【科学家成功实现活细胞转录组测序】中国科学报：在我们呱呱坠地之前，受精卵是如何发育成复杂个体的？为何正常的细胞会慢慢变成癌细胞？
细胞是生命的基本单位，了解它的过去、现在和未来不仅有助于我们了解正常发育的过程，也对理解疾病的产生和发展至关重要。然而，想要“看清”细胞的“前世今生”仍然存在显著的技术困难。
8月17日，现任中国科学院深圳先进技术研究院合成生物学研究所研究员（原瑞士洛桑联邦理工学院博士后）陈万泽以共同第一作者身份在国际顶级期刊Nature上发表长文，介绍了研究团队在国际首创的活细胞转录组测序技术（Live-seq），该技术首次让单细胞进行转录测序后，依然能保持细胞存活，首次实现了活细胞全基因表达的连续观测。
“该研究实现了使用Live-seq技术对同一个活细胞多次分离部分细胞质进行多次转录组测序的可行性，表明这一技术有望在将来用于构建单个活细胞的转录组系列变化动态。该研究为单细胞转录组测序提供了全新的研究策略，为我们理解生命过程的动态变化提供了强有力的手段，是这一领域的又一重大突破。” 北京大学生命科学学院教授汤富酬评论道。
不杀死细胞就能测序
人类体内的细胞拥有几乎一样的基因组，但是为什么能够产生多种多样的细胞？基因组中数万个的基因表达与否和高低，很大程度上决定了细胞的种类和功能，比如神经细胞、免疫细胞、各种肿瘤细胞等等。
因此，如果知道细胞不同时间的基因表达的变化，就能够了解细胞的过去、现在和未来。
当前，单细胞转录组测序技术是了解细胞状态的重要手段，就像看一张“高清照片”，通过单细胞测序能够看清细胞现在所有基因的表达状态。但是这些技术在理解细胞状态“电影”般的动态变化上却有很大的挑战。
“利用单细胞转录组测序技术来观测细胞状态的前提，是需要将细胞裂解，提取其中的RNA来测定每个基因表达量的高低，但这样就不能避免地杀死了细胞。”陈万泽说道，“使用单细胞测序技术，也只能了解到一个细胞当下的状态，却不能获得它的过去，也无法知晓它将来的功能。”
通过近七年的努力，陈万泽与合作者开发了活细胞转录组测序技术Live-seq，其核心是通过对活细胞中的部分细胞质进行微创提取，并对极其微量的细胞质RNA进行扩增，实现在进行单细胞转录组测序后，依旧保持细胞的存活和功能，从而可以跟踪细胞的动态变化。
论文通讯作者、瑞士洛桑联邦理工学院教授Bart Deplancke表示，该技术兼具全基因表达分辨率和动态解析能力，是目前对单细胞转录组直接动态测量、偶联细胞现有状态和其后续表型的唯一解决方案。
两次碰壁，终于“钓”出RNA
如何在不杀死细胞的前提下，看到细胞的动态变化？
“我们首先想到的是外泌体，它是细胞向外面吐出来的小泡，里面有蛋白、RNA等物质。如果我们把单个细胞的外泌体都收集起来，再对其中的RNA进行测量，或许就可以在一定程度上反映细胞状态而又不杀死细胞。”陈万泽说道。
单个细胞中仅有10 pg（皮克）的RNA，这相当于一克的一千亿分之一的重量，而细胞分泌的外泌体中的RNA更是少之又少。研究团队设计了微流控芯片来完成单细胞捕获、外泌体收集等过程，发现由于外泌体中的RNA数量太少，根本无法实现单细胞分子水平的观测。
随后，陈万泽尝试利用在生命科学领域非常小众的原子力显微镜，它有一个很尖的硅探针，多用来检测物质表面性质。研究团队通过对探针进行表面活化、修饰、洗脱等改造后，让其能够把细胞中的RNA“钓”出来。
“这种探针很细，对细胞的损伤很小，就像‘鱼钩’一样，改造后可以把细胞中的RNA‘钓’出来，又能保证细胞继续存活。我们改造了数十个探针后，结果只在两个细胞上成功“钓”到了基因。”陈万泽回忆道，当时购买一个原子力显微镜探针需要800美元，研究成本太高，成功率太低，让这项研究再次面临阻碍。
瑞士洛桑联邦理工学院学科交叉氛围浓厚，在一次偶然的学术交流中，陈万泽与导师了解到，瑞士苏黎世联邦理工学院的Julia Vorholt实验室开发了一种特殊的原子力显微镜，能够吸出一部分的细胞质。
一番交流后，两个课题组一拍即合，展开了联合攻关。联合团队对一系列的实验过程进行了优化，包括解决了RNA降解、低温下的快速操作、超微量样品转移、采样通道清洗避免交叉污染、图像下追踪细胞等多种问题，以保证实验结果的可靠性。
联合团队利用重新改造后的Live-seq，对五种类型共295个细胞进行了测序，发现Live-seq能够有效区分不同类型的细胞，且平均每个细胞能检测到约4112个基因的表达信息。
仅对少量的细胞质进行测序，是否就能代表细胞的状态？
“我们平行比较了单细胞测序结果，发现活细胞测序结果与普通的单细胞测序结果高度吻合，证明Live-seq能够很好地体现细胞的全转录组状态。”陈万泽说道。
细胞的存活率又如何保证呢？
“原子力探针尖端只有几百个纳米大小，而且能和细胞膜密封，对细胞损伤极小。吸取约5%至50%的细胞质后，细胞体积可以快速恢复到正常水平，存活率在85%至89%之间，细胞能进行正常分裂。通过一系列的功能分析和分子表征，我们没有发现Live-seq对细胞的状态有显著的影响。”陈万泽表示。
