如何制作稳定的转染细胞系
转染是一种基因转移方法，其中遗传物质通过化学或非化学方法故意引入宿主细胞。有两种类型的稳定转染细胞系：
稳定细胞系的主要类型是通过将转染的DNA直接整合到宿主生物体的基因组中而产生的。转染的DNA通过同源重组整合到基因组中。
产生稳定细胞系的另一种方法是转染DNA的游离体维持。真核载体用于转染未整合到基因组中的DNA。然而，游离体DNA的稳定性很低。此外，附生体仅由某些类型的物种维持。稳定转染的细胞系如图1所示。
图1：稳定转染的细胞系
步骤
生成稳定细胞系所涉及的步骤如下所述。
生成确定最佳选择抗生素浓度的杀伤曲线 – 细胞承受越来越多的抗生素浓度，以确定在一周内杀死所有细胞所需的最低抗生素浓度。
转染具有所需质粒构建体的细胞 – 转染方法因宿主细胞类型而异。脂质体试剂用于贴壁细胞系的转染。电转染或病毒方法用于转染悬浮细胞系。
选择和扩增稳定的多克隆菌落 – 在转染 48-72 小时时，将高浓度、最佳浓度和低浓度的选择性抗生素添加到培养物中，以获得稳定转染的细胞系。
如何在细胞系中选择转染的DNA
选择标记与转染的DNA共表达，用于选择成功转染的细胞。标记基因可能位于用于转染宿主细胞的同一载体（顺式）中，也可能位于另一个载体（反式）中。对抗生素的耐药性，如新霉素，沸蛋白，潮霉素，嘌呤霉素，DHFR等可用于选择。此外，转染的基因可以用GFP标记。
结论
稳定的细胞系主要可以通过将转染的DNA整合到基因组中来制造。此外，转染DNA的游离体维持也可用于在某些宿主生物中长时间制造稳定的细胞系。应该有一种选择方法用于鉴定细胞系中转染的DNA。
转染是一种基因转移方法，其中遗传物质通过化学或非化学方法故意引入宿主细胞。有两种类型的稳定转染细胞系：
稳定细胞系的主要类型是通过将转染的DNA直接整合到宿主生物体的基因组中而产生的。转染的DNA通过同源重组整合到基因组中。
产生稳定细胞系的另一种方法是转染DNA的游离体维持。真核载体用于转染未整合到基因组中的DNA。然而，游离体DNA的稳定性很低。此外，附生体仅由某些类型的物种维持。稳定转染的细胞系如图1所示。
图1：稳定转染的细胞系
步骤
生成稳定细胞系所涉及的步骤如下所述。
生成确定最佳选择抗生素浓度的杀伤曲线 – 细胞承受越来越多的抗生素浓度，以确定在一周内杀死所有细胞所需的最低抗生素浓度。
转染具有所需质粒构建体的细胞 – 转染方法因宿主细胞类型而异。脂质体试剂用于贴壁细胞系的转染。电转染或病毒方法用于转染悬浮细胞系。
选择和扩增稳定的多克隆菌落 – 在转染 48-72 小时时，将高浓度、最佳浓度和低浓度的选择性抗生素添加到培养物中，以获得稳定转染的细胞系。
如何在细胞系中选择转染的DNA
选择标记与转染的DNA共表达，用于选择成功转染的细胞。标记基因可能位于用于转染宿主细胞的同一载体（顺式）中，也可能位于另一个载体（反式）中。对抗生素的耐药性，如新霉素，沸蛋白，潮霉素，嘌呤霉素，DHFR等可用于选择。此外，转染的基因可以用GFP标记。
结论
稳定的细胞系主要可以通过将转染的DNA整合到基因组中来制造。此外，转染DNA的游离体维持也可用于在某些宿主生物中长时间制造稳定的细胞系。应该有一种选择方法用于鉴定细胞系中转染的DNA。
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身为一个抗老积极份子，各大精华我都用过，但从冻龄效果来讲，遇到这款精华，才确定它是我的真爱，真不愧是“高奢冻龄第一瓶”！想要抗初老和冻龄的姐妹真的不能错过！皮肤状态真的全力升级，素颜下饱满紧致的状态真的爱住了！
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平时我还会搭配上同系列的黑钻松露面霜，让我的肌肤享受更加奢华的体验，全方位的宠爱我的肌肤。黑钻松露面霜的质地是很轻盈的，我很喜欢它能强韧肌肤屏障的作用，我一般会蘸取一颗珍珠大小，用双手手掌的温度激活它，这时它会化为精油质感，然后就可以上脸按摩，真的非常好吸收！感觉脸部的胶原蛋白满满，面部轮廓也更加紧致了！
