实验十二 正常人非显带染色体的核型分析
一、目的要求
1.熟悉正常人类染色体的数目及形态特征。
2.掌握非显带染色体的核型分析方法。
二、实验材料
正常人外周血淋巴细胞染色体制片 显微镜
三、实验原理
人类非显带染色体核型分析是染色体研究中的基本方法。它可根据染色体的数目、结构进行核型分析,而对染色体病患者做出初步的诊断。可在显微镜下直接做出判断,也可进行显微照相,经冲洗、放大后 ,根据照片进行分析。人类染色体的命名是根据丹佛 (Denver) 及伦敦 (London) 会议提出的标准,按照染色体的长度和着丝点的位置,将染色体配对并按长度依次排列、分组、编号。人体细胞含有46条染色体,即23对,其中22对为常染色体, 男、女相同,编为1-22号,另一对为性染色体,男、女有别, 男性为XY,女性为XX。根据着丝点的位置及其相对长度可将22对常染色体分为A - G7个组。性染色体可根据它们的形态、大小编入组内,X 染色体编入C组,Y染色体编入G组。
四、实验方法
核型：指某种生物个体或某一分类群(种、亚种或变种、居群)的一个体细胞全部中期染色体的数目、大小和形态等特征的总和。用来表述物种的特点和亲缘种属之间的关系。
核型分析：将待测细胞的染色体按照该生物固有的染色体形态特征和规定，进行配对、编号和分组，并进行形态分析的过程过程。
Denver体制：按照Denver会议(1960年)提出的染色体命名和分类标准，将人类体细胞的46条染色体按大小（根据长度递减顺序）、着丝粒的位置分成七组(A、B、C、D、E、F、G、)23对的排列，并将副缢痕和随体作为识别染色体的辅助指标。
人类染色体核型分析标准是丹佛 （Denver）体制（人类有丝分裂染色体的标准命名体制 ）。该体制规定：每一条染色体可通过相对长度、臂率和着丝粒指数等三个参数予以识别；
相对长度＝每条染色体长度/ (22条常染色体＋X的总长度) ×100%
着丝粒指数 ＝短臂长度/该条染色体长度×100%
臂率 ＝长臂长度/短臂长度
非显带染色体：染色体标本制作好后，不经处理直接染色，整条染色体均匀着色（相对于后面的显带染色体而言）。
人中期细胞染色体（数目2N=46，结构特点）
正常人体细胞染色体的观察与计数：
每位同学发一张正常人外周血淋巴细胞染色体制片，进行染色体观察和计数。染色体在细胞周期中经历着凝缩和舒展的周期性变化。在细胞分裂中期, 染色体高度凝缩, 从而轮廓、结构清晰典型 , 易于观察分析。（人染色体核型照片见教科书）每一中期染色体由两条染色单体组成, 借着丝粒而彼此相连。由着丝粒将每条染色单体分为两个染色体臂, 分别称为长臂(q)和短臂(p)。染色体臂上有较狭窄而浅染的区域称为次缝痕,D、G组染色体短臂末端连有一个球形小体一一随体。短臂和随体相连处为次缢痕。
各組染色体主要特征：
A 组 (1—3号)
1 号 : 是23对染色体中最大的中着丝粒染色体, 位于长臂近着丝粒处常见次缢痕。
2 号 : 比第一对短, 是最大的亚中着丝粒染色体。
3 号 : 是23对染色体中第二大的中着丝粒染色体。
B 组 (4—5 号 )
次大, 均为亚中着丝粒染色体, 两对染色体不易区分。
C 组 (6—12 号和X)
本组为染色体最多的一组, 且均为亚中着丝粒染色体。各对染色体间在形态上差别较小 , 故不易区分。但 6、7、9 和11为偏中部的亚中着丝粒染色体, 其余更偏亚中。 X 染色体的大小介于7、 8 号之间,有时常不等大。9号长臂近着丝粒处常出现次缢痕。由于这组染色体不易区分 ,准确的鉴别有待于显带。
D 组 (13—15 号 )