对此，审稿人在评审意见中也写道：“由于细胞测序后仍旧存活，Live-seq首次实现对同一个细胞全基因表达的连续测量。”
细胞测序史从“高清图片”到“高清电影”的跨越
在细胞观测技术史上，显微成像和基因编辑介导的分子记录等技术不仅能观察细胞水平的生长、分裂、死亡等过程，还能观测细胞中的单个或几个基因指标。
2009年，单细胞转录组测序技术为更系统全面地定义细胞类型和状态提供了变革性手段。但人们仍然只能观察到细胞的静态状态，无法连续观测细胞的动态或者检查细胞后续的表型。
如果将利用单细胞转录组测序技术观测细胞比喻为看一张细胞在分子水平的高清图片，那么利用Live-seq观测细胞，就好比看一部高清电影，能够看见细胞的“前世今生”。
“Live-seq可以回答细胞怎样的过去决定了它的现在，不只知道细胞中为何存在差异，还知道这些差异从何而来。”陈万泽介绍道。
在验证实验中，研究团队利用Live-seq直接测定了同一个巨噬细胞在不同时间的状态变化，发现细胞起始状态的少数基因的表达差异和噪音（如Nfkbia、Gsn等）是决定细胞后续反应差异的重要原因。对应地，普通的单细胞转录组无法找到这些规律。
陈万泽表示，尽管Live-seq仍然存在诸多挑战，需要进一步完善，比如低通量、暂不能在体内应用、在高度极化且mRNA分布不均的细胞中无法实现全细胞转录组测序、对细胞更多次的采样还需进一步研究等，但该技术首次实现了活细胞连续观测，也为单细胞测序技术发展带来了更多可能性。未来，团队将进一步进行深入研究，提高Live-seq技术的可用性。
细胞是生命的基本单位，了解它的过去、现在和未来不仅有助于我们了解正常发育的过程，也对理解疾病的产生和发展至关重要。然而，想要“看清”细胞的“前世今生”仍然存在显著的技术困难。
8月17日，现任中国科学院深圳先进技术研究院合成生物学研究所研究员（原瑞士洛桑联邦理工学院博士后）陈万泽以共同第一作者身份在国际顶级期刊Nature上发表长文，介绍了研究团队在国际首创的活细胞转录组测序技术（Live-seq），该技术首次让单细胞进行转录测序后，依然能保持细胞存活，首次实现了活细胞全基因表达的连续观测。
“该研究实现了使用Live-seq技术对同一个活细胞多次分离部分细胞质进行多次转录组测序的可行性，表明这一技术有望在将来用于构建单个活细胞的转录组系列变化动态。该研究为单细胞转录组测序提供了全新的研究策略，为我们理解生命过程的动态变化提供了强有力的手段，是这一领域的又一重大突破。” 北京大学生命科学学院教授汤富酬评论道。
不杀死细胞就能测序
人类体内的细胞拥有几乎一样的基因组，但是为什么能够产生多种多样的细胞？基因组中数万个的基因表达与否和高低，很大程度上决定了细胞的种类和功能，比如神经细胞、免疫细胞、各种肿瘤细胞等等。
因此，如果知道细胞不同时间的基因表达的变化，就能够了解细胞的过去、现在和未来。
当前，单细胞转录组测序技术是了解细胞状态的重要手段，就像看一张“高清照片”，通过单细胞测序能够看清细胞现在所有基因的表达状态。但是这些技术在理解细胞状态“电影”般的动态变化上却有很大的挑战。
“利用单细胞转录组测序技术来观测细胞状态的前提，是需要将细胞裂解，提取其中的RNA来测定每个基因表达量的高低，但这样就不能避免地杀死了细胞。”陈万泽说道，“使用单细胞测序技术，也只能了解到一个细胞当下的状态，却不能获得它的过去，也无法知晓它将来的功能。”
通过近七年的努力，陈万泽与合作者开发了活细胞转录组测序技术Live-seq，其核心是通过对活细胞中的部分细胞质进行微创提取，并对极其微量的细胞质RNA进行扩增，实现在进行单细胞转录组测序后，依旧保持细胞的存活和功能，从而可以跟踪细胞的动态变化。
论文通讯作者、瑞士洛桑联邦理工学院教授Bart Deplancke表示，该技术兼具全基因表达分辨率和动态解析能力，是目前对单细胞转录组直接动态测量、偶联细胞现有状态和其后续表型的唯一解决方案。
两次碰壁，终于“钓”出RNA
如何在不杀死细胞的前提下，看到细胞的动态变化？
“我们首先想到的是外泌体，它是细胞向外面吐出来的小泡，里面有蛋白、RNA等物质。如果我们把单个细胞的外泌体都收集起来，再对其中的RNA进行测量，或许就可以在一定程度上反映细胞状态而又不杀死细胞。”陈万泽说道。
单个细胞中仅有10 pg（皮克）的RNA，这相当于一克的一千亿分之一的重量，而细胞分泌的外泌体中的RNA更是少之又少。研究团队设计了微流控芯片来完成单细胞捕获、外泌体收集等过程，发现由于外泌体中的RNA数量太少，根本无法实现单细胞分子水平的观测。
随后，陈万泽尝试利用在生命科学领域非常小众的原子力显微镜，它有一个很尖的硅探针，多用来检测物质表面性质。研究团队通过对探针进行表面活化、修饰、洗脱等改造后，让其能够把细胞中的RNA“钓”出来。
“这种探针很细，对细胞的损伤很小，就像‘鱼钩’一样，改造后可以把细胞中的RNA‘钓’出来，又能保证细胞继续存活。我们改造了数十个探针后，结果只在两个细胞上成功“钓”到了基因。”陈万泽回忆道，当时购买一个原子力显微镜探针需要800美元，研究成本太高，成功率太低，让这项研究再次面临阻碍。
