肺癌PD-L1判读和检测的三四事
2018年11月24日 · 来自专栏 肿瘤免疫
TPS:
为什么要做PD-L1检测？
张教授指出，免疫治疗是当前肿瘤治疗的的前沿和热点，目前已有多个PD-1/L1的免疫检查点抑制剂获批肺癌适应证，并且治疗时间不断前移，比如，默沙东的帕博利珠单抗（pembrolizumab，KEYTRUDA?，可瑞达）就已经在美国获批成为非小细胞肺癌的一线治疗方案。但是免疫治疗并非对所有的患者都有效，因此，通过分子标志物检测，寻找到适合的患者，是实现“精准”肿瘤免疫治疗的关键！
另外，美国FDA批准帕博利珠单抗单药治疗需要进行PD-L1检测。这是因为，多项临床研究证实，无论是一线治疗（初治），还是二线治疗（经治），帕博利珠单抗均可有效延长非小细胞肺癌患者的总生存期，但根据PD-L1分层研究的结果，PD-L1高表达，则疗效更显著，更有可能获益。PD-L1的检测结果，对临床医师制定治疗方案，预估疗效非常重要。
什么时候做PD-L1检测？
张智泓教授指出，目前对于PD-L1检测时间点没有统一定论。但最新的美国权威NCCN指南推荐，在患者确诊时就应马上做一个PD-L1检测，适合的患者可及早接受免疫治疗，从而获得更多的生存获益。但综合看来，全球范围内对于PD-L1检测时机没有统一定论。
如何提升PD-L1检测和判读的“精准性”？
张智泓教授表示，PD-L1检测是病理所有免疫组化项目当中最繁杂的检测，因为检测抗体种类繁多，且部分抗体国内仍未上市，检测平台多样，不同检测平台检测结果可能不一致，技术人员水平良莠不齐。因此，需要对病理医师、技术人员进行系统培训，才能确保PD-L1检测的质量控制。对于PD-L1的精准检测和判读，以22C3为例，张教授认为需要做到以下四个方面：
（一）分析前要求
分析前，对于样本、试剂盒、设备都有较高的要求。
对于样本的要求：样本使用中性缓冲福尔马林固定12-72h，在60℃或60℃以下用熔化的石蜡浸润，FFPE块切成仅4-5μm切片，在58±2℃下烘干1h，在FFPE切片后的6个月内染色。一般来说，5年以上的FFPE块可能已经丧失免疫反应，不适宜用来进行PD-L1检测。部分患者从外院拿来的空白切片标本虽然未满5年，但是由于保存等多方面因素，也有可能影响PD-L1检测结果。
对于试剂盒和设备的要求，22C3试剂盒需要在2-8℃下储存，染色前试剂盒必须处于室温，DAB：底物缓冲液瓶体积标注为7.2ml，但实际体积为9ml。如果使用一整瓶（仪器死体积为1.8mL），需加入9滴DAB色原体。同时还要确保确保Dako Autostainer Link 48和PT Link仪器的定期检修。
（二）样本量充足
H＆E和PD-L1染色的载玻片中要存在至少100个活的肿瘤细胞，在室温2-8°C（优选）或不超过25°C的暗处储存时，贴于载玻片上的组织样本应在六个月内进行染色。
（三）适当质控
对照是必须的，只有相应的对照，才能确保结果的可靠。PD-L1检测时需要对照细胞系（CCL）切片，内部阳性对照，内部阴性对照，也可选择扁桃体组织进行对照。任何对照样本中呈现出不应出现的染色，应将患者标本的分析结果视为无效。
（四）肿瘤比例评分（TPS）
肿瘤比例评分是指部分或完整膜染色（≥1+）的肿瘤细胞占样品中存在的所有肿瘤细胞（阴性和阳性）的百分比。
评分时应注意仔细检查肿瘤细胞（PD-L1染色和非染色）以计算分母，并且注意以下几点：
·只包括肿瘤细胞可视的和明确的膜染色
·部分或完整细胞膜染色评分（≥1+）
·染色的免疫细胞不参与评分
·细胞质染色的细胞不参与评分
TPS判定了样本的PD-L1的表达量，在确保以上四点之后所作出的PD-L1检测的结果才是比较可靠的（图1）。

图1. TPS评分标准
对于PD-L1检测结果的精准判读，张智泓教授认为对于目前cut-off值定为50%，这也是一个非常合理的值，因为可重复性、可信度都很好，客观性更强。不同病理医生进行判读，可能结果有差异，即使同一位病理医师进行判读，不同时间也有可能出现不同的判读结果。但是在一定范围内，具有比较好的可重复性，这是非常重要的，不至于因为可重复性差，出现影响结果的判读。