中等大小 , 为7 组中最大的近端着丝粒染色体。此组染色体的短臂常见随体。染色体大小依次递减 , 较难准确鉴别。
E 组 (16—18号)
16 号 : 为本组中最大的染色体, 中着丝粒, 长臂常见次缢痕。
17 号 : 是较小的亚中着丝粒染色体。
18 号 : 亚中着丝粒染色体, 是亚中着丝粒染色体中最小的一对, 短臂比17号短。
F 组 (19—20号)
为7组中最小的两对中着丝粒染色体。易与其它组区分, 但组内两对染色体不易区分。
G 组 (21—22号和Y)
此组染色体为7组中最小的近端着丝粒染色体, 短臂常有随体。 21号常比22号小。
Y 染色体也为近端着丝粒染色体, 但无随体, 并常比21、22号染色体大, 但其长度变异甚大。Y 染色体长臂常平行靠拢, 此点为Y 染色体与21、22号染色体鉴别的重要标志。
【思考题与作业】
1. 绘制一张正常人体细胞非显带中期分裂相染色体图。
见下图
2. 做出性别诊断并写出核型。
性别诊断为男性，核型式：46,XY
3. 简单总结一个正常人体细胞内各组染色体的非显带特点。
A组：1－3号。
1号：是最大的染色体，具有中央着丝粒（约在染色体全长的1/2处。以下简略为1/2、1/4、3/8等），在长臂近着丝粒处，偶可见到一个狭窄的次縊痕。
2号：较1号稍短，亚中着丝粒（3/8）。
3号：比2号短，为中央着丝粒（1/2）。
B组：4－5号。
4号、5号两对染色体较3号短，均为亚中着丝粒染色体（1/4）。在常规标本中，这两对染色体彼此之间不易区别。
C组：6－12号、X染色体。
本组染色体中等大小，在常规标本中各对之间不易区别。女性为16条，男性为15条，都为亚中着丝粒染色体。但其中X、6、7、8、11号的短臂较长；9、10、12号的短臂较短；X染色体的大小介于第6号与第7号之间。
注意：本组第6、X、7号染色体的短臂比上面B组的4号、5号稍长，切勿相混，以致分错组别。D组：13－15号。
13、14、15号均为近端着丝粒染色体，短臂末端都有随体，但不易见到，此三对染色体彼此之间不易区别。
E组：16－18号。
16号，为本组最大的一对，中央着丝粒（1/2），长臂上有时可见到次縊痕。
17号，较16号稍小，亚中着丝粒（3/8）。
18号，较17号稍小，亚中着丝粒（1/4），即短臂比17号稍短。
F组：19－20号。
19、20号均为中央着丝粒（1/2），呈字母X形，两对彼此之间不易区别。
G组：21－22、Y染色体。
21、22、Y染色体均为近端着丝粒染色体，21和22号均有随体，但不易见到。两对彼此之间不易区别。
Y染色体较21、22号略大、长臂互相平行而靠拢，无随体，着色亦较深，易与21、22号相区别
一、目的要求
1.熟悉正常人类染色体的数目及形态特征。
2.掌握非显带染色体的核型分析方法。
二、实验材料
正常人外周血淋巴细胞染色体制片 显微镜
三、实验原理
人类非显带染色体核型分析是染色体研究中的基本方法。它可根据染色体的数目、结构进行核型分析,而对染色体病患者做出初步的诊断。可在显微镜下直接做出判断,也可进行显微照相,经冲洗、放大后 ,根据照片进行分析。人类染色体的命名是根据丹佛 (Denver) 及伦敦 (London) 会议提出的标准,按照染色体的长度和着丝点的位置,将染色体配对并按长度依次排列、分组、编号。人体细胞含有46条染色体,即23对,其中22对为常染色体, 男、女相同,编为1-22号,另一对为性染色体,男、女有别, 男性为XY,女性为XX。根据着丝点的位置及其相对长度可将22对常染色体分为A - G7个组。性染色体可根据它们的形态、大小编入组内,X 染色体编入C组,Y染色体编入G组。