瑞士洛桑联邦理工学院学科交叉氛围浓厚，在一次偶然的学术交流中，陈万泽与导师了解到，瑞士苏黎世联邦理工学院的Julia Vorholt实验室开发了一种特殊的原子力显微镜，能够吸出一部分的细胞质。
一番交流后，两个课题组一拍即合，展开了联合攻关。联合团队对一系列的实验过程进行了优化，包括解决了RNA降解、低温下的快速操作、超微量样品转移、采样通道清洗避免交叉污染、图像下追踪细胞等多种问题，以保证实验结果的可靠性。
联合团队利用重新改造后的Live-seq，对五种类型共295个细胞进行了测序，发现Live-seq能够有效区分不同类型的细胞，且平均每个细胞能检测到约4112个基因的表达信息。
仅对少量的细胞质进行测序，是否就能代表细胞的状态？
“我们平行比较了单细胞测序结果，发现活细胞测序结果与普通的单细胞测序结果高度吻合，证明Live-seq能够很好地体现细胞的全转录组状态。”陈万泽说道。
细胞的存活率又如何保证呢？
“原子力探针尖端只有几百个纳米大小，而且能和细胞膜密封，对细胞损伤极小。吸取约5%至50%的细胞质后，细胞体积可以快速恢复到正常水平，存活率在85%至89%之间，细胞能进行正常分裂。通过一系列的功能分析和分子表征，我们没有发现Live-seq对细胞的状态有显著的影响。”陈万泽表示。
对此，审稿人在评审意见中也写道：“由于细胞测序后仍旧存活，Live-seq首次实现对同一个细胞全基因表达的连续测量。”
细胞测序史从“高清图片”到“高清电影”的跨越
在细胞观测技术史上，显微成像和基因编辑介导的分子记录等技术不仅能观察细胞水平的生长、分裂、死亡等过程，还能观测细胞中的单个或几个基因指标。
2009年，单细胞转录组测序技术为更系统全面地定义细胞类型和状态提供了变革性手段。但人们仍然只能观察到细胞的静态状态，无法连续观测细胞的动态或者检查细胞后续的表型。
如果将利用单细胞转录组测序技术观测细胞比喻为看一张细胞在分子水平的高清图片，那么利用Live-seq观测细胞，就好比看一部高清电影，能够看见细胞的“前世今生”。
“Live-seq可以回答细胞怎样的过去决定了它的现在，不只知道细胞中为何存在差异，还知道这些差异从何而来。”陈万泽介绍道。
在验证实验中，研究团队利用Live-seq直接测定了同一个巨噬细胞在不同时间的状态变化，发现细胞起始状态的少数基因的表达差异和噪音（如Nfkbia、Gsn等）是决定细胞后续反应差异的重要原因。对应地，普通的单细胞转录组无法找到这些规律。
陈万泽表示，尽管Live-seq仍然存在诸多挑战，需要进一步完善，比如低通量、暂不能在体内应用、在高度极化且mRNA分布不均的细胞中无法实现全细胞转录组测序、对细胞更多次的采样还需进一步研究等，但该技术首次实现了活细胞连续观测，也为单细胞测序技术发展带来了更多可能性。未来，团队将进一步进行深入研究，提高Live-seq技术的可用性。
老公因为嫌弃妻子“胖了丑了”出轨该怎么办？
问：我今年36岁在一家公司广告总监，我俩是大学同校。
一开始我们挣得还差不多，可是我老公走了狗屎运毕业后就进了大厂搞金融了，现在他年薪200多万，我们有一个儿子6岁了，生了孩子我的身材没恢复回来，每天忙于照顾孩子和家里，夫妻交流少了很多，更别说二人世界了。
最初他只是催我快减肥，自己的身体要紧，可是我根本没精力做这些。后来他三番五次嫌弃我身材，还说连夫妻生活都觉得很没劲。
前段时间，他忽然说给我20万让我减肥。我当时一听就气不打一处来，我遭那么大罪生孩子他居然嫌弃我，就和他大吵一架！结果他居然因为这种理由出轨了！
他说我胖得让他硬不起来，他只能找别人试试自己的功能还健不健全！
受到刺激后，我疯狂减肥，半年时间减到90多斤，他后来也和那个女人断了。我以为他会收了心回来好好过日子，结果发现他只是和前一个JK小网红断了，现在他又找了个卖衣服的网红！
吕老师，我真的要疯了！
我是该一次性拿一笔钱和他离婚，还是想办法制住他乱搞？他还能被治住吗？
我不想离婚，但也不想憋屈地活着，卢老师我该怎么办啊？
老吕来了：
答：男人嫌弃老婆怎么办？
这个问题就是“试金石”，可以测出一个女人的情商。
我告诉你，绝大多数女人的反应都是这样的：言语上激烈反对，行动上默默配合。
女人有一个误区，那就是要“活成男人想要的样子”。
“女为悦己者容”这句话害死太多女人了。
其实这句话没错，我要为的是“悦己者”打扮，减肥。
但如果你“不悦我”，那我凭什么要为你打扮呢？
我告诉你一个真相：所有男人都有嫌弃老婆的倾向。
因为男人就是这种天生的“势利鬼”，他们随时都会用“强弱”视角看世界。
他随时都会对女人进行“价值测试”，如果测试结果是“你是高价值女人”，他就会继续爱你。
一旦测出你是“低价值女人”，那他对你的付出就会打折，甚至他就会开始各种伤害你的行为，比如背叛你。
你老公的嫌弃，从他赚的钱是你的3、4倍开始。
他开始膨胀，潜意识里会有一句话：以前我觉得你和我很匹配我，但是现在我赚这么多钱，就要有和我赚的钱相称的女人和我在一起了。
你只是“30万”老婆，我要的是“120万”老婆。