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法斗神经炎：诊断+治疗+预防经验分享
法斗在狗狗品种里面算是得神经炎概率较高的狗狗，我家狗狗神经炎复发了几回，还是今年年初才把病情给控制住。
我家狗狗得神经炎的这几年，可真把我折腾的不轻，每次发病都让我很崩溃，身边也有人劝我给它安乐，但我真的舍不得...为了能好好照顾它，我看了很多相关书籍，怎样治疗、怎样预防复发全都是花费很多时间和精力研究试验出来的。
今天把这些分享出来，希望能够帮助到正在受难的毛孩子和家长们。
【关于诊断】
狗狗出现神经炎可能会出现共济失调，四肢肌肉的协调能力丧失，引起摇晃和肌肉运动不协调，最常见的患病动物四肢交叉，导致在行走的时间四肢相互影响，在换步时四肢可能过度外展，并且运动可能被夸大或伸展过度。
有些可能会出现轻瘫或者偏瘫，有四肢抽搐、僵直性痉挛、角弓反张、运动障碍或肌痉挛等症状。
一般只有去宠物医院做磁核共振才能明确病因是什么，但是乡镇医院很难辨别病因的，只做x光的话，很容易就被误判成是关节问题。
【关于治疗】
可以选择手术治疗和保守治疗（手术治疗会有一定的复发几率）
保守治疗，病情严重需要打神经激素，以及配合消炎、止痛、营养针；病情不严重只吃药就可以了。
我家前期是打针、后期是吃药进行治疗。
速诺，250mg，早晚各一片（抗菌消炎）
甲钴胺，早晚各一片（改善神经传导）
申维通达，早晚各吃4粒（可以加速细胞的再生）
维生素B1、B12，早晚各一片（补充神经营养）
大活络丸，早晚各1/3丸（通筋活络）
需要注意的是要是狗狗疼痛难忍的时候再用止疼药，平时看着没啥问题的时候还是尽量不要用止疼药，长期服用对狗狗的身体是有伤害的。
【怎么预防】
1、调整饮食，不要单一喂食，要做到营养均衡，防止狗狗体内缺乏维生素B（不要将罐头当主食！！平时可给狗狗喂维生素复合B）
2、加强锻炼，有利于促进狗狗体内血液循环，提升狗狗免疫力（禁止爬楼梯锻炼！！！）
3、注意不要让狗狗受到刺激，容易引起发病（得了该病的狗狗尽量绝育，发情也会引起病发）#狗狗##养狗#
法斗在狗狗品种里面算是得神经炎概率较高的狗狗，我家狗狗神经炎复发了几回，还是今年年初才把病情给控制住。
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【关于诊断】
狗狗出现神经炎可能会出现共济失调，四肢肌肉的协调能力丧失，引起摇晃和肌肉运动不协调，最常见的患病动物四肢交叉，导致在行走的时间四肢相互影响，在换步时四肢可能过度外展，并且运动可能被夸大或伸展过度。
有些可能会出现轻瘫或者偏瘫，有四肢抽搐、僵直性痉挛、角弓反张、运动障碍或肌痉挛等症状。
一般只有去宠物医院做磁核共振才能明确病因是什么，但是乡镇医院很难辨别病因的，只做x光的话，很容易就被误判成是关节问题。
【关于治疗】
可以选择手术治疗和保守治疗（手术治疗会有一定的复发几率）
保守治疗，病情严重需要打神经激素，以及配合消炎、止痛、营养针；病情不严重只吃药就可以了。
我家前期是打针、后期是吃药进行治疗。
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需要注意的是要是狗狗疼痛难忍的时候再用止疼药，平时看着没啥问题的时候还是尽量不要用止疼药，长期服用对狗狗的身体是有伤害的。
【怎么预防】
1、调整饮食，不要单一喂食，要做到营养均衡，防止狗狗体内缺乏维生素B（不要将罐头当主食！！平时可给狗狗喂维生素复合B）
2、加强锻炼，有利于促进狗狗体内血液循环，提升狗狗免疫力（禁止爬楼梯锻炼！！！）
3、注意不要让狗狗受到刺激，容易引起发病（得了该病的狗狗尽量绝育，发情也会引起病发）#狗狗##养狗#
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