从医院出来，刚刚停了雨的街道上还有了水洼。雨巷里开出一辆黑色的轿车，车身上撒着星星点点的槐米，一个正值妙龄的女孩在前面袅袅婷婷地走着，一袭黑色的长裙，衬托着整个人苗条而出众。那女孩也太过于纤弱，细胳膊细腿，有些超出了大众的审美。
如今的看病说来也简单，人拿着缴费单，在机器上一检查，结果出来医生就可以下医嘱开处方了。不短的等待之后，机器里“吃吃吃”地吐出检查单和胶片，和上月中旬体检的结果一样，有点小问题。医生看过说三个月后再复查，不需要服点药吗？我看着眼镜后面那双眼睛。不需要，如果需要手术也要在达到手术要求的情况下才行。我有些唏嘘，非得等着那些小的结节长到一定的程度才能医治。医生强调在对身体没有影响的情况下，一切视为正常。
我不想诟病但有些失望，并非是一定要检查出什么来，而是总碰到类似的说法，现在不用管，等它大一大才能干预......人在活着的几十年里，真不容易，各种的不堪会找上身来，比如各种心血管病和增生类疾病，非得发病影响健康了才能治疗吗？母亲在生病的经历，让我一直记得七年前的那次检查，机器检查没问题，但母亲自己感觉有些不对劲，七年后，母亲得了脑梗，也恰恰是脑部的问题。
这样的经历令人无语，或许自己才是自己最好的医生。

学了这些.男神把我按在墙上……

你还在为不知如何追心仪男神、如何下手而烦恼吗？你还在为苦苦等待男生消息而烦恼吗？你还在为恋爱中没有主动权而烦恼吗？很多测测星座的宝宝们对于撩汉是存在严重的认知偏差的。年度情感拯救大招之星座撩男秘籍，即将夺目登场。

本人已经成功协助修复了几千对恋人，同时又是个善于总结的人，所以有了一堂这样的课程。虽然以下内容是教女生怎么搞定男生，但是我相信你们通过三连（点赞+评论+关注），让这个内给更多人看到的话呢，女生就学会了怎么撩动你们这帮男生，那你们这帮男生是不是脱单的几率就更大啦哈哈。所以不管你是男生还是女生，一定要给自己一个机会呦~

1.认识男人
2.了解男人
3.喜欢男人
4.吸引男人
5.设定男人
6.坐等被撩
7.测试男人
8.反撩男人
9.推拉男人
10.拿下男人
这是撩汉具体的干货步骤。由于篇幅关系，只讲框架，更多细节在直播间经常提到可以来关注收听。
第一步，认识男人。这是最重要的一点，认识谁，从哪里认识，认识多少。为什么很多测测宝宝们的理论很牛，但是实践却不行呢？理论是理想值，实践是变量值。再牛的理论也同样败给现实，没有认识的男人，去撩谁呢？所以，如何增大认识男人的数量，如何认识高质量男人，如何判断男人的性格，这都是学问。

第二步，了解男人。通过和男人的互动，以及看清男人星盘里金星和婚神星等给出的信息提示。你会基本掌握男人的信息。但是这些信息并不一定是真实的。这个时候你就需要老师们的各种方法来辅助帮你产生预判。当你鉴别后，就能解决了这个问题了。

第三步，喜欢男人。走到这一步，你心里应该已经有了喜欢的或者正在暧昧的对象。如果你遇到的是那种天蝎座，处女座特质较重的男人，就很容易落入对方的套路里，这个时候女人的心态很容易不稳，他为什么突然冷淡了？我要不要继续给他发信息？这些直播间都有解答。

第四步，吸引男人，永远记住再喜欢一个男人也不要主动去跪舔。而是要吸引他来追求你。高手在撩汉之前，都会进行长时间的吸引和铺垫，然而小白只会傻傻的表白，这就是差距。

第五步，设定框架。这一步，就是在设定游戏规则。如果你一开始就落入了对方的框架里，你只能被对方牵着鼻子走。只有你设定了规则，你才能在这局游戏中胜券在握。

第六步，坐等被撩。记住，撩汉的最高境界就是被男人撩，而不是撩男人！因为男人撩你，你才能去反撩，男人主动了，你才有机会撩到他。因为男人享受撩妹的过程，女人呢，享受被撩的过程，然而，撩汉的过程，其实就是在给男人制造他在撩你，他在得到你的感觉！

第七步，测试男人。记住，你再喜欢一个男人，都要测试一下这个男人合格不。如果不合格，你即使撩上了也毫无意义。因为我不希望看到各位宝宝后期痛苦压抑。只要前期老师们帮你把控好，就会不至于让大家遇人不淑。

第八步，反撩男人。当你和男人互动到一定程度的时候，你不应该一直被动。你应该反撩，让男人感受到你是一个有趣的女人。让他对你更有兴趣，他会更加喜欢和你互撩，关于具体如何撩，不同星盘配置有不同的撩法，再配合老师的独门撩汉干货秘籍，比如下面的这个你要学会的推拉技术。