四、实验方法
核型：指某种生物个体或某一分类群(种、亚种或变种、居群)的一个体细胞全部中期染色体的数目、大小和形态等特征的总和。用来表述物种的特点和亲缘种属之间的关系。
核型分析：将待测细胞的染色体按照该生物固有的染色体形态特征和规定，进行配对、编号和分组，并进行形态分析的过程过程。
Denver体制：按照Denver会议(1960年)提出的染色体命名和分类标准，将人类体细胞的46条染色体按大小（根据长度递减顺序）、着丝粒的位置分成七组(A、B、C、D、E、F、G、)23对的排列，并将副缢痕和随体作为识别染色体的辅助指标。
人类染色体核型分析标准是丹佛 （Denver）体制（人类有丝分裂染色体的标准命名体制 ）。该体制规定：每一条染色体可通过相对长度、臂率和着丝粒指数等三个参数予以识别；
相对长度＝每条染色体长度/ (22条常染色体＋X的总长度) ×100%
着丝粒指数 ＝短臂长度/该条染色体长度×100%
臂率 ＝长臂长度/短臂长度
非显带染色体：染色体标本制作好后，不经处理直接染色，整条染色体均匀着色（相对于后面的显带染色体而言）。
人中期细胞染色体（数目2N=46，结构特点）
正常人体细胞染色体的观察与计数：
每位同学发一张正常人外周血淋巴细胞染色体制片，进行染色体观察和计数。染色体在细胞周期中经历着凝缩和舒展的周期性变化。在细胞分裂中期, 染色体高度凝缩, 从而轮廓、结构清晰典型 , 易于观察分析。（人染色体核型照片见教科书）每一中期染色体由两条染色单体组成, 借着丝粒而彼此相连。由着丝粒将每条染色单体分为两个染色体臂, 分别称为长臂(q)和短臂(p)。染色体臂上有较狭窄而浅染的区域称为次缝痕,D、G组染色体短臂末端连有一个球形小体一一随体。短臂和随体相连处为次缢痕。
各組染色体主要特征：
A 组 (1—3号)
1 号 : 是23对染色体中最大的中着丝粒染色体, 位于长臂近着丝粒处常见次缢痕。
2 号 : 比第一对短, 是最大的亚中着丝粒染色体。
3 号 : 是23对染色体中第二大的中着丝粒染色体。
B 组 (4—5 号 )
次大, 均为亚中着丝粒染色体, 两对染色体不易区分。
C 组 (6—12 号和X)
本组为染色体最多的一组, 且均为亚中着丝粒染色体。各对染色体间在形态上差别较小 , 故不易区分。但 6、7、9 和11为偏中部的亚中着丝粒染色体, 其余更偏亚中。 X 染色体的大小介于7、 8 号之间,有时常不等大。9号长臂近着丝粒处常出现次缢痕。由于这组染色体不易区分 ,准确的鉴别有待于显带。
D 组 (13—15 号 )
中等大小 , 为7 组中最大的近端着丝粒染色体。此组染色体的短臂常见随体。染色体大小依次递减 , 较难准确鉴别。
E 组 (16—18号)
16 号 : 为本组中最大的染色体, 中着丝粒, 长臂常见次缢痕。
17 号 : 是较小的亚中着丝粒染色体。
18 号 : 亚中着丝粒染色体, 是亚中着丝粒染色体中最小的一对, 短臂比17号短。
F 组 (19—20号)
为7组中最小的两对中着丝粒染色体。易与其它组区分, 但组内两对染色体不易区分。
G 组 (21—22号和Y)
此组染色体为7组中最小的近端着丝粒染色体, 短臂常有随体。 21号常比22号小。
Y 染色体也为近端着丝粒染色体, 但无随体, 并常比21、22号染色体大, 但其长度变异甚大。Y 染色体长臂常平行靠拢, 此点为Y 染色体与21、22号染色体鉴别的重要标志。
【思考题与作业】
1. 绘制一张正常人体细胞非显带中期分裂相染色体图。
见下图
2. 做出性别诊断并写出核型。