但是你还在女人的“高价值标准”世界里。
你觉得我给你生孩子了，我在你的价值体系中就应该很高啊。
但男人根本不会把这件事当回事。
为什么？
因为你没有管理你老公的“三观”。
你没有让男人为你生孩子的辛苦买单过。
你没有告诉他，生孩子对女人是多么辛苦的事儿，而你愿意这么辛苦，是因为你爱他。
男人的三观是“金钱决定价值”，女人必须要把男人的三观改为“感情决定价值”。
如果没有这样的转换，男人永远觉得你“配不上他”。
那么怎么管理男人的“三观”？
你要做两件事：
1.索取情绪价值：
你要记住，男人越是为什么付出，他就越是珍惜什么。
如果你在养孩子这件事上，让他成为一个看客，那他根本不可能珍惜婚姻生活和你养孩子这件事。
2.给予情绪价值
一个年薪30万的男人，他想要的，可能就是一个安稳的家。
但是一个年薪120万的男人，他想要的，可能是一个高品质的情感生活。
什么叫“高品质”？
一个是“性的高品质”，比如他对你的身材有要求，对男女关系上有要求。
一个是“爱的高品质”，比如他工作带来的巨大压力，需要通过婚姻来化解。
第一个高品质，我们是尽量满足，但很多男人以为所谓的“高品质”只有第一种。
但其实，女人真正应该做的，就是把男人引导到第二种“高品质”的生活中去。
但两种高品质生活的前提是你要学会跟男人“讨价还价”。
男人说你要减肥，其实就是在“贬值”你。
你反过来说他没良心，也是在“贬值”他。
这样做，你们都成了“差评师”。
其实真正聪明的做法应该是：你告诉他，如果他性方面有问题，你们可以解决，但如果他用这种带有“侮辱性”的方式来要挟你，甚至以此作为他背叛的理由，那你一定让他吃不了兜着走，无论如何，他都要为伤害你，付出代价，做出补偿。
这样你才能把你的“高价值”找回来。
但是你做了什么？
去减肥，去无底线地原谅他。
这两件事就把你自己贬值到了“地摊货”的位置上。
他就会更加肆无忌惮。
所以，说到底，女人的高价值就体现在两点。
第一，你有没有你自己的标准和底线，有没有“有仇必报”？
第二，你有没有能力搞定男人的心，抓住他的核心需要？
如果你正在遭遇婚姻危机不知道怎么办，可以把你的具体情况私信我，我来帮你解决。
问：我今年36岁在一家公司广告总监，我俩是大学同校。
一开始我们挣得还差不多，可是我老公走了狗屎运毕业后就进了大厂搞金融了，现在他年薪200多万，我们有一个儿子6岁了，生了孩子我的身材没恢复回来，每天忙于照顾孩子和家里，夫妻交流少了很多，更别说二人世界了。
最初他只是催我快减肥，自己的身体要紧，可是我根本没精力做这些。后来他三番五次嫌弃我身材，还说连夫妻生活都觉得很没劲。
前段时间，他忽然说给我20万让我减肥。我当时一听就气不打一处来，我遭那么大罪生孩子他居然嫌弃我，就和他大吵一架！结果他居然因为这种理由出轨了！
他说我胖得让他硬不起来，他只能找别人试试自己的功能还健不健全！
受到刺激后，我疯狂减肥，半年时间减到90多斤，他后来也和那个女人断了。我以为他会收了心回来好好过日子，结果发现他只是和前一个JK小网红断了，现在他又找了个卖衣服的网红！
吕老师，我真的要疯了！
我是该一次性拿一笔钱和他离婚，还是想办法制住他乱搞？他还能被治住吗？
我不想离婚，但也不想憋屈地活着，卢老师我该怎么办啊？
老吕来了：
答：男人嫌弃老婆怎么办？
这个问题就是“试金石”，可以测出一个女人的情商。
我告诉你，绝大多数女人的反应都是这样的：言语上激烈反对，行动上默默配合。
女人有一个误区，那就是要“活成男人想要的样子”。
“女为悦己者容”这句话害死太多女人了。
其实这句话没错，我要为的是“悦己者”打扮，减肥。
但如果你“不悦我”，那我凭什么要为你打扮呢？
我告诉你一个真相：所有男人都有嫌弃老婆的倾向。
因为男人就是这种天生的“势利鬼”，他们随时都会用“强弱”视角看世界。
他随时都会对女人进行“价值测试”，如果测试结果是“你是高价值女人”，他就会继续爱你。
一旦测出你是“低价值女人”，那他对你的付出就会打折，甚至他就会开始各种伤害你的行为，比如背叛你。
你老公的嫌弃，从他赚的钱是你的3、4倍开始。
他开始膨胀，潜意识里会有一句话：以前我觉得你和我很匹配我，但是现在我赚这么多钱，就要有和我赚的钱相称的女人和我在一起了。
你只是“30万”老婆，我要的是“120万”老婆。
但是你还在女人的“高价值标准”世界里。
你觉得我给你生孩子了，我在你的价值体系中就应该很高啊。
但男人根本不会把这件事当回事。
为什么？
因为你没有管理你老公的“三观”。
你没有让男人为你生孩子的辛苦买单过。
你没有告诉他，生孩子对女人是多么辛苦的事儿，而你愿意这么辛苦，是因为你爱他。
男人的三观是“金钱决定价值”，女人必须要把男人的三观改为“感情决定价值”。
如果没有这样的转换，男人永远觉得你“配不上他”。
那么怎么管理男人的“三观”？
你要做两件事：
1.索取情绪价值：
你要记住，男人越是为什么付出，他就越是珍惜什么。
如果你在养孩子这件事上，让他成为一个看客，那他根本不可能珍惜婚姻生活和你养孩子这件事。
2.给予情绪价值
一个年薪30万的男人，他想要的，可能就是一个安稳的家。