规范的PD-L1检测报告应包括哪些内容？
张智泓教授指出，规范的PD-L1检测报告应该包括以下几部分内容：
定性结果：PD-L1结果是阴性还是阳性；
定量结果：肿瘤比例分数（TPS），即PD-L1阳性细胞占肿瘤细胞比例；
检测平台与检测抗体。
只有规范的病理报告才能为临床医师提供好的治疗依据。临床医师根据病理医师提供的定性、定量检测结果，决定具体的治疗方案。比如，PD-L1表达≥50%，可选择帕博利珠单抗单药治疗；PD-L1表达在1%-49%之间，可选择帕博利珠单抗单药或者联合化疗治疗；PD-L1表达<1%，可选择帕博利珠单抗联合化疗治疗。而检测平台与检测抗体则是提示本次PD-L1检测的质量控制，告知临床医师检测的可靠性。例如检测使用Dako平台和搭配22C3抗体，这样的“组合”的可靠性已经在相关实验中得到检验，则检测结果更值得信赖。毕竟病理医师给出的最终检测结果，将影响临床医师制定具体的治疗计划。
2018年11月24日 · 来自专栏 肿瘤免疫
TPS:
为什么要做PD-L1检测？
张教授指出，免疫治疗是当前肿瘤治疗的的前沿和热点，目前已有多个PD-1/L1的免疫检查点抑制剂获批肺癌适应证，并且治疗时间不断前移，比如，默沙东的帕博利珠单抗（pembrolizumab，KEYTRUDA?，可瑞达）就已经在美国获批成为非小细胞肺癌的一线治疗方案。但是免疫治疗并非对所有的患者都有效，因此，通过分子标志物检测，寻找到适合的患者，是实现“精准”肿瘤免疫治疗的关键！
另外，美国FDA批准帕博利珠单抗单药治疗需要进行PD-L1检测。这是因为，多项临床研究证实，无论是一线治疗（初治），还是二线治疗（经治），帕博利珠单抗均可有效延长非小细胞肺癌患者的总生存期，但根据PD-L1分层研究的结果，PD-L1高表达，则疗效更显著，更有可能获益。PD-L1的检测结果，对临床医师制定治疗方案，预估疗效非常重要。
什么时候做PD-L1检测？
张智泓教授指出，目前对于PD-L1检测时间点没有统一定论。但最新的美国权威NCCN指南推荐，在患者确诊时就应马上做一个PD-L1检测，适合的患者可及早接受免疫治疗，从而获得更多的生存获益。但综合看来，全球范围内对于PD-L1检测时机没有统一定论。
如何提升PD-L1检测和判读的“精准性”？
张智泓教授表示，PD-L1检测是病理所有免疫组化项目当中最繁杂的检测，因为检测抗体种类繁多，且部分抗体国内仍未上市，检测平台多样，不同检测平台检测结果可能不一致，技术人员水平良莠不齐。因此，需要对病理医师、技术人员进行系统培训，才能确保PD-L1检测的质量控制。对于PD-L1的精准检测和判读，以22C3为例，张教授认为需要做到以下四个方面：
（一）分析前要求
分析前，对于样本、试剂盒、设备都有较高的要求。
对于样本的要求：样本使用中性缓冲福尔马林固定12-72h，在60℃或60℃以下用熔化的石蜡浸润，FFPE块切成仅4-5μm切片，在58±2℃下烘干1h，在FFPE切片后的6个月内染色。一般来说，5年以上的FFPE块可能已经丧失免疫反应，不适宜用来进行PD-L1检测。部分患者从外院拿来的空白切片标本虽然未满5年，但是由于保存等多方面因素，也有可能影响PD-L1检测结果。
对于试剂盒和设备的要求，22C3试剂盒需要在2-8℃下储存，染色前试剂盒必须处于室温，DAB：底物缓冲液瓶体积标注为7.2ml，但实际体积为9ml。如果使用一整瓶（仪器死体积为1.8mL），需加入9滴DAB色原体。同时还要确保确保Dako Autostainer Link 48和PT Link仪器的定期检修。
（二）样本量充足
H＆E和PD-L1染色的载玻片中要存在至少100个活的肿瘤细胞，在室温2-8°C（优选）或不超过25°C的暗处储存时，贴于载玻片上的组织样本应在六个月内进行染色。
（三）适当质控