性别诊断为男性，核型式：46,XY
3. 简单总结一个正常人体细胞内各组染色体的非显带特点。
A组：1－3号。
1号：是最大的染色体，具有中央着丝粒（约在染色体全长的1/2处。以下简略为1/2、1/4、3/8等），在长臂近着丝粒处，偶可见到一个狭窄的次縊痕。
2号：较1号稍短，亚中着丝粒（3/8）。
3号：比2号短，为中央着丝粒（1/2）。
B组：4－5号。
4号、5号两对染色体较3号短，均为亚中着丝粒染色体（1/4）。在常规标本中，这两对染色体彼此之间不易区别。
C组：6－12号、X染色体。
本组染色体中等大小，在常规标本中各对之间不易区别。女性为16条，男性为15条，都为亚中着丝粒染色体。但其中X、6、7、8、11号的短臂较长；9、10、12号的短臂较短；X染色体的大小介于第6号与第7号之间。
注意：本组第6、X、7号染色体的短臂比上面B组的4号、5号稍长，切勿相混，以致分错组别。D组：13－15号。
13、14、15号均为近端着丝粒染色体，短臂末端都有随体，但不易见到，此三对染色体彼此之间不易区别。
E组：16－18号。
16号，为本组最大的一对，中央着丝粒（1/2），长臂上有时可见到次縊痕。
17号，较16号稍小，亚中着丝粒（3/8）。
18号，较17号稍小，亚中着丝粒（1/4），即短臂比17号稍短。
F组：19－20号。
19、20号均为中央着丝粒（1/2），呈字母X形，两对彼此之间不易区别。
G组：21－22、Y染色体。
21、22、Y染色体均为近端着丝粒染色体，21和22号均有随体，但不易见到。两对彼此之间不易区别。
Y染色体较21、22号略大、长臂互相平行而靠拢，无随体，着色亦较深，易与21、22号相区别
“无性无相不著空，即是如来真实性。”
我们在日常生活中不要停留在任何事情上面攀缘不息，而致烦恼不断，须事来就应，事过即止，心中不留丝毫痕迹，则方与修法相应。一切相都是缘会、虚而不实、无有自性的假相，切勿受骗而恋着不舍，蒙蔽了自性光明。所谓相者，空也。犹如空花水月，可望而不可即。若误以为是真实，竭力追逐，就不无烦恼了。因为人的欲望无穷，而所作事不可能有求必应。当求不到时，烦恼就不期然而然地来临了。所以修法第一须知诸法皆是无自性的假相不去追求。“不著空”就是诸法虽无自性，但假相不无，不是空无所有的顽空，而是不可得不可取的空幻相。我们修法既不可执有，也不可偏空，废弃一切事物而落于空亡，成为土、木、金、石，死水一潭，就不对了。就象希腊的大哲学家苏格拉底功夫做到极处，也知道这个世界一切都虚假不实，都不可得，但他偏空了，一切东西都不要了，都废弃了，连睡觉也睡在马路边的阴沟洞里。这样偏空也不对。我们须知相虽是假的，不可执著，但还是有用的，比如衣服可以御寒暖，房子可以避风雨，我们只随缘应用，既不执有也不著空，空有两面都不立，当中自然也没有了，这无所立就是中道义。我们明白了这一点，既不著空也不著有，而应缘接物，妙用无穷，尽我们的力量去做有益群众的事，方符圆融无碍的大乘佛教的真义。有人批评佛教偏空了，那是他们理解错了。佛教说的空不是空无所有的空，而是凡所有相都是不可得、求不到的空，并不是没有相，没有世界。就象西方极乐世界，不是很美好吗？有人不理解这个意思，就认为佛教有矛盾，《金刚经》说空，一点也没有；《弥陀经》说有，金沙布地，四宝围绕，七宝莲池，八功德水，样样都有。他不知道佛说的空是圆融无碍的空而不空、不空而空的妙有真空。讲真空者，是说我们的本体——佛性，是无相可见的。但是它能现起诸相，起诸妙用，所以不是顽空；说妙有者，诸相虽有，但非实有，都是随缘起用的假相。就象镜中所现影子，可见而不可得。