但是一个年薪120万的男人，他想要的，可能是一个高品质的情感生活。
什么叫“高品质”？
一个是“性的高品质”，比如他对你的身材有要求，对男女关系上有要求。
一个是“爱的高品质”，比如他工作带来的巨大压力，需要通过婚姻来化解。
第一个高品质，我们是尽量满足，但很多男人以为所谓的“高品质”只有第一种。
但其实，女人真正应该做的，就是把男人引导到第二种“高品质”的生活中去。
但两种高品质生活的前提是你要学会跟男人“讨价还价”。
男人说你要减肥，其实就是在“贬值”你。
你反过来说他没良心，也是在“贬值”他。
这样做，你们都成了“差评师”。
其实真正聪明的做法应该是：你告诉他，如果他性方面有问题，你们可以解决，但如果他用这种带有“侮辱性”的方式来要挟你，甚至以此作为他背叛的理由，那你一定让他吃不了兜着走，无论如何，他都要为伤害你，付出代价，做出补偿。
这样你才能把你的“高价值”找回来。
但是你做了什么？
去减肥，去无底线地原谅他。
这两件事就把你自己贬值到了“地摊货”的位置上。
他就会更加肆无忌惮。
所以，说到底，女人的高价值就体现在两点。
第一，你有没有你自己的标准和底线，有没有“有仇必报”？
第二，你有没有能力搞定男人的心，抓住他的核心需要？
如果你正在遭遇婚姻危机不知道怎么办，可以把你的具体情况私信我，我来帮你解决。
【TalkOP情报】海贼王1057话情报（不断更新的传送门地址在评论区）
第4次更新，超详细情报翻译 by【TalkOP汉化】星霄、荒薪、嘈杂 翻译出处：TalkOP海贼王论坛、wx号、微博（随意转载无需授权，引用翻译注明出处）情报出处：英文站
第1057话 “终幕”
【1】
杰尔马的 “啊……无感情海游记” vol.16，“凯撒的毒气攻击”
本章从花之都的一处观众席开始。我们能看到许多民众聚坐在舞台前，听1052话那位黑发新老师讲故事，老师旁边有艺伎弹奏三味线。
老师用日本诗歌的形式讲述故事。“鬼岛暗夜风起云涌，野兽啸长空，声作雷霆伴青龙。雨落刃舞，淘遍秋叶红。” 结尾说到，“为了替光月御田之死报仇，他忠心的家臣们登上了舞台。”
老师：“在下不善言辞，但请容我将故事道来♪”
民众们激动地喊着 “是赤鞘九侠！”
老师：“一切始于……火祭的傍晚……”
镜头切换至常影港边的树林，能看到桃之助用龙形态在飞速狂奔，锦卫门与大和站在龙上。桃之助和锦卫门都对大和的话感到惊讶。
桃之助：“什么~~~?! 你说你不出海了，大和？！”
大和：“没错，我不走了。我也已经跟路飞他们说过了！！”
锦卫门：“是……是这样吗！！”
桃之助惊讶于大和的决定：“你是害怕会……不，你很坚决了！！你刚刚确实说了‘已经决定了’之类的话……！！”
大和：“是的……御田的旅程始于周游国内，对吧？我对这个世界也同样一无所知！所以我要走同样的路……然后终有一天会出海！！”
听到大和的诉说，桃之助变得有些生气了，因为他意识到路飞与大和已经交流了上面所有事，但路飞都没有跟他道别：“难以置信！所以你和路飞已经谈清楚了……这更加不可原谅了！！为什么要这样对我？！为什么跟我们一句话都不说就离开了？！”
【2】
桃之助记起了一些父亲死后而他还活着的事。这些都是我们已经在漫画里看到过的。
-凯多在御田城上抓着桃之助的脖子的场景（973话）。
（凯多：你叫什么名字？
凯多：你的父亲……是个傻瓜殿下）
-桃之助在遇到路飞（685话）和跟路飞打架（701话）的场景。
（桃子：你……是谁？！
路飞：我叫路飞！
路飞：你是武士又怎样？！我将来还会成为海贼王呢！！
桃子：哼！那么，我有一天会成为和之国的将军，你这个大傻瓜！
路飞：那是什么啊，你这鳗鱼？！
桃子：给我放尊重点，你这猴子！！！）
-他们成立同盟的场景（819话）。
（路飞：你难道只是个摆设吗，桃子？！！
路飞：你打算光是站在那里哭吗？！！
桃子：我想要打败凯多！！！
路飞：那我们联手吧！！我们是同盟了！！）
-堪十郎挟持他（976话）和在凯多面前自报家门（986话）的场景。
（桃子：路飞！！！
路飞：这个笨蛋胆小鬼……！！你不过是个只会说大话的扎着发髻的小鬼！！想办法活下去！！我们会去救你的！！！因为我们是朋友！！）
（凯多：那我再问你一次，小鬼……你叫什么名字？
桃子：光月桃之助！！！会成为和之国将军的男人！！！）
-路飞在让他用成年形态攻击凯多后要求他停下鬼之岛的场景（1026话）。
（路飞：那就上吧！！你能飞的！！
桃子：好！
路飞：去让鬼岛停下吧！！别担心凯多的事！！我向你保证我会赢的！！！）
回到现在，桃子：“*喘气 喘气*我们的情谊明明如此深厚……！！我们一起走过了这漫长的旅途……他没良心的吗？！真是个残忍的人！！我看错你了，路飞！！无礼和随性不是一回事！！对吧？！锦卫门！！”
锦卫门也感到生气：“正是如此，殿下！！但是……我们为什么不飞过去呢，殿下？”
桃之助：“住嘴！！”
锦卫门：“桃之助大人现在是和之国独一无二的“将军”！我们去问问路飞阁下有什么解释……然后再决定要怎么办！！”
桃之助：“没错！这才是‘武士道’！！路飞！！我以为你说过我们是朋友的！！”
