【我省又增24家新冠病毒核酸检测实验室】近日，省卫健委公布了第二十批具备新冠病毒核酸检测能力医疗卫生机构名单，包括24家医疗机构基因扩增实验室。至此，全省共有351家医疗卫生机构（实验室）通过现场验收且具备核酸检测能力，其中医疗机构241家，疾控机构103家，第三方检测机构7家。兰州日报社全媒体记者田小东         

​如何制作稳定的转染细胞系

转染是一种基因转移方法，其中遗传物质通过化学或非化学方法故意引入宿主细胞。有两种类型的稳定转染细胞系：

稳定细胞系的主要类型是通过将转染的DNA直接整合到宿主生物体的基因组中而产生的。转染的DNA通过同源重组整合到基因组中。

产生稳定细胞系的另一种方法是转染DNA的游离体维持。真核载体用于转染未整合到基因组中的DNA。然而，游离体DNA的稳定性很低。此外，附生体仅由某些类型的物种维持。稳定转染的细胞系如图1所示。

图1：稳定转染的细胞系

步骤

生成稳定细胞系所涉及的步骤如下所述。

生成确定最佳选择抗生素浓度的杀伤曲线 – 细胞承受越来越多的抗生素浓度，以确定在一周内杀死所有细胞所需的最低抗生素浓度。

转染具有所需质粒构建体的细胞 – 转染方法因宿主细胞类型而异。脂质体试剂用于贴壁细胞系的转染。电转染或病毒方法用于转染悬浮细胞系。

选择和扩增稳定的多克隆菌落 – 在转染 48-72 小时时，将高浓度、最佳浓度和低浓度的选择性抗生素添加到培养物中，以获得稳定转染的细胞系。

如何在细胞系中选择转染的DNA

选择标记与转染的DNA共表达，用于选择成功转染的细胞。标记基因可能位于用于转染宿主细胞的同一载体（顺式）中，也可能位于另一个载体（反式）中。对抗生素的耐药性，如新霉素，沸蛋白，潮霉素，嘌呤霉素，DHFR等可用于选择。此外，转染的基因可以用GFP标记。

结论

稳定的细胞系主要可以通过将转染的DNA整合到基因组中来制造。此外，转染DNA的游离体维持也可用于在某些宿主生物中长时间制造稳定的细胞系。应该有一种选择方法用于鉴定细胞系中转染的DNA。

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