火象星座相对还是比较容易搞定的，基本没有太大挑战性，其实火象就像个气球，来电很快，炸开更快，他凶你要更凶，比他更横，无论他们放什么狠话都不太容易真正做到。当火象问你在干嘛的时候，你可以先撩他一下，在想你啊。这样他们就开始琢磨开始在心理上升你的位置了，你若忽近忽远，忽冷忽热，琢磨不透，他们就忍不住了。

土象星座呢比较沉稳闷闷的，心理真正认可一个人喜欢上一个人需要时间的。虽然对方看起来很理性，好像很厉害的样子，但是在恋爱面前各个都像小学生。想和土象谈恋爱真的建议不要作，也不要因为对方的沉闷和慢热而自己胡思乱想。女生们有时候沉不住气会觉得他们说是不是不喜欢自己了。其实要知道一个土象啊他如果真的喜欢上一个女生反而是被动慢热而长情的，如果他反而很主动积极热情，那么你还真的需要注意了他是不是就是想要一次结束就换人的。

说完了土象呢，我们来说一说水象星座，他们这种类型就是润物细无声，你如果想要他们给你带来情绪价值的话他们很愿意，当然，他们也会使你的情绪更加跌宕起伏，于是 你就会在这个过程里陷入无法自拔，撩他们也很简单，要持续的有来有往的撩，不能像是对火象的那种撩完就跑。

风向呢，他们貌似忽冷忽热的，其实不然，因为他们知道自己想要什么，所以其实他们是会自动去找寻情感的，他们是那种能屈能伸的，虽然偶尔也会舔狗一下，会甜言蜜语的让你很开心，但是如果你没有用心仔细辨别的话，会很容易被他们带节奏的，最终什么也没得到。

第九步，推拉男人。这就是撩汉技术中精髓之精髓。推中有拉，拉中有推。掌握了中的奥妙。不怕，没有话聊。聊天节奏跌宕起伏。就好像一本永远不会完结的小说。让读者永远都想读下去。推就好像小说到精彩环节戛然而止。拉就是让对方感觉到高潮迭起。某种程度上说撩，撩汉高手就是一个优秀的导演加编剧加演员。有着导演一样节奏的能力。有着编剧一样的讲故事的能力。又会像演员一样，调动观众情绪。简称戏精。

第十步，拿下男人。如果一个男人喜欢迎合你的框架，符合你的标准。并且喜欢和你聊天。被你的推拉，搞得高潮迭起。恭喜你，你可以拿下他了，你毕业啦！

细胞无菌检测
无菌检测 sterility testing

----利用方法对细胞中细菌、真菌、支原体和病毒检验的过程。包括是否有污染及确定具体污染

一、一般要求
应根据细胞来源、潜在污染暴露史、细胞预期应用目的及所处环境等方面对细胞进行风险评估。考虑的因素包括但不限于以下几个方面:
a)应考虑细胞样本源。来自不同物种的细胞很可能携带潜在的微生物;
b) 应根据细胞的使用目的进行相关污染检测;
c)考虑细备和细胞培养的全周期所处的环境因素。根据暴露史评估可能的污染，如用于培养细胞的动物血清可能被特定的微生物污染。
依据风险评估判可能性最大的微生物污染类型，评估现有检验方法的话用性为待检测样本选择合适的方法。

二、方法选择
1.总体要求
在选择检测方法时,应了解该方法原理、微生物类型以及灵敏度等。
选择检测方法应依据预期目的、样本特性和处理因素。
选择的方法应经过验证或确认。

2.细菌和真菌
细菌是一大类普遍存在的单细胞微生物。细菌的直径通常只有几微米，其形状多样，如球状、杆状和螺旋状等。由于分布广泛、生长迅速和体积大小等特点，细菌以及酵母和霉菌是细胞培养中最常见的生物污染物。
细菌污染在培养物感染后几天内就很容易被肉眼观察到；受感染的培养物通常会变得浑浊，有时表面会有一层薄膜。经常还会出现培养基的pH值突然下降的情况。在低倍显微镜下，细菌以细小颗粒的形式出现在细胞之间，在高倍显微镜下观察可以分辨出单个细菌的形状。下面的模拟图像显示了贴壁培养的293细胞被大肠杆菌污染。
(1)依据需要选择适用干细菌和真菌的检测方法,如直接镜检法、膜过滤法、直接接种法、PCR法、MNP标记法、飞行时间质谱等。
(2)初步判断是否有细菌或真菌污染物,宜采用直接镜检法。
(3)若试验样品性质如可行，应首先选择膜过滤法进行检测。
(4)直接接种法对干细胞培养体系中添加抗生素的样品应考虑抗生素对细菌和直菌的抑制效应而影响检测的敏感性。
(5)利用PCR的方法检测细菌16SrRNA高保守区的序列来判断是否有细菌污染。利用PCR的方法检测细菌16SrRNA可变区的序列和MNP标记序列分析污染细菌的种属，利用MNPITS1或ITS2等序列判断感染真菌的种属。
(6)对微生物的组分进行检测可采用飞行时间质谱法等。