在世间再惨淡经营，尔虞我诈，求得大量财宝，最后仍两手空空而去，什么也带不走，而造的业却带着走了。这造业受报也是非空非有，东西带不走，是空——非有；业掼不掉，带走了，就是有——非空。所以我们修法须两边都不住着，才符合亲证大道的真实义。证到非空非有、即空即有的妙性，“即是如来真实性”了。一切众生皆有此妙性，可怜我们不知道，追逐外境，贪得无厌，迷了自己，枉受生死轮回之苦。因而佛出世，唤醒我们，不要再作梦了。一切相都是我们心里的影子。既不能执有，也不可因诸相缘起无自性而偏空。大家如能醒悟，在日常生活中圆融无碍地起诸妙用，就自然入佛，亲证如来真实妙性了。
——《解脱歌》浅释
我们在日常生活中不要停留在任何事情上面攀缘不息，而致烦恼不断，须事来就应，事过即止，心中不留丝毫痕迹，则方与修法相应。一切相都是缘会、虚而不实、无有自性的假相，切勿受骗而恋着不舍，蒙蔽了自性光明。所谓相者，空也。犹如空花水月，可望而不可即。若误以为是真实，竭力追逐，就不无烦恼了。因为人的欲望无穷，而所作事不可能有求必应。当求不到时，烦恼就不期然而然地来临了。所以修法第一须知诸法皆是无自性的假相不去追求。“不著空”就是诸法虽无自性，但假相不无，不是空无所有的顽空，而是不可得不可取的空幻相。我们修法既不可执有，也不可偏空，废弃一切事物而落于空亡，成为土、木、金、石，死水一潭，就不对了。就象希腊的大哲学家苏格拉底功夫做到极处，也知道这个世界一切都虚假不实，都不可得，但他偏空了，一切东西都不要了，都废弃了，连睡觉也睡在马路边的阴沟洞里。这样偏空也不对。我们须知相虽是假的，不可执著，但还是有用的，比如衣服可以御寒暖，房子可以避风雨，我们只随缘应用，既不执有也不著空，空有两面都不立，当中自然也没有了，这无所立就是中道义。我们明白了这一点，既不著空也不著有，而应缘接物，妙用无穷，尽我们的力量去做有益群众的事，方符圆融无碍的大乘佛教的真义。有人批评佛教偏空了，那是他们理解错了。佛教说的空不是空无所有的空，而是凡所有相都是不可得、求不到的空，并不是没有相，没有世界。就象西方极乐世界，不是很美好吗？有人不理解这个意思，就认为佛教有矛盾，《金刚经》说空，一点也没有；《弥陀经》说有，金沙布地，四宝围绕，七宝莲池，八功德水，样样都有。他不知道佛说的空是圆融无碍的空而不空、不空而空的妙有真空。讲真空者，是说我们的本体——佛性，是无相可见的。但是它能现起诸相，起诸妙用，所以不是顽空；说妙有者，诸相虽有，但非实有，都是随缘起用的假相。就象镜中所现影子，可见而不可得。在世间再惨淡经营，尔虞我诈，求得大量财宝，最后仍两手空空而去，什么也带不走，而造的业却带着走了。这造业受报也是非空非有，东西带不走，是空——非有；业掼不掉，带走了，就是有——非空。所以我们修法须两边都不住着，才符合亲证大道的真实义。证到非空非有、即空即有的妙性，“即是如来真实性”了。一切众生皆有此妙性，可怜我们不知道，追逐外境，贪得无厌，迷了自己，枉受生死轮回之苦。因而佛出世，唤醒我们，不要再作梦了。一切相都是我们心里的影子。既不能执有，也不可因诸相缘起无自性而偏空。大家如能醒悟，在日常生活中圆融无碍地起诸妙用，就自然入佛，亲证如来真实妙性了。
——《解脱歌》浅释
我现在做着生意，投进去了一大笔钱，可是赚的钱很少，利润很低，而且还很累。
老师，我现在有两个儿子了，感觉身上的担子很重，压力很大，面对每天这么一点微薄的利润，很是无感，不知道我以后而事业什么时候才能发展好，什么时候能赚大钱呢？我的生辰八字是，男，丁卯，丙午，辛亥，戊戌，谢谢您。