大和：“你们不至于要这么生气吧……”
桃之助：“他对我无礼！！不可原谅！！我要揍他一顿、再咬他一口！！”
切换到兔碗常影港，路飞、罗、基德的船已经准备走了。
罗：“下次见面我们就是敌人了，要是我们打算杀了你们，也别跟我抱怨”
路飞：当然了”
乔巴：“再见，特拉男~~”
罗：“闭嘴！”
乔巴：“呃~~~~”
基德：“我们走啦！！”
就在启航之前，桃之助赶到了海岸。他切换成了人形态，与大和一起冲向路飞。
桃之助：“喂！！！”
布鲁克：“嗯？”
路飞：“哦”
【3】
桃之助：你们这些家伙！！！呼，呼
大和：喂！我们来送你们啦！！
路飞：桃之助！！锦卫门！！
山治：大和酱～～～♡
桃之助：呃！！路飞！！！
大和：路飞♡
路飞：哇啊啊！！
锦卫门拔剑出鞘：路飞！！你们到底在想什么？！！我们跟你们在一起最久，而你们却一句话都不说就走了？！将军可是大怒！！我们想听听你到底有什么解释！！！
路飞：我们现在不是在说话吗
桃之助瞪着路飞：路飞！！这是将军的命令……
随后桃之助不禁大哭：……求你们不要走！！！我会寂寞的！！！*抽泣*我们永远待在一起吧！！！别丢下我啊——！！！*抽噎*多亏了你们……我们才活下来！！多亏了你们……我们才有笑容！！！谢谢你们帮我为父母报仇！！我很笨，不知道要怎么表达才好！！我好害怕……之后会发生的事！！所以求求你们！别走啊！！！
罗宾、山治和布鲁克笑着看向桃之助，乔巴感动了，弗兰奇哭得像桃之助那样。
索隆大笑：真尴尬啊
娜美同样动容了，让索隆不要责怪他：桃子毕竟还是个小孩嘛……
【4】
路飞：乌索普！！
乌索普：嗯，已经做好了！！
路飞向乌索普要个东西，乌索普已备好。路飞把那东西赠给了桃之助。
路飞：我们在这里等着，是因为我想把这个交给你！！摆什么将军架子呢，桃子！！就算你突然变大变厉害，我们也知道你的本性！！你是个傻瓜……还是个胆小鬼，但是……我把你当成我的小弟弟！！
桃之助拆封赠礼，看到一面巨大的草帽一伙旗帜。
桃之助：这是……你的旗子！！
路飞：要是你陷入困境，就想想你在海上冒险！！把这个挂在和之国里！！要是以后有什么危险的家伙来了，就给他们看这个！！告诉他们，要是敢动“我们的人”，就是跟我们作对！！！
路飞在说这些话的时候，阳光号上所有的伙伴们都在他身后。桃之助看向路飞，又哭了。
桃之助：我是……你们的人……？！
路飞：锦卫门！！大和！！桃子！！要是你们哪天打算成为海贼，我会来接你们的！！
大和：好耶！！
路飞：但是胆小鬼不许上船！！
桃子：呃呃
路飞：就交给你了，大和！！
大和：没问题！！
听完路飞的话，锦卫门笑了、大和对此十分兴奋，桃之助为此感谢了路飞。
路飞下令启航，剩下的船员们向桃之助告别，三人目送草帽一伙离开时。
桃子：锦卫门！！
锦卫门：我在？
桃子：总有一天……！！我要超越光月御田！！！
锦卫门：在下会伴您左右，见证那一天的……！！
大和：诶？超越我吗？
桃子：才不是！！
【5】
在海上，路飞、罗和基德的船将要驶离和之国的边界。
娜美：那就往白舞走吧！！那边有个可以让我们的船下去的正常港口
布鲁克：那太好了！！我们是攀过瀑布上来的，我还以为这次也要从瀑布冲下去呢！！
乔巴：太好了！
基德：哦——你们打算走正常港口啊，因为那样更“安全”是吧哈哈哈
很适合你们这些废物嘛
路飞、罗：更……安全……？！
草帽团：等等等等路飞？！安全些没什么错吧！别上当啊！！
红心团：咦？！船长你的表情怎么回事？！！走正常的港口没什么不好啊！！
路飞：甚平！让我来！！
草帽团：路飞不要啊！！
三艘船从和之国的瀑布坠落，三位船长这才发现走这条路可能不是个好主意。
红心团：不要啊啊啊啊啊！！
船长们：上了！！
所有人：不要啊我们会死的！！！
旁白伴随着三位船长的面部特写出现：【桃之助大人和锦卫门带来的罪犯们大显身手！！！他们像真正的“明王”一样大开杀戒！！即便是“龙王凯多”或“妖怪”大花魁也敌不过他们，最终决战之刻天都被劈开了！！！】
转至花之都的观众席。老师继续讲述着故事：……话分两头，大蛇身上起火了！！他们以为他已经死了，但他的恨意支撑着他！！他朝着日和公主扑过去！！然而刀光一闪！光月御田的二号家臣传次郎登场！！熊熊燃烧的最后一颗头也被砍落！！黑炭大蛇的故事就此落幕！！他们的上方雷鸣电闪，鬼岛和龙王凯多也随之坠落！！笼罩在和之国上空20多年的乌云……！！确实地逐渐消散……！！他们从都城的祭典音乐转过身……有东西动了！！！那竟然！是浑身火焰的大蛇……盯着他们张开了口……“黑炭家的怨恨……会永远诅咒这个国家……”日和公主回想着这个国家过去20年来受的所有苦！！眼中没有丝毫恐惧！！
【6】
当老师讲述故事时，一些分镜描绘了鬼岛发生的事情。老师继续说，日和公主把传次郎推到一侧，无畏地站在熊熊燃烧的大蛇面前。她手中拿着一把光月家徽的扇子，指向大蛇，心中充满了父亲、母亲和国家的回忆。
在一张大跨页中，百姓高喊说他们等的就是这里，老师鼓舞全员一起欢呼。日和（以小紫的打扮）对大蛇说：”烧得越旺越是正统的黑炭是也！”（注：这里应该对应的是御田越煮越入味，不知道日文原文是什么）
