏了，下一轮的轮值CEO会及时去纠正航向，使大船能早一些拨正船头。”
㈣ 华为无处不在的创新文化
华为产品始终能赢得全球客户的信任并成为行业的领导者还得益于其贴近客户需求的微创新文化，否则面对遍布全球的客户企业很难令他们都能满意。曾有个很有趣的例子：华为交换机也销到了湖南，但不知何故一到冬天那里的设备就短路。技术人员把故障设备拉回了深圳，大家开始黑天白夜地查找问题。后来发现外壳上有类似老鼠的尿痕，于是马上就试着在设备上撒一泡尿，插电后却发现没问题，只得再寻它径。等到第二天突然有人说不对，昨天那人撒尿之前喝了水，再换一人几小时别喝水，尿一泡尿再试试。果不其然，撒完尿，电源一插就短路了。从而确定动物尿是断电的原因。于是很快问题就解决了。这看似是个小问题但如果没有鼓励微创新这种机制，恐怕华为还有着不少地区的客户难题没解决呢！
㈤重中之重的创新源泉：对试错的鼓励与包容
美国屡出像乔布斯、马斯克、盖茨等商界奇才，学者们都认为有赖于美国开放、宽容的文化，尤其是硅谷文化追捧的是癫狂，是狂想。看似荒诞臆想但其带来的结果却是：如果他成功，人类便成功。
对这类型的狂人，任正非倡导的理念一个是“灰度理论”，反对非黑即白的用人观。他多次强调：华为要容得下各种异类人；另一个是“蓝军参谋部理论”，要求公司从高层到基层组织都要有蓝军参谋，他的任务就是唱反调，虚拟各种对抗声音。任正非曾说华为研发20年浪费1千亿，或许正是这1千亿构筑了华为的软实力，华为的世界级创新实力是构筑巨额学费之上的，在数不清的教训的基础上积累了创新成功的经验。通用电气的杰克·韦尔奇认为，管理者过于关注员工的错误就不会有人勇于尝试。而无人敢尝试比犯错还可怕，它使员工故步自封，不敢有丝毫的突破和逾越。
文菲君认为任何企业的成功都不是一朝一夕、一蹴而就的，特别是像华为这样多产品线、大体量的科技型公司更是如此。往往需要居安思危、运筹帷幄、步步为营的精心谋划与设计，需要大智慧才能取得今天这样的成就。华为靠技术优势积累了雄厚的经济实力，来为创新做源源不断的补给；靠它不断完善的各种管理体系形成了各种创新集合体，来更好地保证对创新的不断推进，最主要的是它能有容错的胸怀与气度为各类人才和部门提供了很好的创新氛围，这是创新成功背后不容忽视的一个元素。目前，在国家的“双创”政策鼓舞下广大科技创新企业、独角兽们也迎来了难得的发展机遇，如能很好地借鉴这些成功企业好的做法和思想，深练基本功，相信就会如虎添翼地腾飞起来。作为咨询研究机构，我们希望能为这些企业摇旗助阵、提供粮台给养来支持他们取得成功，来，携手努力吧！
假阴性,不出现扩增条带
酶失活:需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴Z锭。
引物:引物质量、引物的浓度、两条弓|物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度高，一条浓度低,造成低效率的不对称扩增,对策为:①选定一个好的弓|物合成单位。②引物的浓度不仅要看OD值,更要注重弓|物原液做琼脂糖凝胶电泳, -定要有弓|物条带出现,而且两引|物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带, 一条引物无条带，此时做PCR有可能失败,应和弓|物合成单位协商解决。如一条引物亮度高,一条亮度低,在稀释弓|物时要平衡其浓度。③弓|物应高浓度小量分装保存,防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分,导致弓|物变质降解失效。④引物设计不合理,如弓|物长度不够,引物之间形成二聚体等。
Mg2+浓度: Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特异性,浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
反应体积的改变:通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、 50ul。 或100ul ,应用多大体积进行PCR扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul后,再做大体积时，一定要模索条件,否则容易失败。
物理原因:变性对PCR扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。有时还有必要用标准的温度计,检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度,这也是PCR失败的原因之一。
靶序列变异:如靶序列发生突变或缺失,影响引物与模板特异性结合, 或因靶序列某段缺失使弓|物与模板失去互补序列,其PCR扩增是不会成功的。
假阳性,出现非特异性扩增带
1.假阳性:出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。
引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR 扩增时,扩增出的PCR 产物为非目的性的序列。靶序列太短或弓|物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。靶序列或扩 增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决:①操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。②除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。 ③必要时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出PCR产物,而导致假阳性的产生,可用巢式PCR方法来减轻或消除。
2.出现非特异性扩增带
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不-致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因: -是弓|物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。
其次是酶的质和量,往往一-些来源的酶 易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有: ①必要时重新设计引|物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低弓|物量,适当增加模板量,减少循环次数。④适当提高退火温度或采用二温度点法(93°C变性, 65°C左右退火与延伸)。
3.出现片状拖带或涂抹带PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差, dNTP浓度过高, Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起。其对策有:①减少酶量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③.适当降低Mg2+浓度。④增加模板量,减少循环次数。
酶失活:需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴Z锭。
引物:引物质量、引物的浓度、两条弓|物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度高，一条浓度低,造成低效率的不对称扩增,对策为:①选定一个好的弓|物合成单位。②引物的浓度不仅要看OD值,更要注重弓|物原液做琼脂糖凝胶电泳, -定要有弓|物条带出现,而且两引|物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带, 一条引物无条带，此时做PCR有可能失败,应和弓|物合成单位协商解决。如一条引物亮度高,一条亮度低,在稀释弓|物时要平衡其浓度。③弓|物应高浓度小量分装保存,防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分,导致弓|物变质降解失效。④引物设计不合理,如弓|物长度不够,引物之间形成二聚体等。
Mg2+浓度: Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特异性,浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
反应体积的改变:通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、 50ul。 或100ul ,应用多大体积进行PCR扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul后,再做大体积时，一定要模索条件,否则容易失败。
物理原因:变性对PCR扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。有时还有必要用标准的温度计,检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度,这也是PCR失败的原因之一。
靶序列变异:如靶序列发生突变或缺失,影响引物与模板特异性结合, 或因靶序列某段缺失使弓|物与模板失去互补序列,其PCR扩增是不会成功的。
假阳性,出现非特异性扩增带
1.假阳性:出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。
引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR 扩增时,扩增出的PCR 产物为非目的性的序列。靶序列太短或弓|物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。靶序列或扩 增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决:①操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。②除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。 ③必要时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出PCR产物,而导致假阳性的产生,可用巢式PCR方法来减轻或消除。
2.出现非特异性扩增带
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不-致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因: -是弓|物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。
其次是酶的质和量,往往一-些来源的酶 易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有: ①必要时重新设计引|物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低弓|物量,适当增加模板量,减少循环次数。④适当提高退火温度或采用二温度点法(93°C变性, 65°C左右退火与延伸)。
3.出现片状拖带或涂抹带PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差, dNTP浓度过高, Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起。其对策有:①减少酶量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③.适当降低Mg2+浓度。④增加模板量,减少循环次数。
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