#慕梓的电子日记簿[超话]#
DAY23#慕梓的实验搬砖记录# 3h
1⃣️给小鼠洗笼子换垫料
mad太臭了[伤心][伤心][伤心]

2⃣️细胞计数 ，种板子
上次实验在这儿p1https://t.cn/A6xPAZdr
♊计数：先稀释10倍，镜下更清楚。用1.5mL离心管，加90uL培养基➕10μL离心后的细胞悬液。
吸10μL进计数板的槽槽
方法在上次实验记着
♊种板子
种板子的目的：后面给处理。

细胞是SW1353骨肉瘤细胞，这个细胞的大小适合在六孔板里每个孔放10w个
计数结果：49×10w个。种8个六孔板，剩下的10w个继续传代。计数的目的就是确定拿板子的个数。
计数板里的那20μL不要啦，反正就那么点点，怕倒回来了污染细胞大部队。
这会儿去取六孔板。板子的外面那个包装盒留下，用处还挺多的。（[猪头]在师兄这儿学到最多的仿佛是怎么省钱hhh[doge]）
细胞大部队此时在50mL离心管里，用高糖培养基把体积补到50mL。把管正正反反左左右右地摇摇。摇匀后加进板子，每个孔加1mL。加孔的过程中把离心管一直摇摇，因为静置的时候细胞总会沉淀下去。
然后把8个板子上下左右平移式地摇摇。标记。镜下观察。37℃培养箱。过夜。
克莱因蓝盖的细胞培养瓶瓶口有孔，比较好，放进37℃培养箱的时候就不用再把瓶口拧松了。

3⃣️原代细胞培养
细胞：WT野生型；KO基因敲除型（knock out ）
培养基：F12培养基 不再是高糖培养基啦！p4
把装细胞的三个离心管从37℃恒温摇床里取出来。拿到超净工作台。
据师兄观察，根本看不到什么细胞[笑cry][嘻嘻]（注定是一场没有结果的试探[挤眼]）
然后用滤器，把细胞滤进50mL离心管里。c. f. 此滤器非彼滤菌器。滤菌器：细菌不能通过。p2p3
此滤器：细胞能通过。把细胞基质等留在外面。因为滤器的口径，所以只能搭在50mL的离心管上，只能把细胞滤进50mL离心管。然后转移到15mL离心管。去离心。
放进培养瓶
镜下观察。据师兄观察，根本没有细胞[笑cry][笑cry][嘻嘻][嘻嘻]哈哈哈哈哈哈哈对不起还是好想笑[笑cry][笑cry][笑cry][笑cry][笑cry]

咱就是说困死了，没得午休
忍不住了点杯
坐在屠猪馆里发现袖口粘上了手套的味道[失望]但是哈哈哈哈哈，发现今天背的里有一管之前放的香水哈哈哈哈，为这种突如其来的小幸福开心的不行[害羞][打call][女孩儿]
#就这一刻#
校园的秋景好美的[鲜花]相机不足万分之一[鲜花]

培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料。它既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。经典的培养基有很多,其中DMEM, RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。其它如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。https://t.cn/A6zHQl94

#不将就的每一天##实验室的每一天#
[紫金草]上午看文献
[锦鲤]中午去给糖氧剥夺的细胞换培养基，忘了听打开密闭容器的噗的声音，培养基我们用的一共有四种，DMEM无糖，DMEM有糖，F12有糖，neurolbasal
[锦鲤]下午到晚上一直在做基因鉴定，配的胶不知道为什么特别软，是不是跟没有一口气倒好有关。VDR纯合子在第三条带和第四条带之间，杂合子在三四，四五之间，WT在四五之间，CX3CR1在第八条带上面一点