对照是必须的，只有相应的对照，才能确保结果的可靠。PD-L1检测时需要对照细胞系（CCL）切片，内部阳性对照，内部阴性对照，也可选择扁桃体组织进行对照。任何对照样本中呈现出不应出现的染色，应将患者标本的分析结果视为无效。
（四）肿瘤比例评分（TPS）
肿瘤比例评分是指部分或完整膜染色（≥1+）的肿瘤细胞占样品中存在的所有肿瘤细胞（阴性和阳性）的百分比。
评分时应注意仔细检查肿瘤细胞（PD-L1染色和非染色）以计算分母，并且注意以下几点：
·只包括肿瘤细胞可视的和明确的膜染色
·部分或完整细胞膜染色评分（≥1+）
·染色的免疫细胞不参与评分
·细胞质染色的细胞不参与评分
TPS判定了样本的PD-L1的表达量，在确保以上四点之后所作出的PD-L1检测的结果才是比较可靠的（图1）。

图1. TPS评分标准
对于PD-L1检测结果的精准判读，张智泓教授认为对于目前cut-off值定为50%，这也是一个非常合理的值，因为可重复性、可信度都很好，客观性更强。不同病理医生进行判读，可能结果有差异，即使同一位病理医师进行判读，不同时间也有可能出现不同的判读结果。但是在一定范围内，具有比较好的可重复性，这是非常重要的，不至于因为可重复性差，出现影响结果的判读。
规范的PD-L1检测报告应包括哪些内容？
张智泓教授指出，规范的PD-L1检测报告应该包括以下几部分内容：
定性结果：PD-L1结果是阴性还是阳性；
定量结果：肿瘤比例分数（TPS），即PD-L1阳性细胞占肿瘤细胞比例；
检测平台与检测抗体。
只有规范的病理报告才能为临床医师提供好的治疗依据。临床医师根据病理医师提供的定性、定量检测结果，决定具体的治疗方案。比如，PD-L1表达≥50%，可选择帕博利珠单抗单药治疗；PD-L1表达在1%-49%之间，可选择帕博利珠单抗单药或者联合化疗治疗；PD-L1表达<1%，可选择帕博利珠单抗联合化疗治疗。而检测平台与检测抗体则是提示本次PD-L1检测的质量控制，告知临床医师检测的可靠性。例如检测使用Dako平台和搭配22C3抗体，这样的“组合”的可靠性已经在相关实验中得到检验，则检测结果更值得信赖。毕竟病理医师给出的最终检测结果，将影响临床医师制定具体的治疗计划。
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得尔塔科技是光学模组领域全球领先的主流供应商，同时是全球顶级品牌的核心供应商之一。公司采用行业领先的flip-chip技术，可以提供更稳定的性能，更强的抗干扰、更小的产品尺寸，以满足特定客户的产品需求。
公司拥有智能化生产平台，通过建设高标准无尘车间、精密的自动化生产线、搭建智能化生产系统、并应用严格的产品质量管理体系，为生产、品质保驾护航。摄像头模块产品从FF到Dual Camera均实现了98%以上的良品率，现有最大年产能2亿台，未来，伴随着新基地的投产，产能将进一步提升。
得尔塔科技具有行业领先的高精尖试验设备，含FTIR、X-Ray、TBR、酸碱化学试验等先进解析和信赖试验设备一百多台，专注光学领域的研发和生产分析实验，聚焦摄像头模组的同时，积极布局新技术、新产品和新服务。公司以多年专业经验铸就卓越竞争优势，未来将伴随摄像头高端化、双摄、三摄等技术创新，将业务向手机、IoT、智能汽车等领域延伸，带来不断增长的巨大空间。
得尔塔科技目前有广州、珠海和日本熊本三处办公地点，公司广纳贤才，已形成一支一流的生产、运营团队和行业领先的专业研发团队。公司团队汇聚中、日、韩多国行业经验丰富人士，研发团队超过400人，已累计取得专利近百项。
得尔塔科技2021年5月正式由闻泰科技股份有限公司收购股权，成为旗下子公司。
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8月25日，集度与禾赛科技正式签署战略合作协议，双方将发挥各自技术与资源优势，通过深度合作打造更安全、更高效的智能驾驶系统。
集度首席执行官夏一平、禾赛科技联合创始人兼CEO李一帆出席此次签约仪式。
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