3.病毒
病毒是一种微小的感染性病原体，利用宿主细胞的结构进行繁殖。它们的体积极小， 难以在培养中被检测到，也难以从细胞培养实验室使用的试剂中去除。由于大多数 病毒对宿主有非常严格的要求，因此，它们通常不会对宿主以外物种的细胞培养物产生不良影响。但被病毒感染的细胞培养物会对实验室人员造成严重的健康威胁， 尤其是当实验室培养的是人类或灵长类的细胞时。要检测细胞培养物是否被病毒感染，可以使用电子显微镜观察、用抗体组合进行免疫染色、ELISA检测或是使用合适 的病毒引物进行PCR扩增。
(1)依据需要选择适用干病毒检测的方法,如直接镜检法、细胞形态观察及血吸附试验、体外不同细胞接种法、动物检查法、鸡胚接种检查法、PCR法、高通最测序法、基因片技术、荧光免疫法、酶联免疫法和血细胞凝集试验等方法。
(2)可利用光学显微镜观察病毒感染导致的细胞病变合胞体的形成:可通过电子显微镜观察大小和形态来识别病毒;可通过免疫电镜技术识别病毒。
(3)取细胞培养物的上清液或细胞培养物的裂解物，接种已知未污染病毒的相应细胞，检测是否出现细胞病变,或采用血细胞的吸附现象检测待检细胞培养物是否污染病毒。
(4)若采用动物检查法,可通过对普通动物或者含有特定病原体的动物，如小(包括乳鼠和成鼠)
豚鼠、仓鼠、家兔和非人灵长类动物等进行颅内、腹腔、鼻腔和皮下等部位接种,判断是否有病毒感染。
(5)分离黏液病毒、疱疹病毒和痘病毒宜采用鸡胚接种检查法。鸡胚应来自无特定病原(SPF)鸡群。
(6)采用PCR法检测病毒核酸高保守区的序列来判新是否有病毒污染。
(7)可采用高通量测序法鉴定病毒特异性序列。
(8)采用基因芯片技术检测病毒，需要合成与潜在污染的病毒基因组上的特定区域互补的核酸探针。
(9)用病毒抗原特异的抗体，通过荧光免疫反应用荧光显微镜检测细胞内病毒蛋白来判断特定的病毒污染。
(10)运用病毒抗原特异的抗体，通过酶联免疫反应检测细胞内或者上清液中的病毒蛋白来判断特定的病毒污染。
(11)通过凝集血细胞检测上清液中的病毒颗粒，如用鸡红细胞检测流感病毒。

4.支原体
支原体是无细胞壁的简单细菌，被认为是最小的自我复制生物。由于支原体非常小（ 通常小于1 µm），因此很难被检测到，除非它们达到了极高的密度，导致细胞培养物变质；在此之前，通常没有明显的感染迹象。一些生长缓慢的支原体可在培养物中持续存活，而不会导致细胞死亡，但它们可以改变培养体系中宿主细胞的行为和代谢。
(1)依据需要选择适用于支原体检测的方法，如培养法、指示细胞培养DNA染色法、PCR法、荧光原位杂交法、腺苷磷酸化酶活性检测法等方法。
(2)若对支原体检测结果报告时间没有急切要求的,宜选择培养法进行检测。
(3)利用DNA热色法,经荧光显微镜下观察看到有附着在细胞表面的大小不等，不规则的荧光着色颗粒则表明存在支原体污染。
(4)通过PCR法检测支原体16SrRNA序列保守区特异性序列来判定是否存在支原体。
(5)利用带光原位杂交法检测支原体,需要设计与支原体rRNA的高度保守区域互补的蒙光探针。
(6)腺苷磷酸化酶活性检测法不适用于本身腺苷磷酸化酶活性高的细胞。

5.过程控制
样品
(1)应根据所选方法,确定足够量的供试样品。
(2)应根据供试样品可能的稳定性考虑其储存条件。
(3)应实行严格微生物规范操作，避免取样讨程中微生物污染。

试剂材料和仪器设备用具
(1)应考虑设备、试剂和耗材对微生物检测的影响。
(2)检测过程中应使用标准物质。
(3)应根据样品尺寸选择适宜的容器，避免蒸发、确保无微生物、无毒、无浸出。
(4)应配备与微生物检测能力和工作量相适应的仪器设备，其类型、测量范围和准确度应符合检测要求。
(5)检测所用试剂应贮存在适的环境中，以确保试剂的稳定性。
(6)用于微生物检测的溶液、稀释剂或冲洗剂以及所使用的耗材若是作为微生物检测测试样品的成分，则不应具有抗微生物活性的特性。

操作
(1)待测样品的收集操作应确保无污染引人。
(2)应依据微生物的最佳生长条件和营养需求选择专门的分离方法进行检测。
(3)应根据微生物的生长速度,以获得足够数量的生物体。
(4)应考虑某些微生物种类和真菌是否形成孢子。
(5)应考虑细胞培养过程中受支原体污染时，支原体可能黏附在细胞膜上仅以最低水平浓度存在于培养上清液中。
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