日和流着泪回忆御田，而大蛇就这样活生生烧死，听众们发出叫喊。艺伎们（户子也在其中）高声演奏三味线，老师说火祭将会继续，铭记这场始于逆新月相聚之港、最终得报的复仇。一场重振家族的血色故事。
我们看到一张桃之助和他的家人、朋友们站在一起的图（日和，赤鞘武士，大和，小忍，小玉），旁白：“这是一个过去声名显赫的武士们重获荣光的故事。千钧一发，事遂功成。”
桃之助，锦卫门，大和一起前往将军城堡，人们欢迎着他们。他们有一个新的任务要做。
桃之助：“我该把旗子放在哪？”
随着旁白的尾词，帷幕合起。
旁白：“现在小憩。来日若有机会，愿诸位再临。完。”
和之国第三幕以及全篇完。樱花飘舞在整个国境，自由地，迎向未来。
下周不休刊。
第4次更新，超详细情报翻译 by【TalkOP汉化】星霄、荒薪、嘈杂 翻译出处：TalkOP海贼王论坛、wx号、微博（随意转载无需授权，引用翻译注明出处）情报出处：英文站
第1057话 “终幕”
【1】
杰尔马的 “啊……无感情海游记” vol.16，“凯撒的毒气攻击”
本章从花之都的一处观众席开始。我们能看到许多民众聚坐在舞台前，听1052话那位黑发新老师讲故事，老师旁边有艺伎弹奏三味线。
老师用日本诗歌的形式讲述故事。“鬼岛暗夜风起云涌，野兽啸长空，声作雷霆伴青龙。雨落刃舞，淘遍秋叶红。” 结尾说到，“为了替光月御田之死报仇，他忠心的家臣们登上了舞台。”
老师：“在下不善言辞，但请容我将故事道来♪”
民众们激动地喊着 “是赤鞘九侠！”
老师：“一切始于……火祭的傍晚……”
镜头切换至常影港边的树林，能看到桃之助用龙形态在飞速狂奔，锦卫门与大和站在龙上。桃之助和锦卫门都对大和的话感到惊讶。
桃之助：“什么~~~?! 你说你不出海了，大和？！”
大和：“没错，我不走了。我也已经跟路飞他们说过了！！”
锦卫门：“是……是这样吗！！”
桃之助惊讶于大和的决定：“你是害怕会……不，你很坚决了！！你刚刚确实说了‘已经决定了’之类的话……！！”
大和：“是的……御田的旅程始于周游国内，对吧？我对这个世界也同样一无所知！所以我要走同样的路……然后终有一天会出海！！”
听到大和的诉说，桃之助变得有些生气了，因为他意识到路飞与大和已经交流了上面所有事，但路飞都没有跟他道别：“难以置信！所以你和路飞已经谈清楚了……这更加不可原谅了！！为什么要这样对我？！为什么跟我们一句话都不说就离开了？！”
【2】
桃之助记起了一些父亲死后而他还活着的事。这些都是我们已经在漫画里看到过的。
-凯多在御田城上抓着桃之助的脖子的场景（973话）。
（凯多：你叫什么名字？
凯多：你的父亲……是个傻瓜殿下）
-桃之助在遇到路飞（685话）和跟路飞打架（701话）的场景。
（桃子：你……是谁？！
路飞：我叫路飞！
路飞：你是武士又怎样？！我将来还会成为海贼王呢！！
桃子：哼！那么，我有一天会成为和之国的将军，你这个大傻瓜！
路飞：那是什么啊，你这鳗鱼？！
桃子：给我放尊重点，你这猴子！！！）
-他们成立同盟的场景（819话）。
（路飞：你难道只是个摆设吗，桃子？！！
路飞：你打算光是站在那里哭吗？！！
桃子：我想要打败凯多！！！
路飞：那我们联手吧！！我们是同盟了！！）
-堪十郎挟持他（976话）和在凯多面前自报家门（986话）的场景。
（桃子：路飞！！！
路飞：这个笨蛋胆小鬼……！！你不过是个只会说大话的扎着发髻的小鬼！！想办法活下去！！我们会去救你的！！！因为我们是朋友！！）
（凯多：那我再问你一次，小鬼……你叫什么名字？
桃子：光月桃之助！！！会成为和之国将军的男人！！！）
-路飞在让他用成年形态攻击凯多后要求他停下鬼之岛的场景（1026话）。
（路飞：那就上吧！！你能飞的！！
桃子：好！
路飞：去让鬼岛停下吧！！别担心凯多的事！！我向你保证我会赢的！！！）
回到现在，桃子：“*喘气 喘气*我们的情谊明明如此深厚……！！我们一起走过了这漫长的旅途……他没良心的吗？！真是个残忍的人！！我看错你了，路飞！！无礼和随性不是一回事！！对吧？！锦卫门！！”
锦卫门也感到生气：“正是如此，殿下！！但是……我们为什么不飞过去呢，殿下？”
桃之助：“住嘴！！”
锦卫门：“桃之助大人现在是和之国独一无二的“将军”！我们去问问路飞阁下有什么解释……然后再决定要怎么办！！”
桃之助：“没错！这才是‘武士道’！！路飞！！我以为你说过我们是朋友的！！”
大和：“你们不至于要这么生气吧……”
桃之助：“他对我无礼！！不可原谅！！我要揍他一顿、再咬他一口！！”
切换到兔碗常影港，路飞、罗、基德的船已经准备走了。
罗：“下次见面我们就是敌人了，要是我们打算杀了你们，也别跟我抱怨”
路飞：当然了”
乔巴：“再见，特拉男~~”
罗：“闭嘴！”
乔巴：“呃~~~~”
基德：“我们走啦！！”
就在启航之前，桃之助赶到了海岸。他切换成了人形态，与大和一起冲向路飞。
桃之助：“喂！！！”
布鲁克：“嗯？”
路飞：“哦”
【3】
桃之助：你们这些家伙！！！呼，呼
大和：喂！我们来送你们啦！！
路飞：桃之助！！锦卫门！！
山治：大和酱～～～♡
桃之助：呃！！路飞！！！
大和：路飞♡
路飞：哇啊啊！！