从命局看，日主辛金生于午月不得令，坐下亥水泄身不利，年月木火相生也是克身之力，综合分析日主偏弱，取金土为喜用神。年月财官有利，且日主身弱，无力担财官，说明长辈对你帮助不大，生活压力大。
另外辛金受旺火所压制，代表身体容易受病疾之苦，建议多多加强体育锻炼，保持规律的休息，另外命局官杀克身不利，容易有钱财破耗之事发生，建议事业上稳定发展为主，切勿大面积投资造成钱财损失。
28-38岁癸卯运中，卯木偏财组合大运，但身弱难担财官，走旺财运容易破财，即便最终能赚钱到一定的钱财，但最后也是财来财去留不住，建议稳定发展为主，且不可因为贪财而破财，造成事业受阻钱财损失。
38-48岁壬寅运中，为依然是财旺忌神大运，这个时候欲望不要太大，生活稳定为主，切不可贸然投资，稳定求财方能长久。
48-58岁辛丑运中，为金土帮身的大运，事业顺利，钱财收入大涨，生活如意顺心。
58岁之后的庚子运中子水与命局刑冲并见，需要防止身体疾病的困扰，建议加强身体锻炼。
人生建议：人生在世，追求富裕是人的本分，那么如何更好的善待财富是每个人都要思考的问题，每个人都想赚大钱，但是并不是每个人都能赚得到的，即便有的人命带大财，但也要好运帮衬，贵人帮扶，这样才能事业顺遂。
那么也有的人，天生命中无财，即便无论多努力，也赚不到大钱，这也就是人们常说的有志难伸的意思，你的身弱财旺，找份稳定的工作，安稳上班，这样生活才能好起来。
逆势而行者，人生多悲惨。做生意能赚钱吗？吵得不可开交的夫妻会离婚吗？
这位女孩子将来会旺夫吗？女孩们何时能找到更好的婚姻？毕业后到哪里发展比较好？
这一切，都在你生日那天的五行命局里找到了确切的答案！
老师，我现在有两个儿子了，感觉身上的担子很重，压力很大，面对每天这么一点微薄的利润，很是无感，不知道我以后而事业什么时候才能发展好，什么时候能赚大钱呢？我的生辰八字是，男，丁卯，丙午，辛亥，戊戌，谢谢您。
从命局看，日主辛金生于午月不得令，坐下亥水泄身不利，年月木火相生也是克身之力，综合分析日主偏弱，取金土为喜用神。年月财官有利，且日主身弱，无力担财官，说明长辈对你帮助不大，生活压力大。
另外辛金受旺火所压制，代表身体容易受病疾之苦，建议多多加强体育锻炼，保持规律的休息，另外命局官杀克身不利，容易有钱财破耗之事发生，建议事业上稳定发展为主，切勿大面积投资造成钱财损失。
28-38岁癸卯运中，卯木偏财组合大运，但身弱难担财官，走旺财运容易破财，即便最终能赚钱到一定的钱财，但最后也是财来财去留不住，建议稳定发展为主，且不可因为贪财而破财，造成事业受阻钱财损失。
38-48岁壬寅运中，为依然是财旺忌神大运，这个时候欲望不要太大，生活稳定为主，切不可贸然投资，稳定求财方能长久。
48-58岁辛丑运中，为金土帮身的大运，事业顺利，钱财收入大涨，生活如意顺心。
58岁之后的庚子运中子水与命局刑冲并见，需要防止身体疾病的困扰，建议加强身体锻炼。
人生建议：人生在世，追求富裕是人的本分，那么如何更好的善待财富是每个人都要思考的问题，每个人都想赚大钱，但是并不是每个人都能赚得到的，即便有的人命带大财，但也要好运帮衬，贵人帮扶，这样才能事业顺遂。
那么也有的人，天生命中无财，即便无论多努力，也赚不到大钱，这也就是人们常说的有志难伸的意思，你的身弱财旺，找份稳定的工作，安稳上班，这样生活才能好起来。
逆势而行者，人生多悲惨。做生意能赚钱吗？吵得不可开交的夫妻会离婚吗？
这位女孩子将来会旺夫吗？女孩们何时能找到更好的婚姻？毕业后到哪里发展比较好？
这一切，都在你生日那天的五行命局里找到了确切的答案！
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