《小普课堂十七》
[哆啦A梦花心]【免疫荧光】

[杰瑞]A sad experimenter：近期我正在做免疫荧光，实验的主要步骤包括：细胞涂片的制备、细胞的固定及通透、细胞封闭、一抗和二抗抗体孵育及荧光检测等。但是我却遇到了一些问题，如：细胞呈扁平状、背景过高、染色细胞过少等，小普你有没有一些经验可以分享给我呢？
[掌宝爱心]小普：前面小普跟主要分享了WB和IHC，那今天我们再来了解一下免疫荧光（IF）。

[伴我同行]免疫荧光（IF）是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体或抗原作为探针检查细胞或组织内的相应抗原或抗体。先来看一下免疫荧光步骤：

细胞准备：对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm,5min）2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。
固定：根据需要选择适当的固定剂固定细胞。固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月。PBS洗涤3×5 min。
通透：使用交联剂（如多聚甲醛）固定后的细胞，一般需要在加入抗体孵育前，对细胞进行通透处理，以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min，通透后用PBS洗涤3×5 min。
封闭：使用封闭液对细胞进行封闭，时间一般为30min。
一抗结合：室温孵育1h或者4℃过夜。PBST漂洗3次，每次冲洗5min。
二抗结合：间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h。PBST漂洗3次，每次冲洗5min后，再用蒸馏水漂洗一次。
封片及检测：滴加封片剂一滴，封片，荧光显微镜检查。

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光敏高分子材料是典型的功能性高分子材料之一。它的特征是能够吸收光能，在光能的作用下，其分子内或分子间发生结构变化。
光敏高分子材料最初主要用于印刷行业的照相制版，即所谓的光刻胶(Phstoresist)。1954年美国伊思曼·柯达公司首先推出了以肉桂酸与聚乙烯醇加成而成的感光材料，其后不久该公司又进一步推出了环化天然橡胶为原料，以二叠氮化合物引发交联反应的负片型光刻胶。鉴于这类材料品质不够稳定，不适于分辨力要求特别高的精密光刻加工之用(诸如一些精细的印刷电路特别是在硅片上进行线路腐蚀加工用的光刻胶)，于是转向采用以合成聚异戊二烯、聚丁二烯的环化产物为原料的光刻胶，现在这种光刻胶已成为发展集成电路、半导体元件、金属表而处理、玻璃及陶餐等材料的精密酸蚀加工等的不可缺少的材料。
此外，吸收光能而发生化学或结构变化后，仍在一定程度上保持弹性体性能的光敏橡胶材料，作为印刷行业中的挠性凸版、电子仪表等行业中的灌封材料、胶粘剂等，也具有很大的实用价值。

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【上海科学家设计新型骨靶向探针 骨质疏松早期监测有了高清“武器”】#科研动态# 近日，中国科学院上海药物研究所分子影像中心程震团队和陈浩团队合作，在《药物化学杂志》上发表最新研究成果，报道了利用小分子荧光探针在近红外二区进行#骨质疏松# 成像研究。该研究从抗HIV药物齐多夫定与结构类似药物司他夫定药代动力学的显著差异受到启发，选择齐多夫定特有的叠氮基团为可能的骨靶向基团，设计了一种不同于传统膦酸修饰的骨靶向探针，取得了良好的成像效果。详情https://t.cn/A6IVYduC