锦卫门拔剑出鞘：路飞！！你们到底在想什么？！！我们跟你们在一起最久，而你们却一句话都不说就走了？！将军可是大怒！！我们想听听你到底有什么解释！！！
路飞：我们现在不是在说话吗
桃之助瞪着路飞：路飞！！这是将军的命令……
随后桃之助不禁大哭：……求你们不要走！！！我会寂寞的！！！*抽泣*我们永远待在一起吧！！！别丢下我啊——！！！*抽噎*多亏了你们……我们才活下来！！多亏了你们……我们才有笑容！！！谢谢你们帮我为父母报仇！！我很笨，不知道要怎么表达才好！！我好害怕……之后会发生的事！！所以求求你们！别走啊！！！
罗宾、山治和布鲁克笑着看向桃之助，乔巴感动了，弗兰奇哭得像桃之助那样。
索隆大笑：真尴尬啊
娜美同样动容了，让索隆不要责怪他：桃子毕竟还是个小孩嘛……
【4】
路飞：乌索普！！
乌索普：嗯，已经做好了！！
路飞向乌索普要个东西，乌索普已备好。路飞把那东西赠给了桃之助。
路飞：我们在这里等着，是因为我想把这个交给你！！摆什么将军架子呢，桃子！！就算你突然变大变厉害，我们也知道你的本性！！你是个傻瓜……还是个胆小鬼，但是……我把你当成我的小弟弟！！
桃之助拆封赠礼，看到一面巨大的草帽一伙旗帜。
桃之助：这是……你的旗子！！
路飞：要是你陷入困境，就想想你在海上冒险！！把这个挂在和之国里！！要是以后有什么危险的家伙来了，就给他们看这个！！告诉他们，要是敢动“我们的人”，就是跟我们作对！！！
路飞在说这些话的时候，阳光号上所有的伙伴们都在他身后。桃之助看向路飞，又哭了。
桃之助：我是……你们的人……？！
路飞：锦卫门！！大和！！桃子！！要是你们哪天打算成为海贼，我会来接你们的！！
大和：好耶！！
路飞：但是胆小鬼不许上船！！
桃子：呃呃
路飞：就交给你了，大和！！
大和：没问题！！
听完路飞的话，锦卫门笑了、大和对此十分兴奋，桃之助为此感谢了路飞。
路飞下令启航，剩下的船员们向桃之助告别，三人目送草帽一伙离开时。
桃子：锦卫门！！
锦卫门：我在？
桃子：总有一天……！！我要超越光月御田！！！
锦卫门：在下会伴您左右，见证那一天的……！！
大和：诶？超越我吗？
桃子：才不是！！
【5】
在海上，路飞、罗和基德的船将要驶离和之国的边界。
娜美：那就往白舞走吧！！那边有个可以让我们的船下去的正常港口
布鲁克：那太好了！！我们是攀过瀑布上来的，我还以为这次也要从瀑布冲下去呢！！
乔巴：太好了！
基德：哦——你们打算走正常港口啊，因为那样更“安全”是吧哈哈哈
很适合你们这些废物嘛
路飞、罗：更……安全……？！
草帽团：等等等等路飞？！安全些没什么错吧！别上当啊！！
红心团：咦？！船长你的表情怎么回事？！！走正常的港口没什么不好啊！！
路飞：甚平！让我来！！
草帽团：路飞不要啊！！
三艘船从和之国的瀑布坠落，三位船长这才发现走这条路可能不是个好主意。
红心团：不要啊啊啊啊啊！！
船长们：上了！！
所有人：不要啊我们会死的！！！
旁白伴随着三位船长的面部特写出现：【桃之助大人和锦卫门带来的罪犯们大显身手！！！他们像真正的“明王”一样大开杀戒！！即便是“龙王凯多”或“妖怪”大花魁也敌不过他们，最终决战之刻天都被劈开了！！！】
转至花之都的观众席。老师继续讲述着故事：……话分两头，大蛇身上起火了！！他们以为他已经死了，但他的恨意支撑着他！！他朝着日和公主扑过去！！然而刀光一闪！光月御田的二号家臣传次郎登场！！熊熊燃烧的最后一颗头也被砍落！！黑炭大蛇的故事就此落幕！！他们的上方雷鸣电闪，鬼岛和龙王凯多也随之坠落！！笼罩在和之国上空20多年的乌云……！！确实地逐渐消散……！！他们从都城的祭典音乐转过身……有东西动了！！！那竟然！是浑身火焰的大蛇……盯着他们张开了口……“黑炭家的怨恨……会永远诅咒这个国家……”日和公主回想着这个国家过去20年来受的所有苦！！眼中没有丝毫恐惧！！
【6】
当老师讲述故事时，一些分镜描绘了鬼岛发生的事情。老师继续说，日和公主把传次郎推到一侧，无畏地站在熊熊燃烧的大蛇面前。她手中拿着一把光月家徽的扇子，指向大蛇，心中充满了父亲、母亲和国家的回忆。
在一张大跨页中，百姓高喊说他们等的就是这里，老师鼓舞全员一起欢呼。日和（以小紫的打扮）对大蛇说：”烧得越旺越是正统的黑炭是也！”（注：这里应该对应的是御田越煮越入味，不知道日文原文是什么）
日和流着泪回忆御田，而大蛇就这样活生生烧死，听众们发出叫喊。艺伎们（户子也在其中）高声演奏三味线，老师说火祭将会继续，铭记这场始于逆新月相聚之港、最终得报的复仇。一场重振家族的血色故事。
我们看到一张桃之助和他的家人、朋友们站在一起的图（日和，赤鞘武士，大和，小忍，小玉），旁白：“这是一个过去声名显赫的武士们重获荣光的故事。千钧一发，事遂功成。”
桃之助，锦卫门，大和一起前往将军城堡，人们欢迎着他们。他们有一个新的任务要做。
桃之助：“我该把旗子放在哪？”
随着旁白的尾词，帷幕合起。
旁白：“现在小憩。来日若有机会，愿诸位再临。完。”
和之国第三幕以及全篇完。樱花飘舞在整个国境，自由地，迎向未来。
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